核酸探针诊断技术及其应用

核酸探针(基因探针)诊断技术是随着基因工程技术的发展而发展起来的第三代诊断技术。它是利用核苷酸碱基序列互补的原理,以标记的已知核酸片段,通过核酸杂交技术,来检测和鉴定样品中的未知核酸。与传统的诊断方法相比,它具有快速、简便、敏感性高、特异性强等特点,目前正在传染病诊断、流行病学调查、动植物检疫、肿瘤和人类遗传病的早期检测中得到应用。     

松材线虫杂交探针制备与检测技术

选用松材线虫特异引物对M03F2/R1(Fl:5'-CGGGT CATGG CTGGA GGTAT CGT-3',R1:5'-TCGCT CAATG GCAAA TTCTT CGTA-3'),以Dig-11-dUTP代替部分dTTP,采用PCR技术,直接扩增松材线虫特异片段作为松材线虫地高辛探针.结果表明,地高辛探针长...     

两种非放射性标记DNA探针检测菊花矮化类病毒的比较

以含菊花矮化类病毒（ＣＳＶ）全长序列的重组质粒ＰＵＣ为模板ＤＮＡ，加入通用引物，在聚合酶链式反庆系统中制备地高辛标记的ＣＳＶ ｃＤＮＡ探针和生物素标记的ＣＳＶ ｃＤＮＡ探针。用这两种探针检测感染菊花矮化类病毒的菊花样本均为阳性反应，而检测健康对照的结果为阴性。采用ＰＣＲ－微量板杂交法，地高辛标记的探针检测ＣＳＶ ｃＤＮＡ的吸光值明显高于生物素标记的探针检测的吸光值，采用斑点杂光法，地高辛标记的ｃＤ     

肠道传播的非甲非乙型肝炎病毒(ET-HEV)核酸探针制备及临床诊断研究初报

病毒性肝炎给人类造成的危害是众所周知的。传统的分类法将肝炎病毒分为甲型、乙型、非甲非乙型和丁型四类。近年发现,非甲非乙型病毒(NANBHV)有两种类型:一类经血液传播(致输血后肝炎),另一类经肠道传播,1989年,Choo和Rcycs等分别将二者克隆,并命名为丙肝病毒(HCV)和戊肝病毒(HEV)。因此,新命名法特别是在1989年9月东京会议正式命名法确定后,将肝炎病毒分为HAV、HBV、HCV、HDV、HEV。在世界范围内,HEV肝炎流行多发地见于中国(特别是新疆)、缅甸、墨西哥、     

用核酸探针技术检测脊尾白虾体内的白斑综合症病毒

用斑点杂交和原位杂交检测了从病虾池捕获的脊尾白虾体内的WSSV。8尾脊尾白虾的斑点杂交检测阳性率为100%;脊尾白虾胃的上皮组织和结缔组织、位于鳃区头胸甲处的角化上皮、头胞甲反缘与虾体相连的角化上皮、结缔组织、附肢外的角化上皮、鳃丝的柱状上皮及其腔隙内的血淋巴、肝胰腺小管间的上皮组织及其血窦内的血淋巴、头胸甲的肌肉、造血组织、脊尾白虾精荚之结缔组织细胞、卵巢的结缔组织及其滤泡细胞原位杂交呈阳性。以上结果进一步证实了脊尾白虾是WSSV的天然宿主。     

RV野毒株的鉴定,毒力实验及其核酸探针的研究

对从我国不同地区、不同动物分离的３个疑似狂犬病毒分离物８２０２、ＢＲＶ、ＭＲＶ和无毒疫苗株ＳＲＶ９进行了ＥＬＩＳＡ和核酸探针的鉴定。同时，对它们的致病性和毒力进行了测定。结果表明，３个分离物均为狂犬病病毒，其毒力以鼠源ＭＲＶ最强，牛源ＢＲＶ最弱，同地下同动物分离的ＢＲＶ和ＭＲＶ毒力差异很大。疫苗株ＳＲＶ９对１２ｇ小鼠无致病性，研制的狂犬病毒地高辛标记核酸探针敏感性高，特异性强，适用于对狂犬病病料进     

三种非放射性标记法的原理及其在分子生物学中的应用

本文结合笔者利用非放射性法进行限制性酶切片断长度多态性研究的实践经验，综述了近年来逐渐被广泛应用的三种非放射性标记法的产生，发展，原理和应用。     

鸡传染性喉气管炎病毒gB基因核酸探针的研究

将插有传染性喉气管炎病毒（ＩＬＴＶ）糖蛋白Ｂ（ｇＢ）基因的重组质粒ｐＩＬｇＢ克隆，然后用碱法抽提，乙醇沉淀。质粒ｐＩＬｇＢ经ＥｃｏＲＩ酶切后，用地高辛标记，获得ＩＬＴＶｇＢ基因的核酸探针。该探针分别与传染性喉气管炎病毒，传染性支气管炎病毒，传染性法氏囊病毒，禽流感病毒，马立克氏病病毒，新城疫病毒核酸斑点杂交，发现只有传染性喉气管炎病毒的核酸有阳性反应，说明该探针对ＩＬＴＶ有高度的特异性。ｇＢ基因核酸探针与不同浓度的核酸杂交，能检出０．０１μｇ的核酸，表明该探针高度敏感。实验结果还显示，探针能重复多次使用，检测效果不变。     

H3亚型猪流感病毒HA基因核酸探针的制备与应用

以地高辛(DIG)标记H3亚型猪流感病毒(SIV)HA基因的保守片段制成核酸探针,与H3及H1亚型的猪流感病毒(SIV)的cDNA、猪呼吸与繁殖综合征病毒(PRRSV)的cDNA、猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)的DNA、猪瘟病毒(CSFV)cDNA、猪伪狂犬病病毒(PRV)的DNA进行斑点杂交,检测探针的特异性.结果显示,该探针仅与H3亚型的猪流感病毒(SIV)的cDNA杂交呈阳性,与其余病毒杂交呈阴性;敏感性试验结果显示,探针最低能检出约6 pg/μL的H3亚型的SIV RT-PCR产物.应用该探针对35份疑似SI临床病料进行检测,结果检出4份阳性病料,与RT-PCR检测结果一致.研究表明,建立的DIG标记的核酸探针特异性强,敏感性高,适合于对H3亚型SI的诊断和流行病学调查.     

