辣椒疫病生防菌的筛选、鉴定及其抑菌机理初探

采用平板稀释法和平板对峙试验,从武汉、荆州、宜昌和荆门等地的辣椒根际土壤中分离到185株细菌,筛选到1株具有高效拮抗辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici)的生防菌Bs04。通过形态学观察、生理生化指标测定、16S r DNA序列测定及进化树构建,确定菌株Bs04为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。Bs04对辣椒疫霉菌丝生长抑制率达80%,同时对烟草黑胫病菌(Phytophthora parasitica var.nicotiana)、棉花黄萎病菌(Verticillium dahliae)、棉花枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sb.vesinfectum)和黄瓜立枯病菌(Rhizoctonia solani)具有明显的抑制作用。利用光学显微镜观察Bs04对辣椒疫霉菌丝形态的影响,发现菌丝分支增多、顶端畸形、原生质浓缩及生长缓慢等现象,表明Bs04具有显著的抑菌作用。     

85种植物丙酮提取物的抑菌活性筛选

【目的】研究85种植物丙酮提取物的抑菌活性,以从中筛选到具有开发潜力的植物源杀菌剂。【方法】以番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)、辣椒疫霉病菌(Phytophthora capsici)、黄瓜炭疽病菌(Colletotrichum orbiculare)为供试病原真菌,采用生长速率法测定85种植物丙酮提取物的抑菌活性,进一步选择皿内测试中抑菌效果较好的植物样品进行活体组织和盆栽药效防治试验。【结果】离体条件及0.1g/mL剂量下,蓼子朴丙酮提取物对3种供试真菌的抑制率均达到65%以上,披针叶野决明、木姜子、木碱蓬、沙芥、崖棕的丙酮提取物至少对2种病原真菌的抑制率超过65%;活体条件下,蓼子朴、崖棕、木姜子、披针叶野决明丙酮提取物对番茄灰霉病的室内防效均达到50%以上,蓼子朴、脓疮草、白苞蒿、木碱蓬、木姜子、麻黄丙酮提取物对黄瓜炭疽病的室内防效均在50%以上。【结论】蓼子朴具有开发为植物源杀菌剂的潜力,披针叶野决明、崖棕抑菌活性值得进一步研究。     

2株内生拮抗细菌对灰霉病菌的抑菌活性研究

采用对峙培养法检测了2株内生拮抗细菌对灰霉病菌菌丝生长的影响,并观察了其发酵液对灰霉病菌孢子萌发及病菌生长的影响,同时测定了其发酵液、细菌悬浮液以及高温处理的发酵液在离体黄瓜上对灰霉病菌生长的抑制作用。结果表明：2菌株能强烈抑制灰霉病菌生长,其发酵液也能明显抑制病菌孢子的萌发和生长,且发酵液高温处理后仍具有较高的抑菌活性。在离体黄瓜片上检测菌株对灰霉病菌的抑制效果,结果表明,2菌株发酵液及其细菌悬浮液均能较好地抑制灰霉病菌生长。     

不同溶剂艾蒿提取液对黄瓜枯萎病菌的抑菌活性研究

利用甲醇、乙醇、乙酸乙酯和丙酮4种有机溶剂在相同温度和相同浓度下分别多次提取的方法提取了艾蒿中的抑菌成分,对经多次提取得到的不同有机溶剂的艾蒿提取液进行减压浓缩,得到浓度为0.5 g/m L的艾蒿提取液。通过对比在加入不同量的不同有机溶剂提取液的PDA培养基上病原菌的生长直径,测定了艾蒿提取液对黄瓜枯萎病菌的抑菌活性。结果表明,浓度相同时,艾蒿的乙酸乙酯提取液抑菌活性最好,且随着加入量的增加,抑菌活性逐渐增强。     

壳聚糖对6株植物枯萎病菌的室内抑菌活性测定

以6株植物枯萎病菌为实验材料,测定了不同含量壳聚糖对植物枯萎病菌抑菌活性的影响。结果表明:壳聚糖对6种植物枯萎病菌都有抑制作用,经壳聚糖处理后,植物枯萎病菌的形态出现畸变。在一定含量范围内,随着壳聚糖含量的增加,抑制作用增强,且在壳聚糖的φ=0.4%时,对6种植物枯萎病菌的菌丝生长、产孢量以及孢子萌发的抑制作用均达到最大;但是随着壳聚糖含量的继续增加,其抑制作用反而下降,这可能与高含量时壳聚糖分子之间通过氢键自相聚集造成有效含量的下降有关。     

