猪源致病性大肠杆菌的血清型、毒力基因及抗菌药耐药性的调查

【目的】探讨猪大肠杆菌病分离的E.coli的优势血清型与毒力基因和耐药性的相关性。【方法】采用玻片凝集法测定了猪大肠杆菌病有关的血清型分布,PCR方法调查7种毒力相关基因,用微量稀释法测定了所有菌株对18种抗菌药的敏感性。【结果】超过一半的菌株含有astA,Stx2e和eaeA基因,且毒力基因组合Stx2e+astA和Stx2e+eaeA较为流行。定型菌株53株,分别属于15个不同的血清型,其中O8和O64为主要流行的血清型。O8型菌株中,所有均携带astA基因,多数耐四环素、环丙沙星、恩诺沙星、氯霉素和磺胺甲噁唑,但对安普霉素,阿米卡星和多黏菌素E敏感;而O64型菌株中,多数携带astA和Stx2e基因,所有对环丙沙星、恩诺沙星、氯霉素和磺胺甲噁唑耐药,但对多黏菌素E和卡那霉素敏感。【结论】O8和O64为主要流行的血清型,两种血清型菌株拥有相似的毒力基因谱和耐药表型,但有不同的敏感表型。     

猪大肠杆菌的血清型与毒力基因

为了解苏中地区规模化猪场大肠杆菌血清型及毒力基因的特点,无菌采集苏中地区45个规模化养猪场疑似大肠杆菌感染的病死猪有明显病变的肝、心、脾、肺等病料413份.通过细菌的分离培养,并进行生化试验和血清型鉴定,共分离到208株大肠杆菌,其中145株能定型,63株未能定型,定型菌株分别属于19种不同的血清型.同时对鉴定出的145株猪源大肠杆菌进行毒力基因检测,发现苏中地区猪大肠杆菌所含毒力基因estⅡ为50.3％,estⅠ为39.3％,LT为30.3％,Stx-2e为20.7％,Intimin为15.9％,其中具有毒力基因estⅠ和estⅡ的猪大肠杆菌较为流行.     

腹泻仔猪肠道大肠杆菌分离鉴定与毒力基因及耐药性分析

为了解粤西部分地区腹泻仔猪中大肠杆菌流行情况及耐药谱,采用鉴别培养基、革兰氏染色镜检、快速生化特性鉴定、PCR鉴定以及药敏纸片琼脂扩散法等方法,对粤西地区不同养殖场中114份腹泻仔猪直肠拭子样本进行大肠杆菌分离鉴定、毒力基因以及耐药性分析。结果表明,所有样本均分离得到优势大肠杆菌,其生化特性与大肠杆菌标准质控菌株ATCC 25922一致。在毒力基因检测试验中,对所有大肠杆菌分离菌株（共114株）进行9种毒力基因检测,结果显示,毒力基因总检出率为90.35%(103/114)。根据毒力基因PCR鉴定结果确定各毒力基因检出率：STa(71.93%,82/114)、STb(61.40%,70/114)、LT(11.40%,13/114)、K99(7.02%,8/114)、F41(6.14%,7/114)、F18ac(5.26%,6/114)、K88(0.88%,1/114)、Stx2e(3.51%,4/114),而黏附素987P未在分离菌株中检出。药敏试验结果显示,大肠杆菌对磺胺甲基异恶唑、氨苄西林、四环素均高度耐药,耐药率为100%(114/114)、97.37%(111/114)、96....     

中国不同地区家禽大肠杆菌血清型分布和耐药性比较研究

 近几年在中国东北、华南、华中和华北地区采样，得到鸡泄殖腔拭子292份、饲料和水29份、鸡舍尘土和垫料28份，共349份。用麦康凯培养基分离大肠杆菌，共分离到大肠杆菌241株（东北地区107株；华南地区107株；华中地区12株；华北地区15株），分离率为69.1%。共有血清型67种，每种血清型1～2株，个别血清型有10株左右。呈地区性和多样性分布，有些地区有优势型，有的地区优势型不明显。细菌耐药性非常严重，以多重耐药为主，耐10～19种药物的菌株占50%以上，有一定地区性。总体上耐药率最高的是萘啶酸（88.1%），其它依次为四环素85.7%、磺胺甲基异恶唑81.0%、复方新诺明77.1%、氨苄西林76.2%、阿莫西林74.3%、链霉素66.2%、氟喹诺酮类57.1%～66.7%、氯霉素52.9%、庆大霉素39.0%、卡那霉素36.2%。 细菌对氟苯尼考、奥格门丁、头孢曲松、头孢噻吩、阿米卡星普遍敏感，耐药率仅为0～19.5%。使用抗菌药的鸡场，对相应药物耐药率较高。该项研究为进一步分析研究耐药机理和制订兽医临床抗菌药使用规范奠定了基础。     

