牛生精母细胞/精原干细胞分子标记GFRα-1的验证

生精母细胞(gonocytes)是幼龄雄性曲细精索中的未分化生殖细胞,随睾丸发育逐渐向生精上皮基膜迁移并发育为精原干细胞(spermatogonial stem cells, SSCs)。生精母细胞和SSCs的分离培养对体外探讨精子发生机理至关重要,而其特异分子标记验证又是分离培养的关键环节。胶质细胞源神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor, GDNF)能促进生精母细胞和SSCs的增殖,用GDNF家族受体α-1(GDNF family receptor alpha-1,GFRα-1)标记生精母细胞和SSCs已在啮齿类等动物得到证实,但在牛等大家畜则仍需验证。为此,本研究将冻存的新生牛睾丸组织复苏,从转录和蛋白水平对GFRα-1的表达进行了验证。荧光定量PCR分析显示,犊牛生精上皮表达多能性基因Nanog和较高水平的GFRα-1 mRNA;免疫荧光染色显示,曲细精索中的大圆形细胞表现为GFRα-1阳性,其定位和分布与苏木精-伊红染色显示的生精母细胞一致;分离培养后,这些细胞表现为生精细胞典型的团簇状形态,仍为GFRα-1和Na...     

支持细胞对精原干细胞增殖、分化调控的研究进展

哺乳动物精子发生是在睾丸支持细胞(Sertoli cells,SCs)调节下完成的,SCs不但为精子发生提供物理支撑和稳定微环境,而且通过分泌多种蛋白对生殖细胞发挥增殖、分化、凋亡、吞噬、免疫豁免等多种调节作用。生理状态下,SCs调控精子发生的确切机制还不是很清楚。因此,本文对SCs与精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)及系列生精细胞特殊的结构关系以及二者间的调控关系进行了综述,以期为推动二者间调控机理的深入研究及提高动物育种繁殖效率提供参考。     

支持细胞调控精原干细胞增殖、分化和凋亡的研究进展

精原干细胞(Spermatogonial stem cells,SSCs)在支持细胞(Sertoli cells,SCs)调控下有序增殖、分化、凋亡,维持雄性动物正常的精子发生。本文主要对SCs与SSCs的生理结构关系及SCs通过GDNF、FGF2、RA、BMP4、SCF、FasL和SR-BI对SSCs增殖、分化与凋亡的调控进行综述。为精子发生机理的深入研究提供重要参考,将对提高雄性动物繁殖效率具有重要意义,还为探索男性不育疾病的临床治疗方法提供有价值的参考。     

冷冻保存新生牛睾丸组织中支持细胞的分离纯化

睾丸支持细胞(sertoli cells,SCs)是生精上皮中的多功能体细胞,其分离培养对体外探讨精子发生机理至关重要。因牛新鲜睾丸组织取材不便,本试验在前期基础上探讨了从冷冻保存的新生牛睾丸组织中分离纯化SCs的可行性。将冻存的1日龄牛睾丸组织复苏,进行形态学检查和SCs分离培养。石蜡切片苏木精-伊红(HE)染色显示,曲细精索及睾丸间质保存完好。二步酶消化结果显示,生精上皮解离良好。利用差异贴壁法将原代细胞纯化后扩大培养,绝大多数细胞呈不规则多边形,3d即可生长至汇合。RT-PCR分析显示,贴壁细胞表达SCs阳性分子标记胶质细胞源神经营养因子(GDNF)和雄性激素结合蛋白(ABP)而不表达精原细胞分子标记PLZF。流式细胞术检测显示,所获细胞中ABP和GDNF阳性细胞数分别为99.7%和99.8%。以上结果表明,从冻存的新生牛睾丸组织中可获高纯度的SCs。本试验结果为后续相关试验奠定了基础。     

精原干细胞的研究进展

精子发生过程经历了复杂的细胞分化阶段,在雄性睾丸曲精细管中发生一系列微妙的变化。精子发生过程中产生精子数量的多少直接关系到雄性生殖能力的高低,其中精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)发挥着重要作用。作为一个未分化的细胞群体,SSCs具有较强的自我更新能力(维持其自身细胞数量)并能够分化为成熟的精子。通过体外培养可将SSC诱导分化为多能性干细胞,从而代替胚胎干细胞(ES),避免了伦理问题的困扰;同时还避免了体细胞诱导为多能性干细胞过程中外源转录因子导入的问题。另外,将基因工程与生殖细胞移植相结合,可以在很大程度上促进转基因动物的生产。文章就SSCs的生物学特性、分子标记、分离纯化培养和移植进行综述。     

精原干细胞标记及活体追踪的研究进展

研究表明,精原干细胞（spermatogonial stem cells,SSCs）具有重建不育个体精子发生的能力。采用细胞标记试剂标记精原干细胞,可以活体追踪移植至睾丸的精原干细胞命运,即在发育过程中的增殖、运动及分化情况。标记和追踪精原干细胞将有助于了解精子发生恢复的机理并选择最优的移植策略。     

