大花蕙兰与春剑杂交原球茎增殖及分化研究

【研究目的】对大花蕙兰品种‘绿宝石’与春剑杂交原球茎增殖与分化进行研究。【方法】设置不同培养基、6-BA 和 NAA以及不同添加物对杂交兰原球茎增殖分化的进行探讨。【结果】KC培养基为最佳培养基;6-BA对原球茎的增殖影响不大, NAA对增殖影响较明显当浓度为0.2mg/L原球茎增殖效果最好;KC+6-BA2.0 mg/L+ NAA 0.5 mg/L对原球茎的分化效果最好;【结论】在培养基中加15mL/L香蕉汁最有利于杂交兰原球茎的增殖。     

生长素对分枝型蝴蝶兰种子胚离体培养的影响

以分枝型蝴蝶兰的种子为试材,选用1/2 MS为基本培养基,在蝴蝶兰种子发育的不同阶段使用不同浓度的IBA(0.5,1.0,1.5和2.0mg/L)和NAA(0.5,1.0,1.5和2.0 mg/L),并分别以1.0mg/L的NAA和1.5 mg/L的IBA作为对照,对蝴蝶兰种子进行原球茎诱导.结果表明:接种密度为1 500粒/40ml,生长素IBA在1.0-1.5 mg/L浓度范围内,比NAA有利于分枝型蝴蝶兰种子胚原球茎诱导,原球茎诱导率为97.2%;在蝴蝶兰原球茎进一步发育过程中,生长素NAA在1.0-1.5mg/L浓度范围内,比IBA有利于原球茎的生长发育.     

铁皮石斛组织培养及快繁技术研究

为建立铁皮石斛快繁技术体系,给生产提供参考,研究了铁皮石斛组织培养过程中的灭菌方法、腋芽诱导、原球茎的诱导、增殖与分化的最佳培养基配方。以铁皮石斛成熟茎段为外植体,探讨1/2MS培养基或MS培养基中添加不同浓度的激素对铁皮石斛组织培养过程中各生长、分化阶段的影响。研究表明,腋芽诱导最适宜培养基的配方为MS+ 6-BA 2.0 mg/L+ NAA 0.5 mg/L,诱导率达91.28%,平均芽数达2.34;原球茎诱导的最适宜培养基为1/2MS+ 6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L+2,4-D 1.0 mg/L,诱导率可达66.67%;原球茎增殖最佳培养基为1/2MS+ 6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L,原球茎分化最适宜培养基为1/2MS+ NAA 1.0 mg/L+ 6-BA 3.0 mg/L+ KT 1.0 mg/L,最适宜生根的培养基配方为1/2MS+NAA 2.0 mg/L+ AC 0.5 g/L。     

大花蕙兰摇瓶液体培养体系的建立

研究了液体培养基和外植体培养基对大花蕙兰原球茎增殖及丛生芽诱导的影响.结果表明:含6-BA2 mg/L、NAA0.1mg/L和椰子汁30 mg/L的1/2 MS液体培养基适合原球茎增殖,含6-BA 1 mg/L和NAA0.1 mg/L的1/2 MS液体培养基适合丛生芽增殖,含6-BA1 mg/L、NAA0.2mg/L和椰子汁30mg/L的1/2 MS液体培养基既可诱导原球茎的增殖,又可诱导丛生芽;此外,当外植体为原球茎时,有利于原球茎的增殖;当外植体为幼芽时,有利于丛生芽的增殖.     

木蓝愈伤组织诱导与不定芽分化培养

初步建立了木蓝(Indigofera bungeana Walp.)的离体再生培养体系，为其基因工程育种研究提供前期技术参考。通过种子无菌播种技术获得野生木蓝无菌实生苗，以胚轴、茎段和叶片为外植体，筛选木蓝愈伤组织诱导、不定芽分化、增殖、壮苗培养的最适培养基配方。结果显示，木蓝种子无菌播种发芽率达98%，最适培养基为1/2MS。3种外植体在不同培养基下均能诱导出愈伤组织，根据愈伤组织生长及质地色泽筛选出最适诱导培养基，其中，叶片为MS+0.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L NAA；茎段为MS+0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L 2,4-D+0.1 mg/L NAA；胚轴为MS+0.1 mg/L 6-BA+0.1 mg/L2,4-D+0.5 mg/L NAA。相比较叶片和茎段，胚轴来源的愈伤组织适于不定芽分化，最适分化培养基为MS+0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L 2,4-D+0.1 mg/L NAA和MS+2.0 mg/L 6-BA。不定芽增殖培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA，壮苗和生根的最适...     

