黑斑蛙歪头病病原米尔伊丽莎白菌的分离、鉴定及特性分析

为查明湖北石首大垸农场养殖的黑斑蛙（Rana nigromaculata）歪头病病原与致病原理,本研究应用微生物分离技术,从病蛙脑、肝、脾和肾脏组织中分离、纯化病菌,采用形态特征、生理生化鉴定、16S rRNA基因序列分析进行细菌种类鉴定,通过组织病理学方法分析患病蛙病理损伤,及人工回归感染确定其致病性,并利用纸片扩散法进行药物敏感性试验。结果显示：分离菌（BSH3）与米尔伊丽莎白菌（Elizabethkingia miricola）聚为一支,结合该菌的形态学特征和生理生化特征,综合鉴定为米尔伊丽莎白菌。组织病理切片结果表明分离菌（BSH3）会导致蛙脑组织基质水肿,基质中出现空泡和炎性细胞浸润的现象;肝、脾和肾脏组织出现变性、坏死和炎症细胞浸润。人工回归感染试验显示,菌株可使黑斑蛙出现与自然发病蛙相似症状,半数致死浓度为6.3×10⁴ CFU/mL。药敏试验结果表明菌株已呈现多重耐药性,仅对少数检测抗生素（米诺环素、氟苯尼考、利福平和万古霉素）敏感,根据药敏试验结果及农业部水产用药规定,推荐使用氟苯尼考治疗该疾病。     

牛蛙感染迟缓爱德华氏菌的研究

2001年10月底，厦门地区一些牛蛙（Rana catasbianay）养殖场养殖的牛蛙暴发流行传染病，造成大批成蛙和幼蛙死亡。经流行病学调查和病原分离鉴定，确定其主要致病原为迟缓爱德华氏野生型（Edwardsiella tarda）。该菌具有溶血性，对SPF小鼠有强致死作用，对幼蛙和蝌蚪致病力较小，根据药敏实验结果，和敏感药物进行治疗取得了良好的疗效。     

锦鲤源铜绿假单胞菌的分离鉴定及药敏试验

对从发病锦鲤分离出的病原菌主要形态与生理生化特性、16S rRNA基因序列及耐药特性等进行了研究,旨在为锦鲤疾病防治提供理论依据,对铜绿假单胞菌的进一步研究提供基本资料。发病锦鲤体长37~42 cm,体重1.5~2.0kg,眼球脓肿凸出,鳃丝被轻微腐蚀,其上可见附着物,肛门红肿并伴有黄色粘液流出。健康锦鲤体长7~10cm,体重(25±3)g。分离到的1株形态一致优势生长菌株（记为HL2）呈现圆形光滑、边缘整齐、中央隆起、略透明、乳白色,直径约1.4mm。分离菌经革兰氏染色镜检,均为革兰氏阴性、短杆状。肌肉注射感染后,供试健康锦鲤14d内全部死亡,并在试验后期注射部位轻微出血,眼球周边有白浊及化脓的现象。HL2有运动性,精氨酸脱羧酶、鸟氨酸脱羧酶、精氨酸双水解酶阳性,苯丙氨酸脱羧酶阴性,发酵麦芽糖、甘露醇、蔗糖、半乳糖等,不发酵侧金盏花醇与阿拉伯糖等。分离株HL2的序列长度为1461bp(GenBank登录号为KF413420),在系统发育树上与铜绿假单胞菌（KC959478）聚为一支。头孢曲松、卡那霉素、四环素等35种药物有效抑制HL2,庆大霉素、强力霉素、头孢拉定等5种药物具有一定的抑菌作用,青霉素G、氨苄西林、头孢唑林等15种药物无效。使用抗生素时必须更加科学、合理、有效;从药物选择、使用剂量、用药疗程等方面着手,以减少耐药菌株的产生。     