产志贺毒素大肠杆菌stx2a和stx2b的血清和牛奶抗体检测

于新桥医院采集健康人群血清535份,两个屠宰场采集商品猪血清415份,5家奶牛场和1家奶站采集新鲜牛奶326份,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清(牛奶)中的stx2a和stx2b抗体.用P/N2.1作为阳性判定标准,535份健康人群血清检测到stx2a抗体阳性和stx2b抗体阳性血清各21份(3.93%); 415份商品猪血清检测到stx2a抗体阳性血清4份(0.96%),stx2b抗体阳性血清2份(0.48%);326份新鲜牛奶检测到stx2a抗体阳性血清25份(7.46%),stx2b抗体阳性血清21份(6.44%).牛奶中stx2抗体阳性率最高,健康人群血清次之,商品猪血清的阳性率最低.由此表明重庆市STEC菌株中携带stx2基因.     

产志贺毒素大肠杆菌stx2基因荧光定量PCR检测方法的建立及应用(英文)

[目的]建立检测产志贺毒素性大肠杆菌(STEC)stx2基因荧光定量PCR方法。[方法]根据GenBank中已发表的STEC stx2基因序列,在保守区域设计PCR引物和探针,构建重组质粒作为阳性模板,优化反应条件,建立荧光定量PCR方法。[结果]利用优化的荧光定量PCR反应体系建立了标准曲线。表明起始模板浓度与Ct值之间线性关系好,相关系数R2均达0.995以上;此方法特异性好,对10种非STEC肠道病菌无特异性扩增;敏感性高,初始模板的检出下限达1.0×102拷贝数/μl;重复性好,批内、指间变异系数均分别小于1%和5%。[结论]该研究成功建立了检测STEC stx2基因的荧光定量PCR方法,为快速检测样品中STEC提供了技术手段。     

湖南西部地区鸡大肠杆菌血清型分布及耐药性分析

[目的]研究湖南西部地区鸡大肠杆菌的血清型分布及其耐药性。[方法]从湖南西部地区12县市12个养鸡场分离出147株鸡源大肠杆菌,进行血清型鉴定,并测定分离率高的血清型对抗菌药物的敏感性。[结果]在分离到的18个血清型中,O_6、O(22)、O_8和O_4血清型分离率最高,分别为17.7%、12.2%、11.6%和10.2%,为优势型。按NCCLS推荐的纸片扩散法测定了其对14种抗菌药物的敏感性。结果表明,细菌耐药性严重,以多药耐药为主,分离菌对四环素和萘啶酸的耐药率最高,分别为96.6%和85.0%,细菌对头孢噻肟、头孢噻吩、头孢曲松较为敏感,其耐药率在2.0%～8.2%。[结论]为有效防治湖南西部地区鸡大肠杆菌病提供了有价值的参考资料。     

