影响"扬稻6号"成熟胚愈伤组织再生植株的因子

以水稻中籼品种“扬稻6号”的成熟胚为外植体材料诱导愈伤组织发生,在愈伤组织继代培养阶段,研究山梨醇、甘露醇、脱落酸、蔗糖和麦芽糖对愈伤组织分化植株能力的影响作用,并探讨在愈伤组织诱导阶段添加6－苄基氨基嘌呤对后期愈伤组织分化植株能力的影响程度。试验结果表明,在愈伤组织继代培养基中添加30g/L山梨醇,3－5mg/L脱落酸和在愈伤组织诱导培养基中附加0.2mg/L 6-苄基氨基嘌呤有利于建立起较高频率的植株再生体系,愈伤组织经过继代培养后其植株再生的频率保持在50％左右。     

苏丹草幼穗离体培养植株的再生技术

以苏丹草幼穗为外植体材料,研究幼穗发育期以及配比的激素组合对愈伤组织诱导发生、生长状态及其绿苗分化能力的影响。结果表明:长度为1.5~5.0 cm的幼穗,在愈伤组织诱导培养基中添加3.0 mg/L 2,4-D和0.2 mg/L KT,诱导频率达80%~90%,继代培养基中仍添加3.0 mg/L 2,4-D 0.2 mg/L KT,愈伤组织增殖速度快,且保持植株再生的能力;在愈伤组织分化培养基中添加2.00 mg/L 6-BA 0.01 mg/L NAA或添加2.00 mg/LCPPU 0.01 mg/L NAA,经继代培养3~5代的愈伤组织绿苗分化率保持在50%以上;在继代培养中选择外表呈白色、干燥、紧密、颗粒状的愈伤组织,是提高其再生植株能力的有效方法。     

超甜玉米自交系成熟胚愈伤组织诱导及再生方法研究

研究超甜玉米自交系1132成熟胚愈伤组织诱导和植株再生频率的影响因素,丰富诱导愈伤组织的外植体来源。以1132成熟胚为材料,通过比较研究蔗糖、脯氨酸、2,4-D等因素对愈伤组织诱导率和分化再生的影响,确定适合1132成熟胚外植体愈伤组织诱导和再生的方法。结果表明,蔗糖浓度40g/L,脯氨酸1.4g/L、2,4-D浓度为4 mg/L的诱导培养基上愈伤组织出现最早,且愈伤组织诱导率最高,达到75%。在继代培养基中2,4-D浓度为2 mg/L,其他相同的条件下,愈伤组织继代性最好,最易产生胚性愈伤组织。植株再生培养通过含60g/L蔗糖的MS培养基培养2~3周,后转入含30g/L蔗糖的MS培养基培养再生植株的方法最好,可实现芽和根的同步再生。利用1132成熟胚诱导产生愈伤组织,并分化再生植株是对幼胚再生体系的有效补充,可以克服玉米基因工程育种研究中幼胚受季节限制的不利条件,丰富甜玉米基因工程育种中外植体的来源。     

水稻愈伤组织状态的调控

本文研究了胚性愈伤组织继代保持及提高植株再生能力的措施，试验结果表明：脯氨酸对水稻愈伤组织的生长及分化有明显的促进作用，对长期继代的愈伤组织有恢复分化能力的作用。不同类型水稻的愈伤组织对总氮量和之比有不同要求，籼稻的不宜高，粳稻在低培养基中多次继代后，经高刺激，能增加植株再生能力。     

小麦成熟胚再生体系影响因素的研究

[目的]研究小麦离体培养的影响因素,探索小麦成熟胚愈伤组织诱导、继代、分化和植株再生的有效方法,建立一套成熟的植株再生体系,为进一步转基因研究奠定基础。[方法]采用河南的5个不同小麦品种,经小麦种子消毒,无菌取胚,然后接入诱导培养基进行愈伤组织诱导,愈伤组织再经继代培养、分化培养以至小麦植株再生。通过对它们浸种时间和成熟胚离体培养过程的观察,研究了不同预处理时间和植物激素,如2,4-D、ABA、KT、IAA和NAA,对小麦成熟胚愈伤组织在诱导、继代、分化和植株再生方面的一些影响。[结果]15h的浸种时间效果好;4.0mg/L2,4-D有利于愈伤组织形成;在继代培养基中添加0.3mg/LABA有利于小麦致密愈伤组织的诱导及再生能力的保持;KT和6-BA对提高芽的分化有显著作用;附加浓度1.5mg/LNAA和0.2mg/LIAA的1/2MS培养基可有效促进生根。[结论]浸种时间、基因型对小麦愈伤组织的继代、分化和再生有很大的影响,添加一定的外源激素有利于提高其植株的再生频率。     