不同倍性蝴蝶兰杂交种子的离体培养

研究了影响不同倍性蝴蝶兰杂交种子离体培养的因素.结果表明,播种方式、培养基、光照时间、温度和杂交组合明显影响蝴蝶兰原球茎产量.播种方式、培养基和温度对蝴蝶兰原球茎百粒重影响显著.有机添加物对蝴蝶兰试管苗生长发育影响显著.适合不同倍性蝴蝶兰杂交种子的培养方案是采用稀释法将蝴蝶兰种子播种到1/2 MS+6-BA0.2mg/L+NAA0.2 mg/L+CM 100 ml/L培养基上,在27℃下培养;播种后15天内每天光照5 h,15天后光照16 h,光强为20.27～13.51μmol/(m2-s);60天后将小苗转移到1/2MS+NAA0.2mg/L+土豆汁30g/L+AC0.5 g/L上壮苗,180天后炼苗移栽.     

铁皮石斛与钩状石斛杂交及种子无菌播种快繁研究

以铁皮石斛和钩状石斛为研究对象,通过人工辅助杂交获得杂交种子,诱导种子离体萌发,开展无菌播种技术研究.结果表明,铁皮石斛与钩状石斛杂交容易成功,杂交坐果率可达到80％;适宜的种子萌发培养基为MS+ 6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L,培养30 d时的萌发率为89.7％;培养基MS+6-BA 1.5 mg/L+ NAA0.1 mg/L+香蕉100 g/L+ AC 1.0 mg/L对原球茎的增殖最好;培养基MS+ 6-BA 1.5 mg/L+ NAA 0.1mg/L+马铃薯200 g/L+ AC 1.0 g/L对原球茎的分化最好;壮苗生根培养基配方为1/2 MS+ NAA 0.6 mg/L+香蕉100 g/L+AC 1.0 g/L,植株生长健壮,生根率100％,移栽成活率达95％以上.     

蕙兰杂交种子的无菌萌发和快速繁殖研究

本实验采用蕙兰传统品种‘崔梅’与普通蕙兰进行杂交,对不同发育阶段的种子进行无菌萌发实验,并作不同培养基的对照。对萌发原球茎的增殖及分化进行研究。探讨不同培养基、6-BA和NAA对根状茎增殖和分化的影响。结果表明: 110天的种子接种在KC培养基上萌发效果最佳,蕙兰原球茎增殖的最佳培养基为W+NAA0.5mg/L+6-BA1.0mg/L,根状茎分化和生根的最佳培养基为MS+NAA 1.0 mg/L +6-BA 0.5 mg/L。     

铁皮石斛原球茎诱导与增殖研究

以铁皮石斛嫩茎为外植体,采用幼嫩茎段→原球茎诱导→原球茎增殖途径,通过单因子、双因子以及正交试验诱导原球茎。研究结果表明,外植体灭菌条件为：70%酒精浸泡3s后,0.1%升汞溶液中浸泡8min,诱导铁皮石斛原球茎最佳培养基为MS＋6-BA0.5mg/L+NAA0.5mg/L+ 2,4-D1.0 mg/L,原球茎增殖最佳培养基为MS＋6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L。     

黄花矶松组织培养及培养基筛选研究

试验选用种子培养的黄花矶松无菌苗的子叶、茎段、下胚轴作为外植体材料,研究不同外植体的离体培养技术及其适宜的培养基。结果表明,生长素2,4-D对不定芽诱导具有明显的促进作用,在其浓度为1.5 mg/L时诱导率最高,子叶是诱导不定芽的良好外植体,最适培养基为MS+ 2,4-D 1.5 mg/L+ 6-BA 2.0 mg/L+ NAA 1.0 mg/L。黄花矶松的最适增殖培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+ NAA 1.0 mg/L,而且是以丛生芽的方式进行增殖的;最适生根培养基是1/2 MS+ KT 1.0 mg/L+ IBA 1.0 mg/L。     

蝴蝶兰原球茎诱导与增殖研究

以蝴蝶兰试管苗茎尖为外植体，接种于添加不同浓度激素配比的1／2MS培养基上进行原球茎诱导。试验结果表明：在NAA与6-BA的不同浓度组合中，以1／2MS＋NAA2．0mg／L＋6-BA4．0mg／L诱导效果最好，诱导率达65％；在NAA与Ad的不同浓度组合中，以1／2MS＋NAA2．0mg／L＋AD4．0mg／L诱导效果最好，诱导率55％；在原球茎的增殖培养中，以1／2MS＋NAA2．0mg／L＋6．BA2．0～4．0mg／L＋AD2．0mg／L培养基增殖效果最好，最高增殖系数可达9．98。     

