西藏那曲牦牛源产气荚膜梭菌的分离鉴定及生物学特性

利用细菌培养、生化鉴定、小鼠致病性试验、PCR技术等方法对西藏那曲市多起牦牛猝死病例进行诊断和分析.结果表明,从病死牦牛脏器中分离得到3株产气荚膜梭菌,命名为AD-01、AD-02和BG-01.其中AD-01和AD-02分离株属于A型,BG-01分离株属于C型.通过对分离株16S rRNA进行序列比对并制作进化树分析发...     

青海玉树牦牛源产气荚膜梭菌的分离鉴定及耐药性研究

无菌采集青海玉树地区牦牛源腹泻粪样,利用常规方法和分子生物学技术对样品中的产气荚膜梭菌进行分离鉴定,通过动物试验、药敏试验、耐药基因检测等方法对分离到的菌株进行了分析。结果显示,从148份样品中成功分离鉴定出牦牛源产气荚膜梭菌14株,其中10株为A型,4株为C型。利用16S rRNA基因序列对部分分离菌系统遗传进化树分析,结果发现,YS-1(MW980090)与印度豹源(MN326666.1)产气荚膜梭菌具有较近的亲缘性,YS-4(MW980093)和YS-13(MW980102)为单独的一枝,YS-6(MW980095)与北京人源(KP944154.1)产气荚膜梭菌具有相似性。A型菌YS-1(MW980090)和C型菌株YS-6(MW980095)动物试验结果显示,C型产气荚膜梭菌外毒素具有强致死性,A、C型菌具有强致死性。药敏试验结果表明,分离菌对复方新诺明、多黏菌素、青霉素、多西环素、四环素耐药,对克林霉素、氯霉素、万古霉素、氧氟沙星敏感。本研究为预防和治疗因产气荚膜梭菌导致牦牛腹泻等疾病提供用药指导。     

1株牦牛源A型产气荚膜梭菌的生长特性及致病性研究

为了了解青海牦牛源产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens,Cp)的生长特性及致病性,并计算其对感染小鼠的半数致死量(LD₅₀),以及观察感染小鼠各器官组织的损伤情况,试验复苏牦牛源产气荚膜梭菌ZD-01(CpA ZD-01)并配制种子液,采用振荡比浊法绘制CpA ZD-01菌株的生长曲线,并研究对数期菌液的OD₆₀₀值与稀释倍数和细菌数量的关系;测定其外毒素粗提取液OD₂₈₀值和OD₂₆₀值,计算出不同培养时间毒素蛋白含量;给小鼠腹腔注射菌液,根据小鼠死亡情况确定LD₀和LD₁₀₀,并计算LD₅₀,解剖小鼠观察牦牛源CpA ZD-01菌株对各组织器官的影响。结果表明：按照5%接种量接种菌株后,>2～10 h为对数期;菌液OD₆₀₀值(y)与稀释倍数(x)的关系式为y=-0.607lnx+1.551,R²=0.990,P<0.05;菌液OD₆₀₀     

西藏那曲市1株牦牛源产气荚膜梭菌的分离鉴定

本试验采集一头疑似产气荚膜梭菌感染导致死亡牦牛的组织样品,通过对细菌的分离培养,结合染色镜检、生化实验和16S rRNA生物学鉴定试验,表明成功分离得到1株牦牛源产气荚膜梭菌。     

牛出血性肠炎A型产气荚膜梭菌的分离鉴定

从新疆维吾尔自治区某牛场采集的3份疑似出血性肠炎病料中分离到8株产气荚膜梭菌,用PCR扩增保守基因16SrRNA,并进行序列测定和同源性分析,再通过多重PCR方法扩增型特异性基因进行分离菌株的分型鉴定。结果显示,所分离的8株产气荚膜梭菌之间16S rRNA基因同源型为100%,与GenBank参比序列同源性在99.8%以上,确定为产气荚膜梭菌。遗传进化分析表明,本次分离的8株产气荚膜梭菌之间拥有共同起源,但与所用的参考菌株分属不同来源。多重PCR扩增结果显示,8株菌株均为产气荚膜梭菌A型。     

家兔产气荚膜梭菌的分离、鉴定及致病性分析

为对疑似家兔产气荚膜梭菌病感染死亡的肉兔病例进行病原菌的分离鉴定,并分析其对家兔的致病性,试验采集死亡病例的肠道内容物,划线接种于兔鲜血平板和TSC选择鉴别培养基中,对病原菌进行分离纯化,利用细菌16SrDNA通用引物进行分子鉴定,分析其同源性,构建系统进化发育树,同时,对病原菌进行生化鉴定,并将病原菌腹腔接种30日龄肉兔,分析其致病性。结果表明,从病料中分离纯化到1株革兰氏阳性菌;通过对细菌16S rDNA基因测序分析及生化鉴定确定为产气荚膜梭菌,且在系统进化树中也与其聚为一簇;致病性分析发现,该菌对家兔具有较强的致死性,可使试验组肉兔在攻毒16h后全部死亡。综上所述,本研究成功获得1株具有较强毒性的兔源产气荚膜梭菌,为产气荚膜梭菌致病机制的研究奠定了基础,同时也为疫病诊断和防控提供了理论依据。     