家畜精原干细胞移植研究进展

精原干细胞（spermatogonial stem cells，SSCs）是精子发生的前体细胞。精原干细胞的移植首先由Brinstre等（1994）报道，他们先将可育小鼠的混合生精细胞移入不育小鼠的曲精细管，结果在受体睾丸内产生了具有受精能力的精子。随后叉将大鼠生精细胞移入免疫缺陷小鼠的曲精细管，结果在小鼠睾丸内产生了大鼠的精于，从而实现了跨物种产生精子的重大突破。精原干细胞移植技术的建立为生殖细胞功能研究、优良物种保存、转基因动物的培育及家畜的遗传育种等开创了新的途径。     

精原干细胞生物学特性研究

雄性生殖干细胞,即精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs),能够自我更新,在体外一定条件下可以分化为精子,在精子发生过程中具有重要作用。SSCs是生殖细胞中唯一的干细胞,能够将遗传信息传递给下一代。文章就SSCs的起源、表面标记、分离、纯化和体外培养展开论述,并探讨了SSCs在人类医学上的应用前景和面临的问题。     

褪黑素的添加减轻猪精原干细胞的氧化损伤

旨在研究褪黑素(melatonin,MT)对体外培养猪精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)的作用机制.本研究采集3头7日龄健康大白公猪睾丸,利用差速贴壁法获得SSCs.后经形态学观察、碱性磷酸酶染色、标记基因检测及免疫荧光染色鉴定后以SSCs作为试验材料,设置MT浓度梯度(0、50...     

精原干细胞的分离纯化方法

精原干细胞(spermatogonial stem cells, SSCs)是永久分化成精子细胞的克隆源, 既可以自我更新生成新的干细胞,又可以增殖分化形成各阶段的生精细胞直至成熟的精子. 由于精原干细胞可以进行体外培养、转基因操作、异体或异种移植重塑精子发生,以及可以 冷冻保存,所以在雄性不育治疗、转基因动物生产、遗传资源保护等方面有着广阔的应用前 景,成为新的研究热点.SSCs的分离富积是对其研究与应用的必要前提条件.然而,SSCs在 睾丸中所占比例极低,选择有效的分离纯化方法,获得富积的SSCs就成为推动其研究的关键 步骤.近年来,随着SSCs移植功能试验的建立,有关SSCs的分离纯化研究取得了长足进步,本文就此作一综述.     

生精胶囊促进小鼠精原干细胞增殖的研究

为了探讨体外促进小鼠精原干细胞(SSCs)增殖的可行性,试验取7～8日龄雄性乳鼠睾丸,分离、纯化SSCs并分别接种于普通培养液、神经营养因子(GDNF)培养液和生精胶囊提取液的培养液内进行增殖培养,观察小鼠SSCs的生长状况.结果表明:将SSCs接种于普通培养液3 d后,出现了增殖现象,可见增殖培养产生SSCs克隆,并...     

精原干细胞的分选、培养及转基因应用探讨

精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)是成年哺乳动物精子发生的基础,具有自我更新和定向分化潜能,能够向后代传递遗传信息。利用SSCs的特点,可以建立转基因动物制作的技术,即分离SSCs、体外培养增殖、基因转染、移植、交配获得转基因动物后代的技术路线,有望应用于家畜经济性状的基因改良。     

表皮调节素、上皮有丝分裂原和干细胞因子对山羊精原干细胞增殖的影响

为了揭示表皮调节素(Epiregulin/EREG)、上皮有丝分裂原(Epigen/EPG)和干细胞因子(SCF)对山羊精原干细胞(SSCs)增殖的影响,改进SSCs体外培养体系。在含有胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和白细胞抑制因子(LIF)的SSCs培养基基础上,分别添加20 ng/mL干细胞因子、20 ng/mL表皮调节素、20 ng/mL和100 ng/mL上皮有丝分裂原。对富集后山羊SSCs进行12 d的培养,测定培养过程中山羊SSCs生长曲线和细胞活性。结果表明:添加100 ng/mL上皮有丝分裂原和20 ng/mL的表皮调节素相比其他组能够显著促进山羊SSCs的体外增殖和细胞活力(P0.05);其中培养12 d后添加20 ng/mL表皮调节素的细胞活力显著高于其他组,但细胞数量与100 ng/mL上皮有丝分裂原组无显著差异。20 ng/mL SCF相比对照组能够显著提高体外增殖和细胞活力(P0.05),但低于100 ng/mL上皮有丝分裂原和20 ng/mL表皮调节素组(P0.05)。因此,添加100 ng/mL上皮有丝分裂原、20 ng/mL干细胞因子和20 ng/mL表皮调节素能够提高山羊SSCs的增殖,其中添加20 ng/mL表皮调节素效果最佳。     

