蓖麻组织培养技术探讨

以蓖麻的根、茎、叶作外植体分别在附加不同激素的MS培养基上进行培养，研究表明：茎段（侧芽或顶芽）在附加BA0.5mg/L,NAA0.001mg/L,水解乳蛋白(LH)10mg/L和氯化胆碱(CC)5mg/L的MS培养基上，芽的增殖率最高，可达200%，而且长势较好。     

棉花组织培养染色体制片方法的探讨及其染色体稳定性研究

本研究从预处理药剂、预处理时间、选材种类与时间等方面探讨了棉花愈伤组织染色体观察的制片方法，并对棉花愈伤组织的染色体稳定性进行了研究。结果表明，胚性愈伤组织是棉花染色体观察的最佳材料。用饱和对二氯苯水溶液预处理３￣４ｈ易获得较好的分裂相。棉花组织培养中存在着广泛的染色体变异，变异范围极大，但大多数偏向于少于正常染色体数（２ｎ＝５２条）的变异。随着培养时间的延长变异的频率及范围增大。不同基因型之间染     

不同培养条件对大花金挖耳愈伤组织生长及黄酮产量的影响

以大花金挖耳愈伤组织为材料,通过测定愈伤组织生长量、黄酮含量和产量等指标,研究了不同培养条件对大花金挖耳愈伤组织生长及其黄酮产量的影响,为大规模细胞培养生产大花金挖耳药用成分黄酮奠定基础。结果表明:不同外植体愈伤组织的黄酮含量为根>子叶>下胚轴,黄酮产量以根愈伤组织为最高;继代次数在3~12代愈伤组织的黄酮产量较为稳定;愈伤组织生长及黄酮生物合成的适宜培养温度为25℃;10min紫外线照射引起黄酮含量的提高;MS、B5、NT及其组合培养基中,大花金挖耳愈伤组织生长及黄酮产量随培养时间的延长,均表现出先升高后降低的趋势,在接种35-40d后愈伤组织黄酮产量达到最高值,其中NT培养基中黄酮产量高于其他培养基中愈伤组织黄酮产量。     

培养条件对荞麦愈伤组织生长及黄酮合成的影响

以荞麦无菌苗胚轴作为外植体诱导愈伤组织,研究了光照、蔗糖、L-苯丙氨酸和植物激素(2,4-D、NAA、6-BA)等因素对荞麦愈伤组织生长及黄酮合成的影响,为荞麦大规模细胞培养和工业化生产黄酮类化合物奠定基础。结果表明:光照对荞麦愈伤组织生长没有明显的影响,但光照和黑暗交替处理能促进愈伤组织黄酮合成;蔗糖质量浓度为4%,荞麦的愈伤组织生物量、黄酮含量和产量达到最高;L-苯丙氨酸能促进荞麦愈伤组织黄酮合成,但对愈伤组织生长有一定的抑制作用,L-苯丙氨酸浓度为150μmol.L-1,黄酮产量达到最高;在一定浓度范围内,3种植物激素都能促进荞麦愈伤组织生长和黄酮合成,但2,4-D和6-BA的效果要优于NAA,但2,4-D的效果最佳。促进荞麦愈伤组织生长和黄酮积累最佳的激素配比组合为1.5mg.L-12,4-D+0.6mg.L-16-BA。     

苜蓿组织培养高频率再生体系的建立

苜蓿组织培养的研究早期主要集中在多年生紫花苜蓿上，Saunders等首先从愈伤组织上获得了再生植株，其它一些苜蓿也通过细胞和组织培养获得了再生植株。黄绍兴等获得了紫花苜蓿原生质体转基因植株。然而，国内还未见有适宜于基因转化的高频再生组织培养体系的报道。本实验的目的在于建立苜蓿高频再生组织培养体系，为今后的基因转化改良苜蓿性状打下基础。     