香根草提取物对植物病原真菌的抑制作用

测定了香根草提取物对水稻纹枯病菌（Rhizoctonia solani）、香蕉炭疽病菌（Colletotrichum musae）、番茄早疫病菌（Alternaria solani）、黄瓜枯萎病菌（Fusarium oxgsporium）和葡萄炭疽病菌（Colletotrichum gloesporioides）这5种植物病原真菌的抑制作用。室内抑菌试验采用菌丝生长速率法测定了石油醚和乙酸乙酯萃取物对植物病原菌的抑制作用。结果表明,两部分萃取物对上述5种病原真菌均具有较好的抑制作用,其中对水稻纹枯病菌的抑制效果最好,EC50值分别为1.844和3.470 mg·mL-1。室外盆栽试验结果显示石油醚萃取物在浓度为0.025 g·mL-1时对水稻纹枯病菌保护防治效果达到66.70%,治疗防治效果为14.16%。该研究为植物病害防治和新型植物源杀菌剂的开发提供理论基础。     

拮抗细菌对香蕉枯萎病菌的离体抑菌活性研究

通过平板对峙培养,筛选出对香蕉枯萎病菌有拮抗作用的细菌6株：B05、B23、B44、B105、B133和B146,测定其抑菌带宽度达10～15mm。拮抗细菌的发酵液对病菌菌丝生长的抑制率为83．71％～88．76％,而经高温灭活的发酵液对病菌菌丝生长的抑制率为16．85％～33．48％;拮抗菌的非挥发性代谢产物对病菌菌丝生长的抑制率为74．72％～87．36％;挥发性代谢产物对病菌菌丝生长的抑制率为15．30％～37．64％。拮抗细菌发酵液在一定浓度范围内均能有效地抑制病菌孢子萌发,且浓度越高,抑制能力越强。拮抗菌株B05抑菌作用最稳定、抑菌活性最高,菌株B44抑制孢子萌发效果最好。     

拮抗香蕉枯萎病菌的海洋细菌TC-1发酵条件优化

通过对6种培养基进行筛选得到海洋拮抗细菌TC-1在BPDB培养基发酵的无菌发酵液对香蕉枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.cubense)的抑菌活性最好。在BPDB培养基基础上,通过正交试验优化培养基成分及用量,得到最佳配方为马铃薯200 g,牛肉膏20 g,葡萄糖20 g,玉米粉7 g、蛋白胨7 g,蒸馏水1 000 mL,pH自然;通过正交试验对发酵条件的装瓶量、培养温度、初始pH、发酵时间和转速5个因素进行了优化,得到最优发酵条件为:装瓶量20%,培养温度27℃,初始pH自然,发酵时间72 h,摇床转速200 r/min;在最佳培养基和最佳发酵条件下,TC-1的无菌发酵液抑菌圈直径为24.3 mm,与优化前抑菌圈直径20.7 mm相比,抑菌活性提高了17.4%。     

辣椒枯萎病生防菌株的筛选与鉴定

从辽宁省不同地区菜地采集土样,采用平板对峙法和抑菌圈法筛选对辣椒枯萎病菌(Fusarium oxysporum)具有拮抗作用的菌株.通过初筛得到具有拮抗作用的菌株12株,复筛出1株拮抗活性较高的菌株SY-17.通过含毒介质法对其发酵滤液进行毒力测定,SY-17发酵滤液EC50为114.50 μL/mL,对辣椒枯萎病菌表现出较好的抑制作用.通过生理生化试验、形态特征观察及16 S rDNA序列分析对其进行了种属鉴定,鉴定结果菌株SY-17属于解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens).     

冬青抑菌活性的初步研究

采用生长速率法,测定冬青(Ilex purpurea Hassk)不同器官的提取液对小麦纹枯病菌(Rhizoctonia cerealis)、番茄褐斑病菌(Helminthosporiurn carposaprum)、番茄早疫病菌(Alternaria solani)、黄瓜褐斑病菌(Corynespora cassiicolai)的抑菌作用.结果表明,当浓度为0.1 g/mL时,冬青不同器官的提取液对4种病原菌菌丝生长都有一定的抑制作用,但不同部位提取液的抑菌活性不同,其中冬青果实和枝条提取液的抑菌活性较弱,树皮提取液的抑菌活性次之,叶片提取液的抑菌活性较强.     

