猪血凝性脑脊髓炎病毒抗体的调查

应用血凝和血凝抑制试验检测了从吉林省部分地区采集的猪血清中血凝性脑脊髓炎病毒（HEV）抗体。结果，212份样品中有94份呈现HEV抗体阳性反应，阳性率高达44．3％。被采集血清的猪未表现临床症状，说明该地区的猪群中存在HEV隐性感染。     

猪血凝性脑脊髓炎病毒的血清学调查

应用血凝和血凝抑制试验检测了从辽宁省部分地区采集的猪血清中血凝性脑脊髓炎病毒（HEV）的抗体滴度。结果表明,368份血清样品中,有162份呈抗体阳性反应,阳性率高达44.0%。被采集血清的猪未表现出临床症状,说明该地区存在血凝性脑脊髓炎病毒的隐性感染。     

猪血凝性脑脊髓炎研究进展

流行病学及病理变化 猪血凝性脑脊髓炎病毒属于冠状病毒科(Coronaviridae)冠状病毒属(Coronavirus)的成员，引起幼猪的一种急性、高度接触性传染病。通常只侵鲁1～3周龄的乳猪，不感染其他动物。流行病学研究发现猪的HEV感染甚为普遍，很可能是全球性的。     

猪血凝性脑脊髓炎病毒N蛋白单克隆抗体制备及表位鉴定

为制备猪血凝性脑脊髓炎病毒(porcine hemagglutinating encephalomyelitis virus, PHEV)N蛋白的单克隆抗体,本研究构建了pET-32a-N重组质粒,原核表达并纯化重组N蛋白,免疫BALB/c小鼠,细胞融合后利用间接ELISA进行筛选,获得了3株稳定分泌的阳性杂交瘤细胞株,分别命名为2C3、4F3、5C6。Western blot与间接免疫荧光试验表明,3株单抗均能与293T细胞中表达的N蛋白产生特异性反应。经测定,3株单抗的效价均为1×10⁶,重链类型均为IgG1,轻链类型均为κ。利用一系列表达的部分重叠的N截短蛋白片段,经Western blot鉴定单抗所识别的抗原表位,结果显示,²⁶⁷KPRQK²⁷¹为单抗2C3、4F3、5C6所识别的表位。本研究为PHEV临床检测方法的建立和表位疫苗的研发奠定了基础。     

猪血凝性脑脊髓炎研究进展

猪血凝性脑脊髓炎(PHE)是由血凝性脑脊髓炎病毒(HEV)感染引起猪的一种急性传染病,主要侵害1周龄~3周龄的哺乳仔猪。感染仔猪以呕吐、衰竭和神经症状为特征,病死率很高。血凝性脑脊髓炎病毒具有嗜神经性,主要从感染部位经外周神经向中枢神经系统传播,引起中枢神经系统损伤,从而造成非化脓性脑炎的病变。论文主要对猪血凝性脑脊髓炎的病原、临床症状和病理变化、致病机制、潜在危害及防治等方面进行综述。     

猪血凝性脑脊髓炎病毒感染对小鼠脑内星形胶质细胞的影响

为阐明猪血凝性脑脊髓炎病毒(porcine hemagglutinating encephalomyelitis virus,PHEV)感染后小鼠脑内星形胶质细胞的活化情况,本研究通过滴鼻途径将PHEV接种BALB/c小鼠,分别运用qRT-PCR、Western blot和间接免疫荧光方法检测感染后不同时间点小鼠脑组织...     

猪血凝性脑脊髓炎病毒抗原捕获ELISA诊断方法的建立

采用实验室保存的杂交瘤细胞,通过扩大培养、接种小鼠、收集腹水、腹水纯化等程序得到了猪血凝性脑脊髓炎病毒(HEV)单克隆抗体,并对其效价进行了测定.用HEV单克隆抗体作为检测抗体,猪多抗作为捕获抗体,建立了检测HEV的抗原捕获ELISA方法,通过对各步反应条件的优化,最终获得最佳工作条件为:猪多抗1:2 000稀释,单抗1:4 000稀释,酶标抗体为1:4 000稀释.特异性和敏感性试验结果表明:该方法对TGEV、HCV、PEDV和PRV等病毒无特异性交叉反应,其最低检测下线为3.75 mg/L.与RT-PCR方法的对比试验证明,抗原捕获ELISA阳性检出结果与PCR方法相一致.上述结果说明,已成功建立特异、敏感的用于HEV检测的抗原捕获ELISA方法,为临床快速诊断HEV试剂盒的研制奠定了基础.     