紫花苜蓿组织培养体系的建立

通过外植体类型、生长素和细胞分裂素浓度等因素对紫花苜蓿愈伤组织诱导、分化影响的试验,建立了高效的紫花苜蓿组织培养体系,即以真叶为外植体,在MS+0.2mg/L2,4-D+0.01mg/LNAA+0.2mg/LKT培养基上进行愈伤组织的诱导,诱导率可达到100%,愈伤组织继代2～3次,然后在MS培养基上分化,分化率可达90%。分化苗转入1/2MS培养基进行生根,形成完整的组培苗。愈伤组织诱导的正交试验表明,2,4-D浓度是影响苜蓿愈伤组织诱导率的主要因素,其次是外植体类型、NAA浓度、6-BA浓度和KT浓度;对苜蓿愈伤褐化率影响较大的因素是外植体类型,其次是KT、2,4-D、6-BA、NAA浓度。外植体类型对愈伤组织诱导率和褐化率的影响均达到极显著水平(P0.01);生长素(2,4-D、NAA)对苜蓿愈伤组织的诱导作用大于细胞分裂素(6-BA、KT)。分化试验表明,紫花苜蓿愈伤组织分化的主要决定因素是愈伤诱导培养基的激素配比。     

仙人掌皮黄酮提取工艺优化

仙人掌皮黄酮提取可提高废弁物的资源利用和活性成分的开发.采用响应面分析法对乙醇体积分数、提取温度、提取时间和剂料比等提取条件进行了优化.结果表明,曲面回归方程拟合性好;优化工艺为乙醇体积分数67%、提取温度76°C、提取时间5.7 h、剂料比21.4 mL/g时,仙人掌皮黄酮得率为6.45%.经鉴定仙人掌皮中主要黄酮为异鼠李素-3-O-[2-O,6-O-双-α-L-鼠李糖基]-α-L葡萄糖苷、异鼠李素-3-O-(6'-鼠李糖) 葡萄糖苷.     

荷叶黄酮的乙醇提取工艺优化研究

研究了荷叶中主要生理活性物质黄酮的乙醇提取工艺。将传统的正交试验和人工神经网络方法相结合，提出了一种新的试验数据分析、处理和优化方法，可以充分挖掘试验信息，定量分析因素变化规律和寻找参数最优组合。该方法应用于荷叶黄酮的提取工艺优化中，获得了乙醇提取的优化工艺条件，即固液比1∶30、提取温度75℃、提取时间1 h和乙醇浓度50%。该优化工艺条件，在实际生产中应用，不仅减少了生产成本，降低了能耗，而且提高了黄酮的浸提率，取得了较好的成效。     

微波辅助提取多穗柯嫩叶黄酮工艺研究

该研究比较了微波辅助水提(MW)、微波辅助氢氧化钙溶液提取(MCW)、水提(W)、氢氧化钙溶液提取(CW)、乙醇回流(E)和甲醇回流(Me)等工艺提取多穗柯黄酮的效果,用正交设计筛选MCW工艺条件,并对材料预煮与微波处理时间的关系、氢氧化钙溶液浓度对提取效果的影响进行了探讨。结果表明,MCW提取效果明显优于W、CW、MW和E或Me;材料预煮和适当的氢氧化钙浓度可以明显提高MCW黄酮提取效果;研究得出的最佳工艺条件为：1.2%氢氧化钙水溶液,固液比1∶12,预煮时间5 min,高档功率微波处理25 min。此工艺提取率达到96%,提取物黄酮含量达到37%,是一种高效、无污染的提取多穗柯黄酮工艺。     