嘧菌环胺和缬霉威复配对5种作物病原菌的室内联合毒力

采用室内菌丝生长速率法,以草莓枯萎病菌、西瓜炭疽病菌、烟草猝倒病菌、葡萄霜霉病菌和月季灰霉病菌为作用目标,研究嘧菌环胺和缬霉威混配对5种病菌的联合毒力,为嘧菌环胺和缬霉威混配使用提供科学依据。结果显示,嘧菌环胺对5种病菌的有效中质量浓度(EC50)为0.19~1.92 mg/L,缬霉威对5种病菌的EC50为0.23~1.02 mg/L;当嘧菌环胺和缬霉威的混配比例为15∶1时,对草莓枯萎病菌的共毒系数最大,为217.70;混配比例为8∶1时,对西瓜炭疽病菌的共毒系数最大,为203.59;混配比例为3∶1时,对烟草猝倒病菌的共毒系数最大,为196.29;混配比例为1∶6时,对葡萄霜霉病菌的共毒系数最大,为201.98;混配比例为9∶1时,对月季灰霉病菌的共毒系数最大,为202.56。表明嘧菌环胺和缬霉威按适当比例混配对5种病原菌具有明显的增效作用。     

番茄灰霉病高效拮抗菌株鉴定及抗菌活性研究

采用形态特征观察、生理生化特性测定以及16S rDNA序列分析,对分离于淄博感染灰霉病的大棚番茄土壤样品中的6株拮抗细菌进行了分类鉴定和拮抗活性分析。结果显示,6株细菌形态均为直的杆状,有鞭毛能运动,能生成抗热的芽孢,芽孢椭圆形,革兰氏染色均为阳性,通过对菌株16S rDNA序列进行测定和同源性比对,发现与芽孢杆菌同源性达99%,结合生理生化特性确定B-01、B-02、B-03、B-04为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus),B-06为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),B-07为短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)。通过滤液抑菌活性测定,B-02、B-06滤液对病原菌有很强的抑制作用,并且在稀释不同倍数时均能抑制灰霉病菌的生长。     

中草药提取物对辣椒炭疽病菌和番茄灰霉病原菌的抑制效果

为了对无公害蔬菜病害的防治提供参考,采用生长速率法,将6种中草药提取物对辣椒炭疽病菌和番茄灰霉病菌的抑菌活性进行了测定。结果表明:6种中草药提取物中,黄岑提取物对辣椒炭疽病菌和番茄灰霉病菌的抑菌效果最好,EC50值最低,分别为8.56mL/L和8.65mL/L;大黄提取物对2种病菌抑菌活性最差,EC50值分别为104.32和269.43;苦参、金银花、板蓝根和补骨脂提取物的抑菌活性表现中等。     

虫草及相关真菌发酵产物对烟草黑胫病的抑制效果

为了探索真菌次生代谢产物对烟草黑胫病的抑茵活性,采用生长速率法,对来自全球的75株虫草及相关真菌菌株发酵液进行活性筛选,并对活性较强的白色生赤壳[Bionectria ochroleuca (Schwein.)Schroers&Samuels](四川)、细脚拟青霉[Paecilomyces tenuipes (Peck) Samson]、白色生赤壳[Bionectria ochroleuca (Schwein.)Schroers&Samuels](韩国)和尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum Schltd)4种发酵虫草液及虫草菌素进行不同浓度的室内毒力测定.结果表明:对烟草黑胫病菌菌丝生长具有抑制作用的有30株发酵液,占总筛选菌株的40.00％;4种真菌发酵液对烟草黑胫病菌具有较强的抑制作用,且随使用剂量的增大而增强;从蛹虫草液体发酵液中提取的虫草素对烟草黑胫病菌也具有明显的抑制作用,且随使用剂量的增大而增强,其有效抑制中浓度EC50=77.98 μg/mL.     