血凝性脑脊髓炎病毒血凝抑制试验方法的研究

为检测某猪场的猪感染血凝性脑脊髓炎病毒的情况,用250 mL/L 的鸡红细胞和200 g/L的高岭土去除非特异性物质,使用4单位抗原及5 mL/L鸡红细胞做HI 试验,发现这些条件较适宜。用此法对其他5 种猪传染病抗血清进行检查,发现均不产生非特异性血清学反应。另外,本试验用滤纸吸附血清与分离血清做HI比较试验,其HI价差异不显著,从而为以后进行血清学调查提供了一种便利的方法。用分离的HEV与日本HEV 67N毒株抗原进行比较,两者的HI价一致。     

猪血凝性脑脊髓炎的研究现状

猪血凝性脑脊髓炎是由血凝性脑脊髓炎病毒(HEV)感染引起猪的一种急性传染病，主要侵害乳猪。以呕吐、衰竭和脑脊髓炎为特征，死亡率很高。血清学检测证明猪感染HEV很普遍，可能是世界性的。作者对猪血凝性脑脊髓炎的病原、发病机理、临床症状、病理变化及常用的诊断技术和防制措施等几个方面的研究现状作了简要综述。     

一例猪血凝性脑脊髓炎实验室诊断与防治

猪血凝性脑脊髓炎是一种病毒性传染性疾病,它是由凝血性脑脊髓炎病毒感染引发,临床上主要以呕吐、采食停止、便秘、身体逐渐消瘦、中枢神经系统功能障碍为主要特征.不同年龄的猪受到病原侵染之后,所表现出来的症状存在很大差异性,其中幼龄猪感染病毒之后造成的死亡率最高.近年来,随着生猪养殖产业不断向着集约化规模化方向发展,猪血凝性脑...     

猪血凝性脑脊髓炎病毒在PK-15细胞中的增殖特性

利用光学显微镜观察、间接免疫荧光（IFA）、Real-time PCR和病毒感染滴度（TCID50）等测定方法,分别从病毒抗原分布、病毒基因组复制水平以及病毒感染滴度变化等方面对猪血凝性脑脊髓炎病毒（HEV-67N）在猪肾上皮传代细胞系（PK-15细胞）上的增殖特性进行了研究。使用HEV-67N株感染24孔细胞培养板内的PK-15细胞,接种剂量为400个TCID50（104.37）/孔,间接免疫荧光检测结果显示,在感染后8h即可检测到被荧光抗体标记的感染细胞,且随着感染时间的延长,出现荧光的细胞数量逐渐增多,至感染后32h,几乎所有的细胞均出现有荧光。Real-time PCR检测结果显示,病毒基因组RNA的复制在感染后32～48h呈快速上升趋势,其基因组拷贝数在感染后48h达到最高值,之后增殖速度减慢,至感染后56h细胞出现CPE。TCID50的测定结果显示,HEV感染滴度的变化趋势与基因组RNA含量的变化相一致,在感染后32～48h增殖速度最快,之后逐渐减缓,至72h病毒感染滴度达到最高。     

猪血凝性脑脊髓炎的诊断和防控

猪血凝性脑脊髓炎(PHE),也称呕吐消耗病、冠状病毒性脑膜脑炎,是猪的一种急性传染病,是由血凝性脑脊髓炎病毒感染所导致,仅猪易感,1~3周龄最危险.本病的主要特征是呕吐、便秘和厌食,会导致突发死亡或慢性消瘦.多数亚急性临床症状,带毒病猪是传染源.建立快速RT-PCR诊断方法,检测猪血凝性脑脊髓炎抗原,对发展养猪生产具有重要的意义.本病尚无有效的治疗药物和预防疫苗,重在检疫,防止病猪流入.     