几种因素对高代水稻花药愈伤组织同工酶及分化的影响

随着抗性细胞突变体筛选的研究的深入,继而产生的突出问题是随着继代培养时间的延长,离体培养组织和细胞的分化及再生植株的能力逐渐下降以至完全消失。关于如何提高高代愈伤组织分化频率,国内外已有许多报道,主要涉及后代染色体的变化,至于激素对酶的影响在高代中尚未见到,为此,我们以高代水稻花药愈伤组织(继代15次培养600天直至继代19次培养天数720天)为试材,研究了不同激素、琼脂、甘露醇对高代愈伤组织分化的影响,以及在分化过程中呼吸强度和同工酶的变化。     

玉米幼胚体细胞无性系植株再生及其移栽技术的研究

以生产中广泛应用和具有利用前途的 CEE尖端齐等19个玉米自交系为供试材料,进行幼胚培养,通过愈伤组织的诱导,继代,分化和植株再生等阶段,已获得再生植株及其后代种子,对再生植株及其后代进行了观察,本项研究对影响玉米幼胚愈伤组织的诱导,分化,继代、植株再生及其移栽和正常化生长的因素进行了分析,其中CEE自交系胚性愈伤组织已继代14个月以上,仍能保持其胚性和分化能力,为利用体细胞无性系进行抗性变异体筛选的研究,建立了一个有效的再生系统。     

玉米茎尖培养诱导愈伤组织及植株再生的研究

以黑龙江省8个优良玉米自交系为试验材料,研究了玉米茎尖培养诱导愈伤组织及愈伤组织继代培养和植株再生的效果。结果表明,不同培养基和基因型的愈伤组织诱导再生能力差异大,单一培养基效果不如复合培养基。2,4-D和6-BA的浓度及比例是影响愈伤组织诱导的重要因素。8种基因型中只有3种成功获得愈伤组织诱导、继代和分化植株,另有3种基因型获得水性愈伤但不能继代,2种基因型未产生愈伤。     

继代培养对水稻胚性愈伤组织染色体变异及体细胞无性系变异的影响

以79106、金早6号、中花9号和南粳35等4个水稻品种的成熟胚胚性愈伤组织为材料,研究继代培养对胚性细胞染色体的数量和结构变异及体细胞无性系农艺性状变异的影响,结果表明,经60d继代培养后,胚性细胞染色体变异频率明显高于未继代培养的愈伤组织,并出现多种变异类型,愈伤组织继代培养后的再生植株农艺性状变异范围明显增大,但以继代培养天数不超过60 d的愈伤组织再生植株较之其它处理不仅有较丰富的变异类型,而且有足够大的群体供选择。     

粳稻成熟胚高频率再生因素的研究

以水稻成熟胚为外植体,就不同基因型、不同激素浓度对愈伤组织诱导、继代及分化的影响进行研究,并建立了水稻成熟胚高频再生系统。研究结果表明:NMB、NB、CC为较适宜的培养基,可以用于北方粳稻愈伤组织的诱导;在诱导过程中加入2,4-D1～2mg/L有利于愈伤组织的诱导;在继代的过程中加入甘露醇4g/L可明显改善愈伤组织的质量;诱导分化时,进行预分化-分化培养可以显著提高分化率。     

从长期继代培养的胡萝卜愈伤组织原生质体获得再生小植株

从继代3年以上的胡萝卜(Daucus carota var.sativa Dc.)非胚性愈伤组织酶解分离出大量成活的原生质体,在 DPD、V—KM 和 C81V 培养基中液体浅层培养,获得微愈伤组织后,在固体 N_6和 MS 培养基上分化培养,获得再生小植株。证明长期继代培养的胡萝卜愈伤组织仍具有再生植株的能力。     