牛产气荚膜梭菌的分离与鉴定

针对海南牛猝死的现象，采集23头病牛的病料进行细菌分离培养。从菌落、菌体的形态、细茵生化特征、动物试验、细菌动力学试验等方面对病原菌进行了鉴定。结果表明，病原菌为革兰氏阳性粗短杆菌，严格厌氧，β-溶血，能发酵葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和含铁牛乳；厌气肉肝汤培养物滤液0．1～O．2mL皮下注射可致死小白鼠。根据试验结果鉴定其为产气荚膜梭菌。     

犬源产气荚膜梭菌分离鉴定及药敏试验

对分离于某犬场的产气荚膜梭菌疑似物进行厌氧培养、生化鉴定、动物接种、药敏试验、血清型鉴定,同时结合流行病学调查、临床症状观察、病理剖检等措施,确定该犬场发病的原因是感染A型产气荚膜梭菌,敏感药物有氟本尼考、氯霉素、替硝唑等。     

一株羊源产气荚膜梭菌的分离与鉴定

2013年4月,扬州大学动物医院畜禽门诊接诊一例山羊急性死亡的病例,对其进行剖检,无菌恒温厌氧分离培养,纯化鉴别,革兰氏染色,生化反应,结果表明为产气荚膜梭菌,并对此进行了一定的讨论。     

奶山羊D型产气荚膜梭菌的分离鉴定

为鉴定2018年夏季昆明市某奶山羊场持续发生羊急性死亡原因,从该场采集病料进行细菌分离鉴定、小鼠毒力试验、毒素基因检测及序列分析、16S rDNA序列分析比较和药敏试验。结果显示:引起羊发病的病原菌鉴定为D型产气荚膜梭菌;对其2个毒素基因α、ε及16S rDNA序列分析结果表明,毒素基因及16S rDNA高度保守,不同毒素型的菌株16S rDNA序列100%同源,经BLAST比对的2个毒素基因与参考序列之间核苷酸完全同源;分离株在接种小鼠后48 h死亡,表明其毒力较强;药敏试验结果表明,分离菌对恩诺沙星、青霉素、氟苯尼考、呋喃唑酮、氯霉素等抗生素均高度敏感,而对卡那霉素、庆大霉素和链霉素等耐药。试验结果可为羊产气荚膜梭菌感染的临床用药提供参考。     

麋鹿产气荚膜梭菌分离鉴定方法的建立与初步应用

探索了产气荚膜梭菌在营养琼脂、甘露醇卵黄琼脂和血琼脂平板上的菌落形态和培养特点,优化了产气荚膜梭菌的分离方法,并对分离菌株进行生化鉴定;在此基础上对北京南海子麋鹿苑和江苏大丰麋鹿国家级自然保护区的麋鹿自然感染情况进行了调查。结果发现,粪样中的产气荚膜梭菌在营养琼脂上生长呈半透明边缘不整的白色菌落,接种甘露醇卵黄琼脂和血琼脂平板,分别出现伴有卵磷脂酶乳光浑浊带的粉红色火山口状菌落和伴有双溶血环的灰绿色勋章样菌落。生化试验结果确认这些分离株均为产气荚膜梭菌。对北京南海子麋鹿苑和江苏大丰麋鹿国家级自然保护区麋鹿粪样检测发现,阳性率分别为13.04%(3/23)和19.51%(8/41)。说明本研究建立的麋鹿产气荚膜梭菌分离鉴定方法简便快速,确实可行;麋鹿产气荚膜梭菌自然感染率较高,应加强麋鹿产气荚膜梭菌病的防控。     

一株C型产气荚膜梭菌的分离与鉴定

产气荚膜梭菌是一种重要的人畜共患病原菌,在一定条件下可引起多种严重疾病。从疑似山羊魏氏梭菌病例中分离到一株细菌,通过厌氧培养、显微镜镜检、分子生物学鉴定表明该分离菌为产气荚膜梭菌,使用药敏纸片法进行分离菌株药敏性试验研究,数据分析表明：分离菌对常见抗生素具有不同程度的耐药性,对头孢噻呋敏感性最高,对多西环素、卡那霉素、新霉素、氟苯尼考、环丙沙星、庆大霉素等耐药,以期为山羊健康养殖提供技术参考。     