牛蛙背部肿胀病的病原菌分离与鉴定及药敏实验

在广东广州番禺某牛蛙养殖场发现较为特殊的疾病且传染率和死亡率较高,为查明其致病原,从患病牛蛙(Rana catesbeiana)中抽取其背部的积液和对其他病变部位如肝、脾等进行细菌的分离纯化后得到两株优势菌,然后将两株优势菌进行16S rRNA基因测序、进化树构建、革兰氏染色细菌和生理生化实验进行鉴定和分析,结果显示一株菌株GPY923为嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila),另一株菌株GPY924为海豚链球菌(Streptococcus iniae),进行人工感染后表明其具有较强的致病性。药敏试验结果显示嗜水气单胞菌对丁胺卡那、红霉素、头孢他啶、头孢呋辛、青霉素和氟苯尼考敏感,对多种药物耐药;海豚链球菌对林可霉素和头孢呋辛耐药,对头孢他啶中度敏感,其余药物均敏感。     

牛蛙腹水病病原鉴定和药敏试验

从患病牛蛙(Rana catesbeiana)肝脏、四肢、腹水等组织划线分离,共获得3株菌,通过对菌落形态观察、革兰氏染色镜检及生理生化鉴定,确认其理化性质一致,均为洛菲不动杆菌(Acinetobacter lwoffi)。采取腹部注射和浸泡两种不同方式人工感染试验均证实该菌存在致病性,药敏试验表明,分离菌株W2011-01对左氟沙星、美洛培南、哌拉西林/他唑巴坦、妥布霉素、复方新诺明、庆大霉素等18种药物敏感,对呋喃妥因、环丙沙星、沙拉沙星、乙酰螺旋霉素、青霉素、杆菌肽、痢特灵、利福平、氨苄西林、强力霉素耐药。     

鸡大肠杆菌病的病原分离鉴定与药敏试验

无菌采集山西某地临床上疑似为鸡大肠杆菌病的6只病死鸡的心、肝、脾,进行细菌学检验,鉴定出6株鸡大肠杆菌。将分离菌株分别接种试验动物,对小白鼠致死率达83.33%。药敏试验结果表明,6个菌株表现出相似的药物敏感性,对庆大霉素、卡那霉素、诺氟沙星敏感,对土霉素、双黄连、多西环素、板蓝根、泰乐菌素耐药。     

仔猪大肠杆菌分离鉴定及药敏试验

采用病原分离的方法,从太谷地区几家养猪场采集病、死猪肝脏、脾脏、淋巴结,进行了细菌的分离培养、染色镜检、生化试验和致病性试验,结果表明,分离获得的8株疑似大肠杆菌具有典型的生长特性、形态及染色特性;生化鉴定结果显示,其中有6株为致病性大肠杆菌;通过纸片法,对分离的致病性大肠杆菌进行药敏试验,试验结果显示,临床治疗大肠杆菌病的首选药物是丁胺卡那和先锋霉素V类,为该地区的大肠杆菌病的预防提供依据。     

团头鲂源肺炎克雷伯氏菌的分离鉴定

建立肺炎克雷伯氏菌感染团头鲂的模型,为团头鲂疾病的有效检验与防治及鱼类病原肺炎克雷伯氏菌的进一步研究提供参考和依据。2014年8月江苏省常州市某养殖场暴发出血病,团头鲂大量死亡,濒死团头鲂呈现轻微细菌性败血症症状,但未见大量充血发红,仅腹部、鳍基部有出血点,鳃丝发白,肠道无食物,肝胰腺轻微充血发红。采用常规的培养特征、理化特性及分子生物学的方法,于濒死团头鲂的肝、脾中分离到优势菌株CZBY-1,进行了形态观察、药敏试验、毒力因子检测等,并对其16S rRNA基因序列(Gen Bank登录号:KF413424)进行分析。构建系统发育树确定供试菌株与肺炎克雷伯氏菌同源性最高,在99%以上,结合表型及分子生物学分析,判定为肺炎克雷伯氏菌,人工回感可导致团头鲂死亡并呈现同检测鱼患病特征。利用设计的特异性引物进行外膜蛋白C(ompC)基因的PCR扩增,发现分离菌在252 bp对应位置有明显扩增条带,证明其具有毒力因子ompC。药敏试验表明,菌株对磷霉素、复方新诺明等27种抗生素敏感,对链霉素、妥布霉素、万古霉素3种抗生素耐药。     