猪血凝性脑脊髓炎实验室诊断技术

血凝性脑脊髓炎病毒（HEV）可引起2种临床类型的疾病：脑脊髓炎及呕吐和消耗病（VWD）。主要对猪血凝性脑脊髓炎的实验室诊断技术进行了阐述,以期为该病的诊断提供参考。     

猪血凝性脑脊髓炎实验室诊断方法综述

猪血凝性脑脊髓炎是引起仔猪神经系统障碍的重要传染病之一,严重危害养猪业健康发展。正确诊断猪血凝性脑脊髓炎对防治该病极为关键。文章围绕该病病原分离鉴定、血清学诊断、分子生物学诊断这三方面研究进展分别展开阐述,以期了解该病诊断方面的研究进展。     

猪血凝性脑脊髓炎病毒抑制神经细胞干扰素的产生

猪血凝性脑脊髓炎病毒(PHEV)属于β属冠状病毒成员,其具有典型的嗜神经性。多种冠状病毒可逃避宿主先天性免疫的识别而表现出明显的致病性,但宿主的先天性免疫在PHEV感染过程中发挥的作用还不是很清楚。为了明确神经细胞在PHEV感染过程中细胞自身的免疫应答状况,本研究对参与先天性免疫的重要炎性细胞因子和相关的通路变化情况进行了检测分析。用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法对PHEV感染小鼠脑神经瘤母细胞(N2a)不同时间点的样品进行检测,结果证明没有IFN-β的表达,说明PHEV不能引起神经细胞产生Ⅰ型IFN。收集感染N2a细胞24h的上清,ELISA方法检测TNF-α、IL-1β、IL-6和IFN-γ的分泌情况,仅有IL-6呈现高水平表达,说明PHEV感染N2a细胞诱发了IL-6的先天性免疫反应。免疫荧光方法检测PHEV感染N2a细胞24h后重要核转录因子IRF-3和NF-κB的核定位情况,发现NF-κB移位到了胞核,IRF-3仍然存在于胞浆,说明PHEV仅激活了NF-κB信号通路。以上试验结果表明,PHEV进入中枢神经系统时可逃避神经细胞以IFN-β为主的免疫识别,该结果可为深入开展PHEV抑制机体干扰素产生的机制研究奠定基础。     

猪血凝性脑脊髓炎病毒不同佐剂灭活疫苗免疫BALB/c小鼠的比较试验

用血凝/血凝抑制试验（HA/HI）检测自制的猪血凝性脑脊髓炎病毒（HEV）氢氧化铝胶灭活苗和蜂胶佐剂灭活苗免疫BALB/c小鼠后的抗体效价,依据小鼠抗体效价比较不同免疫佐剂的效果。结果表明,用氢氧化铝胶佐剂配制的疫苗可刺激接种动物产生快速免疫应答反应,抗体产生效价高、维持时间长,其效果优于其它佐剂,有望成为HEV灭活疫苗的候选佐剂。     

猪血凝性脑脊髓炎病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立与应用

为建立一种快速、准确、常规的猪血凝性脑脊髓炎病毒(porcine hemagglutinating encephalomyelitis virus,PHEV)检测方法,根据PHEV N蛋白基因序列,设计1对引物和1条探针,建立了PHEV实时荧光RT-PCR检测方法。该方法特异性好,与猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪瘟病毒(CSFV)和猪圆环病毒2型(PCV2)均无交叉反应;用阳性质粒Puc57-PHEVn评估其敏感性,发现检测下限达10~(-6) ng/μL(224拷贝/μL)。采集233份发病猪组织样品进行临床检测,发现该方法与巢式RT-PCR的符合率达98.3%,准确筛查出巢式RT-PCR并测序阳性的样品14份,且检出率高于巢式RT-PCR。结果表明,本方法敏感、特异,可用于PHEV临床样品的检测。     

猪血凝性脑脊髓炎病原学特征及检测技术研究进展

猪血凝性脑脊髓炎是由猪血凝性脑脊髓炎病毒(PHEV)感染引起的一种以仔猪呕吐、衰竭或显著神经症状为主要特征的急性、高度接触性传染病,给世界养猪业造成了严重经济损失。本文阐述了PHEV的发现、分类地位、形态特征、理化特性、基因组结构及功能、培养特性、流行病学与致病性等,介绍了PHEV检测方法,包括病毒分离与鉴定、血凝/血凝抑制试验等6种血清学方法,以及RT-PCR等3种分子生物学方法,以期为该病诊断和防控提供参考。