植物抗菌组培中抗菌剂应用的研究方法

本文以自行研发抗菌剂组合为例介绍抗菌组培（也称开放组培）中抗菌剂应用的研究方法。该抗菌剂与MS培养基组分、植物生长调节物质有较好相容性。抗菌剂使用的推荐浓度依具体情况而异,一定的培养基分装量,培养瓶容积越大,抗菌剂的剂量也越大,夏天使用剂量比冬天高得多,培养基添加生香蕉泥,抗菌剂使用量大幅增加。该抗菌剂对油麦菜种子萌发生长、苋菜和蝴蝶兰不定芽壮苗生根、紫花苜蓿体细胞胚的壮苗生根没有明显抑制作用。本文还就抗菌组培的概念、影响抗菌剂使用适宜浓度的因素、抗菌组培在植物组培不同阶段的效用和将来研究方向等问题进行讨论。     

木本经济植物苦丁茶组培增殖研究

本文报道了苦丁茶组培中获取无菌材料的方法及组培增殖中的主要影响因素。选择合适的材料、取材季节和灭菌手段可以较易建立苦丁茶的初级培养。试验表明，用市售白砂糖和自来水配制的ＭＳ培养基并添加细胞分裂素６－ＢＡ１．０～４．０ｍｇ·Ｌ－１，即可让苦丁茶快速增殖，而生长素ＮＡＡ对苦丁茶组培增殖没有促进效应。为加快繁殖速度并获取更多的可生根苗，较低的光照强度（ｌ０００ｌｘ左右）和较低的培养基硬度（０．２％琼脂）是必要的     

淀粉凝胶与植物组织培养I.玉米淀粉凝胶培养基对苹果砧木组培分化和生长的影响

本文报告了玉米淀粉凝胶取代琼脂凝胶组培苹果砧木珠美海棠和M26的研究结果，发现玉米淀粉凝胶培养基不但使组培成本降低30%以上，而且能提高两种植物的生根率达34%和生根诱导的同步性，生根培养时间明显缩短。在增殖培养中玉米淀粉凝胶培养基能明显促进M26砧木的芽分化和生长，叶片宽度增加和叶色加深，但株美海棠增殖培养初期芽苗高生长受到抑制，茎粗显著增加，绿色加深。     

不同植物激素对冬凌草愈伤组织增殖及褐化的影响

研究了不同种类的植物激素对冬凌草叶片诱导愈伤组织及褐化的影响,结果表明:培养基中植物激素的种类、浓度及其组合对愈伤组织增殖及褐变影响较大。适宜浓度的2,4-D、IAA和NAA生长素、KT和6-BA细胞分裂素及GA3,能不同程度地减轻或抑制褐化,促进愈伤组织的生长,其中以2,4-D(2.5) KT(0.2) GA3(0.2)效果最好。     

仔猪睾丸组织块生精细胞体外培养及鉴定初报

目的：建立仔猪睾丸组织块生精细胞爬片体外培养模型。方法：应用溴脱氧核苷尿嘧啶(5＇-Bromo-2＇-deoxyuridine, BrdU)免疫荧光技术检测生精细胞体外增殖分化情况；采用HE染色鉴定体外培养生精细胞分化程度。结果：结果表明体外培养第3天支持细胞开始游出睾丸组织块并贴壁；体外培养第4～8天睾丸组织块周围可见生精细胞，但未见明显增殖分化情况；体外培养第9～20天可明显观察到生精细胞增殖分化，间桥连接(gap junction)的生精细胞集落呈葡萄串或串珠状，并有精子细胞形成。结论：本培养体系能够提供睾丸组织块生精细胞增殖分化所需要的条件，在没有添加睾酮的情况下能够使非精子细胞分化为精子细胞。     

秤锤树叶片内生真菌的分离鉴定及其对植株生长的影响

本研究从秤锤树叶片中分离内生菌进行分子鉴定,并接种到无菌组培苗中研究其对植株生长的影响。研究结果显示,从秤锤树叶片中共分离获得7株真菌。扩增出的6个菌株经ITS测序,在NCBI网站上进行基因序列比对,鉴定出其中5株菌株均属于球毛壳菌（Chaetomium globosum）,1株属于子囊菌（As-comycete）。进一步实验表明：分离的菌株多数对组培苗的株高生长影响不大,可初步鉴定其为内生菌,其中的属于球毛壳菌的F和H菌株对无菌苗的株高有明显的促进作用。     