猪肉源金黄色葡萄球菌毒力基因检测与耐药性分析

【目的】了解陕西关中地区猪肉中金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的污染状况、耐药性及其毒素基因的分布。【方法】采集陕西关中6个地区的猪肉165份,按国标GB/T 4789.10-2010的方法,对其中的金黄色葡萄球菌进行分离,采用PCR方法对该菌进行确证并对其相关基因(如nuc、mecA、PVL、SEs和ETs)进行检测,最后采用琼脂稀释法检测金黄色葡萄球菌对11种抗菌药物的耐药性。另外,在BP平板中分别添加头孢西丁(4μg/mL)和苯唑西林(4μg/mL),分离耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)。【结果】165份样品的金黄色葡萄球菌污染率为33.33%(55/165);从中分离出103株金黄色葡萄球菌,但未检测出MRSA,这些菌对甲氧苄啶的耐药性最强,耐药率为100%;其次对红霉素和四环素的耐药率较高,分别为57.28%和34.95%;对苯唑西林、庆大霉素、氯霉素、环丙沙星的耐药率分别为2.91%,10.68%,2.91%和3.88%;所有菌株对头孢西丁、头孢哌酮、万古霉素、阿米卡星均敏感,同时得到21种耐药谱,多重耐药率达20.39%。猪肉金黄色葡萄球菌中杀白细胞素基因(Panton-valentine leu-kocidin,PVL)的检出率为34.95%,肠毒素基因(SEs)中sej的检出率最高,为98.06%,然后依次为sea(50.49%)、see(34.95%)、sed(31.07%)、sec(13.59%)、seh(8.74%)、sei(8.74%)、seg(6.80%)和seb(1.94%);同时得到71种毒素基因型,以sea+sej(11.65%)最为流行,分布地区不尽相同,其次为PVL+sea+see+sej(9.71%),耐红霉素的金黄色葡萄球菌含的毒素基因类型比较复杂,sej基因检出率高达98.68%。在BP平板中分别添加头孢西丁和苯唑西林,均未检测出MRSA。【结论】猪肉存在金黄色葡萄球菌的污染,其污染菌株存在多重耐药性并携带较多毒素基因,提示应加强猪肉金黄色葡萄球菌的监测。在BP平板中分别添加头孢西丁(4μg/mL)和苯唑西林(4μg/mL)筛选MRSA的方法不一定可靠,其可信度有待证明。     

临床分离粪肠球菌的毒力基因和耐药基因检测及其耐药性研究

分离女性阴道中的粪肠球菌（Enterococcus faecalis）,通过PCR和Kirby-Bauer(K-B)纸片扩散法探究其毒力基因、耐药基因及其耐药表型,为揭示粪肠球菌感染机制及其临床治疗提供科学依据。结果表明：从157个样品中共分离出22株粪肠球菌;在这些粪肠球菌中：毒力基因检出率为efa A (100%)、asa1 (90.9%)、cyl A (90.9%)、fsr (90.9%)、cpd (90.9%)、acm (86.4%)、gel E (81.8%)、esp (68.2%)、ace (54.5%)和hyl (0);耐药基因的检出率为van A (0)、van B (0)、van C (18.2%)、aac (40.9%)、ant(6)-1 (59.1%)、erm B (68.2%)、mef A(54.5%)、tet M (72.2%)和tem (81.8%);药敏结果显示粪肠球菌对万古霉素、呋喃妥因、利奈唑胺、替考拉宁敏感;对其他抗菌药物具不同程度的耐药。由此得出,阴道易受粪肠球菌感染,体外实验支持糖肽类抗菌药物可用于粪肠球菌感染的临床治疗。     

广西地区猪大肠杆菌血清型调查及耐药性检测

为了解广西地区猪大肠杆菌近年流行的血清型及耐药情况,对从广西10个市（县）50多个猪场采集的发病仔猪直肠拭子、肠内容物、肠系膜淋巴结等样品进行菌株分离、血清型鉴定及耐药性检测。结果表明,从样品中分离出103株致病性大肠杆菌,分属29个血清型,其中主要流行血清型为O138、O21、O101、O18、O9、O85;药敏试验结果表明,大肠杆菌致病菌株对头孢三嗪、氟苯尼考、头孢西丁、先锋霉素V、丁胺卡那等5种抗生素高度敏感,而对青霉素、利福平、阿莫西林、强力霉素、卡那霉素、链霉素、痢特灵等药物的耐药性菌株比例均大于60．0％,说明广西地区猪大肠杆菌致病菌株耐药性强、耐药谱广。     