鸡源性致病性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验

本试验从梅州地区多个发生疑似大肠杆菌疾病的大中型齐鸡场的动物肠道和排泄物中分离出18株细菌，经过培养基鉴定、染色、生化和致病性等多项试验确定其中的10株为致病性大肠杆菌，并对其进行对11种抗生素的药敏试验。为以后的大肠杆菌病的治疗提供依据。     

鸡源性致病性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验

本试验从梅州地区多个发生疑似大肠杆菌疾病的大中型养鸡场的动物肠道和排泄物中分离出18株细菌,经过培养基鉴定、染色、生化和致病性等多项试验确定其中的10株为致病性大肠杆菌,并对其进行对11种抗生素的药敏试验,为以后的大肠杆菌病的治疗提供依据。     

一株血鹦鹉迟缓爱德华氏菌的分离鉴定及药敏试验

为确定天津市某养殖场血鹦鹉(Cichlasoma var.)发病死亡的原因,并对其进行有效的预防与治疗,本试验对患病的血鹦鹉进行病原的分离鉴定、回归感染及药敏试验.从病灶处分离出一株疑似病原菌命名为XYW-1,经人工感染后具有致病性,临床症状与自然发病症状一致,半致死浓度为4.75×105 CFU/mL;经生化鉴定和1...     

雏鹅大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验

该试验对荣昌县某养鹅专业户发病种雏鹅分离的细菌经培养特性及生化试验,鉴定为大肠杆菌。经动物试验表明该菌株有较强的致病性。用临床上常用的22种抗菌素纸片对分细菌进行药敏试验,结果所分离的大肠杆菌对菌必治、先锋噻肟、氨曲南、丁胺卡那霉素和复达欣5种药物高度敏感,对呋喃妥因和庆大霉素中度敏感,而对头孢呋新、左氟沙星、克拉霉素等药物表现为耐药性。     

中华鲟脑膜败血伊丽莎白菌的分离鉴定及药敏特性研究

为了确定中华鲟养殖基地一尾死亡子二代中华鲟的病原,利用传统病原菌分离方法,从濒死的中华鲟肝脏、脾脏和腹水中均分离到一株优势菌EM,采用16S r DNA基因序列分析、构建系统发育树并结合Biolog微生物自动分析系统进行鉴定,确定菌株EM为脑膜败血伊丽莎白菌。进一步对健康子二代达氏鲟进行人工感染试验确定其致病性;同时通过观察患病子二代中华鲟组织切片分析其病理特征;并对菌株EM进行药敏特性研究以期指导临床用药。结果显示,被感染子二代中华鲟肝脏、脾脏及肾脏组织中铁血黄素沉积、实质性细胞空泡变性,溶血严重。菌株EM人工感染健康子二代达氏鲟,发现其对达氏鲟具有致病性,且从人工感染患病的达氏鲟肝脏中再次分离到相同的病原菌。药物敏感性试验表明,中华鲟脑膜败血伊丽莎白菌对米诺环素、克林霉素、克拉霉素和麦迪霉素4种药物敏感,对四环素、头孢噻肟和头孢西叮3种药物中度敏感,对其余28种药物不敏感,呈多重耐药性。本研究首次发现脑膜败血伊丽莎白菌可感染中华鲟,并对达氏鲟也具有致病性,并初步研究了病原菌的生物学特性、病理特征和药物敏感性,以期为该病的诊断和防治提供理论依据。     

副猪嗜血杆菌的分离鉴定及药敏试验

该研究从广东中山某猪场疑似患有副猪嗜血杆菌(HPS)病的病死猪心脏和肺脏中分离到一株细菌。经形态学观察、培养特性鉴定、生化试验、PCR检测和致病性试验,显示该菌为HPS。药敏试验结果表明该菌株对恩诺沙星、诺氟沙星、红霉素、庆大霉素和新霉素等表现高敏感性;对阿米卡星、土霉素、青霉素、强力霉素和四环素等则耐药。     