鸡产气荚膜梭菌的分离鉴定及药敏试验

对哈尔滨市3个鸡场送检疑似鸡坏死性肠炎病例进行了病理剖检和细菌分离,从菌落、菌体的形态、生化特性、PCR鉴定、病理组织学检查和细菌致病性等方面对病原菌进行了鉴定。结果表明,病原菌为厌氧的革兰阳性短杆菌,在含卵黄的TSC培养基上形成周围带白浊环的黑色圆菌落,能发酵葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、乳糖和紫牛乳;PCR鉴定及致病性试验表明分离的细菌为产气荚膜梭菌,且有致病性。药敏试验显示,分离菌株对青霉素等5种药物高度敏感;对新霉素等4种药物耐药。     

犀牛产气荚膜梭菌的分离鉴定

从突然死亡的犀牛肠管中，分离到一株套氧菌，经鉴定为致病性Ａ型产气荚膜梭菌。该菌为革兰氏阳性大杆菌，在血平皿套氧培养，产生双环溶血的菌落，用产毒培养基培养，其上清液静脉注射０．２ｍｌ可致死小白鼠。证明该菌是造成犀牛死亡的病原。血清中和试验结果中Ａ型产气荚膜梭菌，该分离物鉴定为致病性的Ａ型产气荚膜梭菌。     

猪产气荚膜梭菌的分离鉴定及药敏试验

产气荚膜梭菌又称魏氏梭菌、产气荚膜杆菌,在自然界分布极广,可见于土壤、污水、饲料、食物、粪便以及人畜的肠道等中。该菌为条件性致病菌,在一定条件下,可引起多种严重疾病。鸡的坏死性肠炎以及仔猪红痢都是由产气荚膜梭菌感染所引起的严重的肠道疾病。     

鸡源产气荚膜梭菌分离株的生物学特性鉴定

为了解山东地区鸡源产气荚膜梭菌的生物学特性,对送检的3份疑似鸡坏死性肠炎病料进行了分离培养、生化鉴定和分子分型;分析了α毒素基因序列并构建了16S rRNA的系统进化树;通过药敏试验和攻毒试验了解其耐药性和毒力。结果显示,3株分离株(AQ01、KD02、TA03)经生化鉴定和多重PCR分型均为A型产气荚膜梭菌,α毒素氨基酸间的同源性为98.7%~99.5%,与其他分离株和参考株序列相比,TA03株362位点由Pro突变为Ser,KD02株162位点由Tyr突变为His、137位点Gln缺失。16S rRNA系统进化树分析显示,AQ01株和KD02株同属一分支,亲缘关系较近。三株分离株对头孢唑啉、头孢曲松、头孢呋辛、氨苄青霉素、哌拉西林均敏感。以8×10~9CFU/mL口腔灌服攻毒21日龄SPF鸡(0.5 mL/只),TA03株、AQ01株、KD02株死亡率分别为100%、60%、10%,TA03株毒力最强,病死鸡剖检可见坏死性肠炎的典型病变。本试验对山东地区鸡源产气荚膜梭菌的生物学特性有了初步了解,可为鸡坏死性肠炎的诊断和预防提供依据。     

迁徙候鸟产气荚膜梭菌的分离鉴定与特性分析

产气荚膜梭菌是一种人兽共患病原菌,可通过多种途径感染人类。本研究从迁徙候鸟样品中对产气荚膜梭菌进行分离鉴定,并进行毒力基因检测、分型、生物被膜形成能力鉴定及耐药性测定。结果从549份健康候鸟粪便样品中分离细菌42株,35只死亡候鸟病料样品中分离细菌11株,通过PCR方法共鉴定A型菌48株,E型菌5株,所有菌株均未检出β2毒素、肠毒素和NetB毒素基因,30株经测定能够形成生物膜;分离菌株对黏菌素、杆菌肽、克林霉素和红霉素的耐药率在40%以上,所有菌株均对复方新诺明敏感。结论得出迁徙候鸟携带产气荚膜梭菌的比例较低,但是对部分抗生素的高耐药性值得关注。     

猪产气荚膜梭菌的分离鉴定及药敏试验

四川南充某养殖场发生了一种以仔猪下痢为主的疾病,采集病死仔猪肝和肠道进行细菌分离培养,涂片、染色和镜检观察,并对其形态特征、培养特性和生化特性进行研究,结果表明:该菌为产气荚膜梭菌。采用那西肽等药物对分离的产气荚膜梭菌进行药敏试验,那西肽对该菌的抑制作用最强,最小抑菌质量浓度(MIC)为0.002 5μg/mL;其次为恩拉霉素、维吉尼亚霉素和吉他霉素;林可霉素对该菌几乎没有抑制作用。