艾蒿提取物对草莓灰霉菌的抗菌活性研究

对艾蒿甲醇提取物进行了液-液分部萃取,并测定了甲醇提取物及其分部萃取物在不同浓度下,对草莓灰霉菌的离体抗菌活性。结果表明,甲醇对艾蒿的提取率为5.687%,其石油醚部、乙酸乙酯部、正丁醇部和水溶物分别占0.600%、1.139%、1.060%和2.942%。在艾蒿甲醇提取物及其石油醚分部萃取物、乙酸乙酯分部萃取物、正丁醇分部萃取物和水分部剩余物中,正丁醇分部萃取物的抑菌作用最强,对草莓灰霉菌的EC50为261.85ug/m l。复配艾蒿的甲醇提取物,制成浓度为5%和2%的溶液处理草莓果实,具有明显降低其采后病害的作用。     

银杏外种皮酚酸类物质的抑菌活性

以9种植物病原真菌和10种动物病原细菌为供试菌,采用菌丝生长速率法和带药培养基涂布法,测定了银杏外种皮中酚酸类物质的抑菌活性。结果表明,酚酸类物质对9种植物病原真菌均有抑制活性,对柿角斑病菌、稻瘟病菌、梨锈病菌、玉米炭疽病菌、柑橘疮痂病菌、甘蔗凤梨病菌、西瓜枯萎病菌、梨褐斑病菌和香蕉炭疽病菌的EC50在0.665 7~19.558 0 g/L,对香蕉炭疽病菌活性最高,对稻瘟病菌活性最低。银杏外种皮酚酸类物质对10种动物病原细菌也有不同程度的抑制活性,其中对巨大芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的抑菌活性最高,最低抑菌浓度(MIC)均为1.25 g/L。     

罗默碱的抑菌活性测定

在室内测定了罗默碱对8种植物病原真菌和11种动物病原细菌的抑菌活性。结果表明,罗默碱对梨锈病菌、柿角斑病菌、柑橘疮痂病菌、西瓜枯萎病菌、甘蔗凤梨病菌、香蕉炭疽病菌、玉米炭疽病菌和梨褐斑病菌8种植物病原真菌的菌丝生长有明显的抑制作用,质量浓度为0.5 g/L时,72 h(甘蔗凤梨病菌为48 h)的抑菌率分别为100.00%、77.45%、76.88%、100.00%、100.00%、85.71%、100.00%和59.21%;有效中浓度(EC50)分别为0.037 8、0.195 6、0.173 2、0.044 1、0.265 2、0.259 0、0.099 5和0.341 0 g/L。罗默碱对蜡状芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、溶壁微球菌、藤黄微球菌、伤寒沙门氏菌和痢疾志贺氏菌的抑菌圈直径为9.50～18.75 mm,而对普通变形杆菌、铜绿假单胞菌和大肠杆菌没有抑制作用。罗默碱对巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌、伤寒沙门氏菌和痢疾志贺氏菌的最小抑制浓度均为0.3 g/L,对蜡状芽孢杆菌的最小抑制浓度为0.7 g/L,对溶壁微球菌的最小抑制浓度为0.2 g/L。     

香豆素对灰葡萄孢霉菌的生长代谢及保护酶活性的影响

为探究香豆素对灰葡萄孢霉菌作用机理的影响,通过酶活试验、丙二醛（MDA)含量、葡萄糖含量变化试验,来分析香豆素对灰葡萄孢霉菌体内保护酶（SOD、POD、PPO）活性的影响,探究灰葡萄孢霉菌细胞代谢活动的强弱和细胞膜损伤程度变化。运用菌丝处理对照前后菌丝干重变化的方法来进行抑菌活性测定,以及用试剂盒测定的方法来进行酶活测定、MDA含量测定、葡萄糖含量的测定。结果表明,在液体培养基中香豆素对灰葡萄孢霉菌的EC₅₀为101 μg·mL^-1;香豆素对灰葡萄孢霉菌孢内的过氧化物酶（POD）、总超氧化物歧化酶（T-SOD）、多酚氧化酶（PPO）的最高抑制率分别为82.7%、66.67%、56.36%;经香豆素处理的菌丝体各时间点的丙二醛（MDA）含量明显>对照组,细胞膜透性显著增强,第72 h时,处理组MDA含量为16.53 nmol·mg^-1 prot,为对照组MDA含量的1.5倍;处理组葡萄糖含量始终<对照组,第36 h与对照组相比,处理组下降了45.63%。可见,香豆素可抑制灰葡萄孢霉菌的生长,致使细胞膜菌丝膜酯损伤,抑制灰葡萄孢霉菌酶的活性,降低细胞中葡萄糖的含量,影响细胞正常代谢生长,为灰霉病的防治提供一定的理论参考。