半夏叶柄组织培养一步成苗研究

为给半夏组织培养和工厂化育苗体系的建立提供参考,以半夏叶柄为外植体,研究了不同消毒措施以及不同浓度激素对诱导外植体一次性成苗的影响。结果显示,以75%乙醇消毒30 s,再用0.1%HgCl溶液消毒6 min的灭菌效果最好;最佳诱导培养基为MS+蔗糖30 g/L+琼脂8 g/L+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L。     

The Prospects of Tissue Culture and Genetic Engineering for Strawberry Improvement

Abstract

Strawberry shoot meristem cultures have been used for producing virus-free strawberry plants. Plantlet regneration from leaf mesophyll protoplasts, and Agrobacterium tumefaciens mediated genetic transformation, mark the beginning of strawberry improvement with biotechnologies. The use of biotechnological tools has a greater potential in producing strawberry plants with traits such as early maturation, frost and disease resistance, mite and nematode resistance, high yield, better quality, suitability for mechanical harvesting, shipping ability, ellgaic acid content, aroma compounds and cost-effective micropropagation. Gene identification and mapping with RFLPs or RAPDs would be desirable. Transgenic strawberries should be tested for their quality before releasing to the consumers.     

草莓茎尖组织培养技术研究

为建立完善的草莓组培快繁体系,解决种苗退化问题,以当地草莓主栽品种红颜茎尖为试材,设置0.1%升汞和0.1%升汞+2%吐温-80溶液2种外植体消毒处理,以MS为基本培养基,分别添加不同浓度6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)和萘乙酸(NAA)的6个诱导和继代增殖培养基、5个生根培养基,研究草莓茎尖外植体消毒最佳方式与时间, 筛选诱导、继代增殖及生根培养的最佳培养基。结果表明,0.1%升汞+2%吐温-80溶液处理8 min时草莓茎尖污染率及褐化率较低,萌发率最高,可达82.3%,为最佳的消毒方式。外植体在MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA培养基中,可诱导出更多的健壮不定芽,萌发率为83.3%,为最佳诱导培养基;适宜的继代增殖培养基为 MS+1.0 mg/L 6-BA +0.02 mg/LNAA,增殖系数为4.5%;1/2MS+0.01 mg/L NAA为最佳生根培养基,生根率高达100％。     

60Co-γ射线辐射对木薯组培苗的诱变效应

为探究⁶⁰Co-γ射线辐射对不同木薯品种组培苗的诱变效应,以2个木薯品种新选048和SC205离体单芽茎段为试验材料,以不同⁶⁰Co-γ射线辐射剂量(0、5、10、20、40 Gy)进行处理,观察比较不同辐射处理条件下组培苗的生长情况以及移栽后植株的生长状况。结果表明,随着⁶⁰Co-γ辐射剂量的增加,2个品种组培苗的生根率和萌发率均显著降低;新选048和SC205的半致死剂量分别为15.3 Gy和17.2 Gy。随着辐射剂量的增加,对继代组培苗及其生根苗的生长伤害程度逐渐加强,株高、生根率、移栽成活率等指标均显著降低。不同品种对⁶⁰Co-γ射线辐射的敏感程度存在差异,新选048的辐射敏感性更强。经⁶⁰Co-γ射线辐射后,2个木薯品种组培苗均出现叶柄颜色变异、叶形变异、黄化苗、矮化苗等不同程度的形态变异。经大田移栽后统计,新选048变异率为3.3%,SC205变异率为6.6%。对突变材料进行SSR分子标记检测发现,其中有3条引物可检测SC205对照与突变体材料在分子水平上的差异;5条引物可检测新选048对照与突变体材料在分子水平上的差异。本研究结果为利用⁶⁰Co-γ射线辐射诱变创造木薯新种质以及木薯诱变育种奠定了一定的理论基础。