MicroRNAs对精原干细胞自我更新与分化调控的机制研究进展

精原干细胞(SSCs)是具备自我更新与分化潜能的生殖干细胞,其通过协调自我更新与分化之间的动态平衡来维持SSCs群体数量的稳定并保证精子发生的持续进行。SSCs的自我更新和分化受细胞因子、转录因子和其他增殖分化相关蛋白等多种因素调控。MicroRNAs(miRNAs)是一类很小的非编码内源性RNA,广泛存在于机体各组织器官,且差异性表达于精子发生的各个时期,在精子发生过程中发挥重要调控作用。本文主要综述了miRNAs对SSCs自我更新和分化相关转录因子及其他蛋白等表达的调控,并简要论述了miRNAs调控SSCs增殖与分化的其他方式,以期为后续SSCs的研究提供科学参考。     

小鼠精原干细胞体外培养体系建立及功能鉴定

旨在通过探索ICR品系小鼠精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)的体外稳定培养,为别的品系小鼠和大动物的SSCs体外培养提供参考.本研究采集6?8日龄ICR乳鼠的睾丸,用两步酶消化法(胶原酶和胰蛋白酶)和差速贴壁法来纯化SSC细胞.用不同的饲养层(小鼠胎儿成纤维细胞(mouse em...     

精原干细胞移植技术研究进展

精原干细胞位于雄性哺乳动物体内曲细精管生精上皮基膜内，在复杂且高度有序的精子发生过程中占有极其重要的地位，它一方面自我更新生成新和干细胞，另一方面源源不断的增殖分化形成各阶段的生殖细胞直至精子，更重要的是它能向下一代传递遗传信息，1994年，美国宾夕法尼亚大学《兽医学院的Brinster等人首次将可育供体雄性小鼠的精原干细胞注射到不育小鼠的曲细精管中，结果受体鼠产生了具有受精能力的精子并产出了正常后代^[2,3]，1996年，他们又将大鼠的精原干细胞移入10只免疫缺陷性小鼠曲细精管中，在小鼠的睾丸中产生了大鼠的精子，更另人震惊的是，在1999年同类实验中Brinster等人又使得兔和狗的精原干细胞在小鼠睾丸中增殖并分化，这些成果被视为“跨物种产生精子中的重大突破”，在干细胞领域稳定向前发展的今天，精原干细胞移植技术的发展和应用为深入探讨精子发生，干细胞状态的维持，自我更新的方式，自增殖及分化过程的启动和调控等的生物学机制的研究提供了优良的途径，可能成为一种极为有用的生物方法，本文简要概述了这项技术的主要方法以及最新进展和成果。     

以KnockoutTM SR无血清培养基培养小鼠精原干细胞的研究

精原干细胞(SSCs)是睾丸内具有自我复制和分化为精子潜能的干细胞,它的体外培养是精子发生机理研究和制作转基因动物等的新途径[1-2]。近几年的研究表明,SSCs在体外的自我增殖需要胶质细胞源神经营养因子(GDNF)和饲养层细胞等的支持[3-10],并且睾丸支持细胞和血清均可导致培养的     

精原干细胞的体外培养及其潜在治疗应用价值

精原干细胞(SSCs)能够自我更新,产生大量分化的生殖细胞并在出生以后形成精子,将遗传信息传递给下一代。因为所有雌性生殖干细胞在出生前已停止增殖,所以SSCs是成年哺乳动物唯一的生殖干细胞。将有生育能力的雄性供体睾丸细胞移植到不育症雄性睾丸细胞中,不育症的雄性可以重新进行精子发生和恢复生育能力。这项移植技术已经用来研究SSCs的生物学特性。研究发现,精原干细胞可以在小鼠的曲细精管进行复制,然后迁移,精原干细胞所需自我更新的生长因子保存在哺乳动物中。因此相信该培养技术很快会被应用于人类的精原干细胞中。本文讨论了现有的和潜在的运用移植技术和体外培养精原干细胞的方法。由于辅助的生殖技术能使精子细胞进入卵母细胞使之受精,所以在体外培养分化精原干细胞使之成为成熟生殖细胞的技术,将会促使人的临床精原干细胞的应用得到长足发展。     

以支持细胞为饲养层小鼠精原干细胞体外培养的研究

探讨精原干细胞(SSCs)与Sertoli支持细胞共培养的增殖分化能力。方法:以7～8d龄小鼠为材料,Percoll密度梯度离心,SSCs接种于Sertoli饲养层上,37℃下共培养,在倒置相差显微镜下观察细胞的生长特点,并对培养细胞进行C-Kit受体检测。结果:①增殖细胞的生长特点及形态学特征与文献报道精原干细胞的特征相符合。②C-Kit受体显示细胞膜呈强阳性。这些均符合精原干细胞的生物学特征。结论:精原干细胞在未加入细胞因子的Sertoli饲养层中能较长时间生长并分裂增殖。