水稻幼穗继代培养体细胞无性系变异及其在育种上的应用C

以5个籼稻品种的幼穗为外植体，采用愈伤组织继代培养方法诱导水稻体细胞无性系变异，结果表明：继代培养对愈伤分化有负效应；继代培养对再生植株农艺性状产生不同程度的变异，两次继代培养有利于无性系产生矮秆、早熟等性状变异；多数变异可以真实遗传，可有效获得理想的突变体。并从幼穗继代无性系变异株系中选育出苗头品种。     

水稻幼穗继代培养体细胞无性系变异及其在育种上的应用C

以5个籼穗品种的幼穗为外植体，采用愈伤组织继代培养方法诱导水稻体细胞无性系变异，结果表明：继代培养对愈伤分化有负效应；继代培养对再生植株农艺性状产生不同程度的变异，两次继代培养有利于无性系产生矮秆、早熟等性状变异；多数变异可以真实遗传，可有效获得理想的突变体。并从幼穗继代无性系变异株系中选育出苗头品种。     

两种水稻优良亲本高频离体再生系统的建立

以杂交水稻2个优势亲本的成熟胚为材料，研究影响其愈伤组织诱导、继代和再生的相关因素。结果表明：培养基中较高比例的硝态氮和氨态氮之比、较丰富的无机微量元素以及提高维生素B1和肌醇含量可显著提高愈伤组织的诱导和培养效果；在合适的2，4-D浓度下，添加其他外源激素不能显著提高愈伤组织的诱导率，但可改善愈伤组织的胚性生长状态；交替使用不同的培养基成分和激素浓度配比可使长期继代培养物保持胚性状态；预分化和干燥处理能有效提高植株再生的频率和质量。     

黄瓜胚性愈伤组织的诱导保存和再生

【目的】对黄瓜胚性愈伤组织的诱导保存和再生进行研究,为黄瓜高频率遗传转化奠定基础。【方法】以欧洲温室型黄瓜自交系14-1子叶节为外植体,在MS培养基上附加1.5 mg/L 2,4-D,进行25 d的胚性愈伤组织诱导培养后,取胚性愈伤组织在添加30,60,90,100,110,120,130,140和150 g/L蔗糖及1.5 mg/L 2,4-D的MS培养基进行继代培养,每30 d继代1次,观察胚性愈伤组织的褐变情况及胚性分化能力,并用电子天平在超净工作台中记录胚性愈伤组织质量的变化。继代培养60 d后,将保存的胚性愈伤组织和体细胞胚移至含1.5 mg/L 2,4-D的MS培养基上,待出现体细胞胚后移至MS培养基进行萌发,观察再生小植株的生长情况。【结果】将欧洲温室型黄瓜自交系14-1的子叶节,接种到附加1.5 mg/L 2,4-D的MS培养基上进行诱导培养后,子叶节一端的愈伤组织集中聚集于下胚轴处,之后有黄色胚性愈伤组织产生。在继代培养过程中,当培养基中添加的蔗糖为60～150 g/L时,胚性愈伤组织能保持胚性愈伤状态达60 d。之后将继代培养60 d后的胚性愈伤组织转接至附加1.5 mg/L 2,4-D的MS培养基上,在蔗糖质量浓度为60 g/L条件下保存的胚性愈伤组织可诱导出正常胚状体,且能形成健康小植株。【结论】由黄瓜子叶节诱导出的胚性愈伤组织可在MS+60 g/L蔗糖的培养基上保存达60 d,之后能正常萌发形成胚状体,进而形成正常小植株。     

长期继代对棉花胚性愈伤组织体胚发生能力及再生植株变异的影响

植物细胞在离体培养时，再生频率和再生植株的质量与培养时间密切相关。为探讨棉花胚性愈伤组织长期继代的可行性和适宜的继代策略，以川棉239胚性愈伤组织为材料，观察其在继代过程中颜色、质地、生长速度和体胚发生能力的变化，体胚及再生植株畸形变异的发生频率。结果表明，通过在MSB＋ET0．1mg/L＋KNO31．9g/L和MSB＋KT0．1mg/L IAA0.1mg/L两种培养基上交替培养并结合选择性继代，川棉239体细胞胚胎发生能力虽然可保持较长时间，但随着继代时间的延长，再生能力却逐渐下降，畸形胚发生频率和再生植株不育率逐渐升高。棉花胚性愈伤组织的继代时间不宜超过1．5年。     