马立克氏病毒光敏生物素核酸探针的刺备及应用

鸡胚成纤维细胞培养ＨＶＴ，蔗糖梯度垫层纯化病毒颗粒，抽提病毒ＤＮＡ，经ＢａｍＨＩ降解，光敏生物标记制备成ＨＶＴＤＡＮ生物素探针，经斑点印迹杂交试验，生物素ＨＶＴＤＮＡ探针具有较高的灵敏性，可检测出３１ｐｇ水平的同源ＤＮＡ序列。     

转基因大米的安全性与核酸检测技术的进展

转基因大米通常指通过基因技术获得外源基因的大米品种,相对于传统大米,其核酸组成发生了一定的变化。总结了对于转基因大米安全性的认识——关于转基因大米的食品安全性,目前在世界范围内仍然存在部分争议。就转基因大米的核酸检测技术的最新进展作了综述,指出PCR技术和改进的PCR技术仍然是主流检测技术,但是基因芯片等技术的发展为快速进行转基因大米的检测提供了更多的选择。     

鸡传染性喉气管炎病毒gp60基因核酸探针的研究

将ILTV -SD株gp6 0基因的PCR扩增片段插入SK质粒的BamHI/EcoRI位点 ,用DH52 大肠杆菌转化克隆基因。用DIG标记重组的靶基因 ,建立了ILTVgp6 0基因核酸探针。斑点杂交试验结果表明 ,该探针与ILTVDNA呈阳性 ,最低检出量为 2 0ng ;与正常绒尿膜组织核酸呈阴性反应 ;Southern杂交结果显示PCR阳性的样品呈阳性反应。这些结果表明 ,所建ILTVgp6 0基因核酸探针适用于ILTV感染的临床诊断。     

PCR及核酸探针检测耐甲氧西林葡萄球菌mecA基因的研究

为了解耐甲氧西林葡萄球菌在畜禽间的存在情况.试验建立针对mecA基因的PCR方法及地高辛标记核酸探针技术,分别用两种方法对75株葡萄球菌分离株进行检测.结果显示,经PCR方法检出42株耐甲氧西林葡萄球菌,占分离株的56.0%;经核酸探针方法检出47株耐甲氧西林葡萄球菌,占分离株的62.7%,两种方法的总符合率为93.3%.通过研究证实,在畜禽的体表及体内能够分离到耐甲氧西林葡萄球菌,且有较高的分离率,应该引起兽医工作者的足够重视.     

植物检疫中无损检测技术进展与应用

在植物检疫过程中,传统的检疫手段和检疫方法无法实现无损检疫,检疫速度慢,流程多,因此,研究快速、高效、无损的植物检疫技术就成为现阶段我们需要重点研究内容。该文主要结合实际情况,就植物检疫中无损检测技术的进展和应用对策进行了分析,希望通过本次研究对同行有所助益。     

玉米单倍体育种技术应用进展

玉米单倍体是指具有配子体染色体数目的植物体。玉米单倍体育种技术是创造和利用单倍体进行玉米自交系选育,从而培育出新杂交种的技术。同常规选育方式相比,这一育种技术可以很大程度上对传统的技术方法予以优化,并且对该技术进行高效利用,可以节省很多的时间和育种成本,所获得的成效明显。现阶段,在玉米单倍体育种获取方面,途径相对较多,应用的鉴定方式也比较多元化。所以,为保证该技术广泛应用和推广,还应该结合现状,科学地研究和运用。     

GPS技术在土地测绘中的应用与进展

测绘是国民经济和社会发展的一项前期性、基础性、公益性的科学技术事业,土地测绘广泛应用于土地事业.从而为国民经济各项建设和社会发展提供前期的准备和测绘保障,也是政府管理部门宏观决策所必须的基础工作.土地测绘技术为规范土地管理和促进土地事业的发展提供强有力的技术支持和保障.本文介绍了GPS技术的概念、来源、仪器设备的组成、主要的技术特征和技术优势.以及其主要应用领域;从三方面阐述了GPS在地藉控制测量中的应用,阐述了GPS系统在土地测绘中的应用,最后展望GPS技术的应用前景.     

GPS技术在土地测绘中的应用与进展

测绘是国民经济和社会发展的一项前期性、基础性、公益性的科学技术事业,土地测绘广泛应用于土地事业。从而为国民经济各项建设和社会发展提供前期的准备和测绘保障,也是政府管理部门宏观决策所必须的基础工作。土地测绘技术为规范土地管理和促进土地事业的发展提供强有力的技术支持和保障,本文介绍了GPS技术的概念、来源、仪器设备的组成、主要的技术特征和技术优势。以及其主要应用领域;从三方面阐述了GPS在地籍控制测量中的应用,阐述了GPS系统在土地测绘中的应用,最后展望GPS技术的应用前景。