白花兜兰的无菌播种和离体快速繁殖

为建立白花兜兰(Paphiopedilum emersonii)组织培养和离体快速繁殖体系,以授粉结果为180 d未开裂的白花兜兰种子为基础材料,研究不同的添加剂对无菌萌发、原球茎分化及其根诱导的影响,筛选出适宜白花兜兰生长增殖的培养基和原球茎诱导与增殖的培养基,以及炼苗时间和栽培基质。结果表明:诱导白花兜兰种子萌发的最佳培养基为MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.05 mg/L+100 mL/L椰乳;原球茎的诱导和增殖最佳的培养基为1/2 MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L+100 mL/L椰乳,有机添加物椰乳对种子的萌发和原球茎的诱导与分化均有较好的促进作用。1/2 MS+NAA 0.5 mg/L+IBA 1.0 mg/L+1.0 g/L活性炭对白花兜兰根的诱导效果最为理想;炼苗最佳时间为7 d,栽培适宜基质的配比为树皮∶珍珠岩∶腐殖土(1∶1∶1),移栽成活率达76%。     

多花黄精(Polygonatum cyrtonema Hua)高效再生体系的建立

为建立多花黄精高效再生体系,试验以多花黄精种子无菌萌发后形成的幼芽为材料,采用正交试验设计,筛选其愈伤组织和不定芽诱导的较优配方,并进一步开展了不定芽增殖、生根和移栽驯化试验。结果表明,MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L+2,4-D 1.0 mg/L有利于诱导无菌幼芽形成愈伤组织,诱导率达83.5%;不定芽诱导较好的培养基配方为MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L+2,4-D 0.5 mg/L和MS+6-BA3.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L,诱导率均为100%;不定芽增殖较好的培养基配方为MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA0.2 mg/L,增殖系数达4.7;适宜的生根培养基配方为1/2MS+NAA 0.1 mg/L;组培苗移栽到蛭石∶泥炭土∶珍珠岩=1∶2∶1的混合基质中,成活率达100%。试验构建了以多花黄精种子为外植体的离体高效再生体系,为多花黄精种苗快速繁殖提供技术途径。     

不同培养基成分对铁皮石斛组织培养的影响

以铁皮石斛无菌苗的茎段作为外植体,讨论MS培养基中添加不同浓度的激素对铁皮石斛的诱导、增殖、分化以及生根的影响。结果表明：最适合铁皮石斛原球茎诱导的培养基为MS+ 6-BA 0.5 mg/L+ NAA 1.5 mg/L,原球茎诱导率为95%;最适合原球茎增殖的培养基为MS+ 6-BA 1 mg/L+ NAA 1 mg/L;最适合原球茎分化的培养基为MS+ 6-BA 5 mg/L+ NAA 1 mg/L,其分化率达80%;最适合铁皮石斛根诱导的培养基为MS+IBA 1.5 mg/L+香蕉泥100 g/L,其生根率为100%。     

基于再生不定芽的蝴蝶兰继代扩繁体系建立

为降低蝴蝶兰通过再生原球茎途径频繁继代培养可能出现的变异及玻璃化风险、减轻继代培养中的褐化,以蝴蝶兰花梗茎段再生的营养芽为试验材料,进行基于再生不定芽的继代扩繁及抗褐化研究。结果显示,以5节花梗的中间腋芽茎段为材料,在VW+ 6-BA 5 mg/L+ NAA 0.1 mg/L+蔗糖30 g/L培养基上进行启动培养,能获得最高的营养芽诱导率。继代培养中,TDZ促进再生不定芽的效果比6-BA强。茎芽经过“切叶”处理,在培养基VW+ TDZ 1 mg/L+300 mg/L柠檬酸+10 g/L蔗糖+15%椰汁,或培养基VW+ 6-BA 5 mg/L+ NAA 0.1 mg/L+ 300 mg/L柠檬酸+10 g/L蔗糖+15%椰汁上进行继代培养,能获得最佳的继代扩繁效果。笔者研究认为初步建立了基于再生不定芽的蝴蝶兰继代扩繁体系。     