影响羊草愈伤组织分化因素的研究

[目的]探索影响羊草愈伤组织分化及再生的因素,为羊草组织培养及转基因受体系统建立提供理论依据。[方法]选取5种类型羊草种子进行组织培养,研究在愈伤组织继代、分化培养过程中培养基类型、激素种类和浓度、低温处理等因素对分化率的影响。[结果]不同种群的羊草愈伤组织分化率差异极大;在愈伤组织诱导和继代过程中添加2.0mg/L2,4-D有利于羊草胚性愈伤组织再生能力的保持;继代培养时,不同种类培养基对分化率影响不大,低温处理不能提高长时间继代培养愈伤组织的分化率;分化培养时,外源激素对提高羊草分化率作用不大。[结论]影响羊草愈伤组织分化率的因素主要包括种质资源以及诱导和继代过程中的激素浓度。     

玉米耐低磷细胞的筛选及再生植株后代的研究

以玉米自交系齐319、掖515和掖502为材料,取其幼胚诱导胚性愈伤组织并继代培养.将继代培养半年左右的胚性愈伤组织转移到去掉磷酸盐的培养基上进行筛选.在连续筛选5代后,挑出生长较好的胚性愈伤组织进行分化.再生植株移栽成活后自交结实,子一代通过砂培进行低磷胁迫处理,观测植株生长状况、缺磷症状出现的时间及植株移栽后的成活率.初步结果表明,再生植株后代中有21%的株系与对照相比表现出耐低磷特性;在同一株系内,不同个体在耐低磷特性上有一定差异.     

玉米体细胞抗盐突变体的筛选及耐盐性鉴定

玉米幼胚所诱导的愈伤组织在继代繁殖后,用NaCl作选择剂,在含质量浓度10～20g·L-1NaCl的N6筛选培养基上连续筛选3代,再转移到无盐的继代培养基上培养3代,得到耐20mg·L-1的抗盐愈伤组织变异体.对愈伤组织相对生长量和游离脯氨酸含量等指标的测定表明,该愈伤组织变异体是耐盐的.耐盐愈伤组织变异体在分化培养基上可分化出再生植株,在10g·L-1NaCl胁迫下耐盐变异体再生植株相对电导率小于对照再生植株,而可溶性糖含量高于对照植株.耐盐株自交得T1代种子,在不同质量浓度NaCl胁迫下测定其发芽率,耐盐变异体后代种子发芽率均高于对照种子发芽率,说明变异体的耐盐性是可遗传的.     

杉木愈伤组织的继代增殖与植株再生

通过建立杉木愈伤组织增殖和植株再生体系,旨在为杉木体细胞杂交和遗传转化等基因工程研究提供高效受体系统。以杉木子叶、下胚轴诱导的愈伤组织为材料,研究了不同激素组合及浓度、培养条件对愈伤组织的继代及植株再生的影响。结果表明:不同激素组合及浓度对愈伤组织的继代有显著影响,2,4-D有利于降低继代过程中的褐化现象,NAA、KT有利于愈伤组织的继代增殖。DCR+6-BA 1.5 mg·L~(-1)+KT 1.0 mg·L~(-1)+NAA 1.0 mg·L~(-1)和DCR+6-BA 2.0 mg·L~(-1)+KT1.5 mg·L~(-1)+NAA 1.5 mg·L~(-1)是愈伤组织继代增殖的最佳培养基。暗培养和800 lx光照强度是愈伤组织继代的最佳培养条件。愈伤组织在继代30~45 d期间内需转移至新培养基。愈伤组织在MS+6-BA 0.5 mg·L~(-1)+KT 1.5 mg·L~(-1)再生芽诱导率最高,诱导率为80%。经过一次继代的愈伤组织比未经过继代的单个再生芽数多,平均可达3~4个。再生苗在1/2MS+IBA 1.0 mg·L~(-1)培养基中生根率高达89.5%。