输精管中不动杆菌的分离鉴定和药敏试验

对人工授精所用输精管进行细菌检测,通过无菌操作分离出革兰阴性的球杆状杆菌,经生物学特性试验和生理生化试验鉴定,该分离到的细菌为不动杆菌。药敏试验结果表明,该分离菌株对氯霉素、妥布霉素、头孢噻肟等抗生素高度敏感;对诺佛沙星、卡那霉素、环丙沙星、氨曲南、呱拉西林、苯唑西林、头孢唑林等抗生素有耐药性。化学消毒剂试验表明,2%的氢氧化钠,0.1‰的苯扎溴铵10min便可杀死该菌株。动物致病性实验导致小白鼠死亡表明,本菌株对小白鼠有致病作用。     

乌龟鲍曼不动杆菌的分离鉴定及药敏试验

自患病乌龟肝脏中分离出1株优势菌DL01221,对其进行形态学观察、生化试验、16SrRNA基因序列分析,同时采用Kriby-Bauer纸片扩散法进行药物敏感性试验。试验结果表明,该菌为革兰氏阴性球杆菌,将该菌株16SrRNA序列进行同源性和系统进化树分析,发现它与鲍曼不动杆菌处于同一群,同源性超过98%,结合菌株形态和生化指标,确定该菌株为鲍曼不动杆菌。致病性试验结果显示,其对乌龟具有较强的致病作用;耐药性结果显示其对头孢他啶、卡那霉素及氟罗沙星敏感,对其他多种抗生素耐药。     

鸡大肠杆菌和沙门氏菌混合感染的分离鉴定及药敏试验研究

无菌采取某鸡场送检的病死鸡的心血、肝、肾,进行病原菌的分离、鉴定、生化试验和药敏试验。结果显示引起该鸡场鸡只发病的病原除大肠杆菌外,还伴有沙门氏菌。药敏试验结果显示,此次分离的大肠杆菌对庆大霉素、氟哌酸、氯霉素高度敏感,对复方磺胺、链霉素、环丙沙星中度敏感,对阿莫西林、利福平、卡那霉素不敏感。此次分离的沙门氏菌对氯霉素、阿莫西林、卡那霉素高度敏感,对庆大霉素、复方磺胺、氟哌酸、环丙沙星中度敏感,对利福平、链霉素不敏感。     

部分水产品中副溶血弧菌的分离鉴定及药敏试验

从西宁市5个市场采集鱼、虾各30份样品,通过常规的细菌分离技术分离到副溶血弧菌6株,其平均检出率为10%。药敏试验结果显示分离所得副溶血弧菌对卡那霉素、庆大霉素、复方新诺明等出现高度敏感;对头孢拉啶、头孢唑啉出现中度敏感;对氨苄西林、青霉素不敏感。     

养殖大菱鲆肠道中大菱鲆弧菌的分离鉴定及药敏试验

2014年11月,大连地区某大菱鲆养殖场发生病害并伴有死亡,主要症状为吻部下颌明显出血,腹腔积水,肝脏充血,肠道出血有白便。从患病大菱鲆肠道中分离出1株可在硫代硫酸盐—柠檬酸盐—胆盐—蔗糖琼脂培养基上生长的菌株HZ-C1,人工回接感染试验证明其对健康大菱鲆具有较强致病性。通过形态学观察、16SrDNA序列同源性分析及生理生化试验确定菌株HZ-C1为大菱鲆弧菌。药敏检测结果显示,大菱鲆弧菌HZ-C1对氯霉素、丁胺卡那及头孢曲松等11种抗生素敏感,但对青霉素、四环素及诺氟沙星等15种抗生素耐药。本研究为大连地区养殖大菱鲆细菌性病害防治提供了一定病原学依据。