外源激素对大花型红花蝴蝶兰组培增殖、促壮及生根的影响

研究6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)以及萘乙酸(NAA)对大花型红花蝴蝶兰组培的影响,以‘大辣椒’(Phalaenopsis‘Big Chili’)、‘0436’(Phalaenopsis‘Red Swan’)以及‘阿里山姑娘’(Phalaenopsis‘Alishan Guniang’)三种典型的大花型红花蝴蝶兰为试材,筛选出最适宜蝴蝶兰组培外源激素种类和比例。主要结论如下:(1)增殖试验中,3个品种最适培养基均为MS+4.0 mg/L 6-BA;(2)促壮试验中,三个品种最适培养基均为1/2 MS+1.0 mg/L NAA;(3)生根试验中,‘大辣椒’和‘阿里山姑娘’的最适培养基是1/2 MS+4.0 mg/L6-BA+0.2 mg/L NAA,1/2 MS+5.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA最适合"0436"生根。本研究为不同品种的大花型红花蝴蝶兰组培建立了完整的快繁生产体系。     

培养基中NAA和6-BA浓度对红叶石楠外植体的影响

在红叶石楠组织培养基中设置不同的萘乙酸(NAA)和6-苄基腺膘呤(6-BA)的浓度组合,研究其对不定芽和不定根的诱导效果。结果表明,在红叶石楠组织培养的芽诱导、芽增殖、根诱导阶段,分别采用NAA0.2mg/L 6-BA1.0mg/L、NAA0.4mg/L 6-BA1.5mg/L、NAA0.4mg/L浓度,可获得最佳的不定芽、根诱导效果。     

猫儿屎的愈伤组织诱导和植株再生

以猫儿屎的幼嫩种子作为外植体,研究不同植物生长调节剂对猫儿屎不定芽诱导和增殖影响,建立猫儿屎不定芽增殖及植株再生的高频再生体系。结果表明:幼嫩种子在MS+0.1 mg/L KT+2.0 mg/L 2,4-D培养基中愈伤组织诱导率最高,可达92%;不定芽的分化增殖的最适培养基为1/2 MS+0.5 mg/L NAA+3.0 mg/L6-BA,繁殖系数可达14.49~19.32;不定芽生根诱导的最适培养基为1/2 MS+0.6 mg/L NAA,生根率可达79.83%,根系和小植株长势良好;完整小植株经炼苗后移栽到混合基质(腐植质:细河沙=1:1)中,成活率可达90%。     

马蹄金(Dichondra repens Forst.)组织培养和快速繁殖

为了探究马蹄金组织培养及快繁技术,本研究以马蹄金为材料,使用75%的酒精和10%NaClO对不同外植体(胚根,下胚轴,子叶)进行消毒处理,在不同激素浓度配比的MS培养基中进行丛生芽诱导、愈伤组织诱导及分化,成功建立了马蹄金的组培快繁体系。结果表明:利用马蹄金下胚轴为外植体直接诱导不定芽效果较好,其最适程序为:流水冲洗30 min+75%酒精30 s+10%NaClO 9 min,污染率为5%,成活率为75%;下胚轴不定芽诱导的最适培养基为MS+1 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA,诱导率为93.55%,出芽指数为8.86;胚根愈伤组织诱导的最适培养基为MS+1 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA,诱导率为100%,下胚轴愈伤组织诱导的最适培养基为MS+0.5 mg/L 6-BA+1 mg/L NAA,诱导率为95.24%,子叶愈伤组织诱导的最适培养基为MS+0.3 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA,诱导率为100%;愈伤组织不定芽分化的最适培养基为1/2MS+1.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA,芽诱导率为20%,平均芽数为12.83;组培苗诱导生根的最适培养基为不加激素的1/2MS培养基;生根苗以瓶盖全开的炼苗方式移栽到以河沙为基质的育苗盒中成活率为100%,且添加蒸馏水与自来水对植株生长并无明显影响。本研究成功建立了马蹄金组织培养与快繁体系,为马蹄金种质资源改良及优质种苗生产提供了技术参考。     

大花萱草不定芽直接诱导和植株再生的研究

本研究旨在不通过愈伤途径，直接诱导大花萱草不定芽，并建立相应的植株再生技术体系。实验以大花萱草‘32-1’幼芽为外植体，配制不同激素和活性炭的培养基，考察各因素对大花萱草植株再生的影响。结果表明：不同激素配比对大花萱草‘32-1’初代培养、继代增殖和生根培养影响差异显著。最适初代培养基为MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 2.0 mg/L，启动率和增殖系数分别是100.00%和5.60，可直接诱导出不定芽；最适增殖培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L，增殖系数为3.47；最佳生根培养基为1/2MS+NAA 1 mg/L+AC 2 g/L。