牛源无乳链球菌耐药性与毒力基因的表达量差异分析

【目的】 研究无乳链球菌对抗菌药物的耐药性,分析无乳链球菌毒力基因与耐药基因的携带情况。【方法】 分别采用微量肉汤稀释法和普通PCR的方法,检测牛源无乳链球菌对16种抗菌药物的耐药性和相关耐药基因及毒力基因,并且采用荧光定量PCR技术对不同菌株的8种毒力基因的表达量差异进行分析。【结果】 （1）无乳链球菌对11种药物的敏感性达到了65%以上,其中敏感性最高的是氟苯尼考（92.4.%）和头孢噻呋（88.4%）,对氨苄西林、红霉素、克林霉素的耐药率均达到了50%以上,对磺胺异恶唑的耐药率也达到了45%以上。（2）无乳链球菌耐药基因gyrA、sul1、ermB、ermC的检出率分别为100%、 86.67%、 93.3%、 33.3%,而ermA、sul2、sul3及parC 4种耐药基因未检出。（3）无乳链球菌毒力基因pavA、cfb、fbsA、bibA、cspA、sip、iagA、hylB的检出率为100%,rib检出率为13.3%,bca的检出率为53.3%,cyl E检出率为73.3%;未检测到bac、lmb、scp B这三种毒力基因。（4）不同菌株之间毒力基因的表达量有显著性差异（P<0.05）。【结论】 无乳链球菌对红霉素和克林霉素的耐药率较高,无乳链球菌毒力因子是宿主感染疾病的重要因素。     

猪源大肠杆菌耐药性及相关耐药基因检测

【目的】 研究新疆阿克苏地区某规模化猪场猪源大肠杆菌对临床常用抗菌药物的耐药情况及相关耐药基因携带情况,分析耐药表型与耐药基因之间的关系。【方法】 采用琼脂稀释法,对分离鉴定的443株猪源大肠杆菌进行猪场常用6大类13种抗菌药物最小抑菌浓度的测定。采用PCR方法,检测13种抗菌药物相应的4大类10种耐药基因。【结果】 该猪场猪源大肠杆菌对被检的8种抗菌药物耐药率超过70.0%,其中对恩诺沙星、链霉素、大观霉素、金霉素、土霉素的耐药率高达90.0%以上,对阿米卡星、安普霉素、头孢噻呋、多黏菌素E具有较好的敏感性,耐药率未超过25.0%;多药耐药结果以7~9耐为主,占63.6%。除tetK外,对被检的其他9种耐药基因均有检出,以携带floR(66.4%)和ant(3″)-Ia(66.4%)耐药基因为主。【结论】 新疆阿克苏地区某规模化猪场猪源大肠杆菌至少对被检的1种抗菌药物表现为耐药,且多药耐药情况严重,耐药谱广,耐药基因携带率高,应从基因水平对耐药大肠杆菌进行传播机制的监测。     

新疆伊犁地区不同动物源大肠杆菌耐药性调查

【目的】研究新疆伊犁地区不同动物源大肠杆菌对临床常用抗菌药物的耐药情况。为临床合理用药和防止大肠杆菌产生耐药性提供科学依据。【方法】采用琼脂稀释法对伊犁地区不同动物源粪样中分离出的723株大肠杆菌(猪源89株、牛源164株、鸡源270株和羊源200株)进行临床常用10种抗菌药物的耐药性检测。【结果】(1)牛源大肠杆菌主要对安普霉素(26.8%)耐药;多药耐药以0耐(62.0%)为主。(2)羊源大肠杆菌主要对阿莫西林/克拉维酸(77.5%)、氨苄西林(69.5%)、恩诺沙星(46.0%)、诺氟沙星(45.0%)和安普霉素(43.5%)耐药;多药耐药以4耐(16.0%)和6耐(16.0%)为主。(3)猪源大肠杆菌主要对氨苄西林(66.0%)、阿莫西林/克拉维酸(64.0%)、氟苯尼考(64.0%)、恩诺沙星(53.0%)、诺氟沙星(49.0%)、环丙沙星(36.0%)和庆大霉素(31.0%)耐药;多药耐药以2耐(12.0%)、5耐(13.0%)和7耐(12.0%)为主。(4)鸡源大肠杆菌主要对氨苄西林(74.4%)、阿莫西林/克拉维酸(73.0%)、氟苯尼考(71.1%)、恩诺沙星(65.9%)、诺氟沙星(61.1%)耐药;多药耐药以7耐(17.7%)和8耐(14.4%)为主。【结论】不同动物源大肠杆菌耐药程度由高到依次为鸡源菌>羊源菌>猪源菌>牛源菌,加强伊犁地区大肠杆菌的耐药性检测。     

新疆库尔勒地区羊源产志贺毒素大肠杆菌及其耐药性分析

为了解新疆库尔勒地区羊源产志贺毒素大肠杆菌（Shiga toxin-producing Escherichia coli,STEC）毒力基因的分布情况及其耐药性,对新疆库尔勒地区羊肉生产环节（养殖场、定点屠宰场和市场）的282份样品进行STEC的分离鉴定,并检测毒力基因的编码情况,进一步检测了17种常用抗生素的耐药情况。结果表明：羊肉生产环节样品中检出72株STEC,检出率为25.5%。72株STEC中编码毒力基因stx1+stx2、stx1、stx2、rfbE、eae、hly的数量分别为22、45、2、0、4、51个。其中,羊养殖场中存在较多的非O157 STEC,检出率为37.3%;stx以stx1为主,检出率达到了652%。72株STEC中以β-内酰胺类、氨基糖苷类、大环内酯类抗生素耐药为主,STEC菌株的多重耐药比较严重,最多可耐9种抗生素,多重耐药情况主要是耐1种和耐2种抗生素。研究表明,羊肉生产环节中羊养殖场存在大量的非O157 STEC菌株,且耐药情况比较严重,务必预防源头污染。     

副猪格拉菌血清 2 型毒力及耐药性分析

【目的】副猪格拉菌是引起猪格拉泽氏病的病原,是危害养猪业最为严重的细菌性病原之一,该菌血清型众多,不同血清型之间交叉保护力弱。血清 2 型是中等毒力毒株,近年来临床分离比例越来越高,危害越来越严重。从河南某规模化猪场保育猪群分离到副猪格拉菌血清 2 型并进行系列试验,为科学防控该病提供参考。【方法】对副猪格拉菌临床疑似病例猪只无菌采集肺脏、气管、心血等样品,通过细菌分离纯化、革兰氏染色镜检、常规 PCR、豚鼠致病性试验及琼脂扩散药敏试验等方法,对疑似细菌进行形态观察、鉴定、血清型分型、毒力基因检测、耐药基因检测、致病性和耐药性等一系列生物学特性研究。【结果】从肺脏样品中分离获得 1 株副猪格拉菌,经鉴定为血清 2 型,该菌株携带 vta1、vta2、vta3、wza、ompP2、nanH、cdtA、cdtB、cdtC、espP2 毒力基因,对豚鼠有较强的致病力。该菌株携带有 aadA1、strA、strB、aphA1、tet(B)、sul2 多个耐药基因,对青霉素 G、卡那霉素、阿米卡星、链霉素、四环素、土霉素、复方新诺明有较强的耐药性;对头孢噻呋、头孢他啶、阿莫西林、氨苄西林、左氟沙星、氧氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星敏感性较好,临床用药效果显著。【结论】分离出的副猪格拉菌 2 型菌株毒力较强,且能透过血脑屏障,有明显的多重耐药性。研究结果可为副猪格拉菌血清 2 型流行病学调查、致病机制研究以及临床防控措施制定提供参考。     

辽宁地区猪源大肠埃希菌氨基糖苷类抗生素耐药基因的检测与分析

为了解辽宁地区猪源大肠埃希菌对氨基糖苷类抗生素的耐药情况,采用K-B纸片法对65株猪源大肠埃希菌菌株进行6种氨基糖苷类抗生素的药敏试验,同时采用PCR方法对耐药菌株rpsl基因和4种氨基糖苷类钝化酶基因aac(3)-Ⅳ、aad A、aac(6')-Ⅰb-cr、aac C4进行检测及序列分析,并将阳性样品与Gen Bank中登录的序列进行同源性比较。结果显示,辽宁地区猪源大肠埃希菌对链霉素、妥布霉素、新霉素、卡那霉素、丁胺卡那霉素、庆大霉素的耐药率分别为26.2%、15.4%、18.5%、29.2%、4.6%、21.5%;23株耐药菌株rpsl基因检出率为100%;4种氨基糖苷类钝化酶基因aac(3)-Ⅳ、aad A、aac(6')-Ⅰb-cr、aac C4检出率分别为13.0%、8.7%、69.6%、4.3%。以上结果表明,在氨基糖苷类抗生素中耐药性最低的是丁胺卡那霉素,rpsl基因及氨基糖苷类钝化酶基因普遍存在于辽宁地区猪源大肠埃希菌中。     

规模化养殖场大肠杆菌的分离鉴定与耐药性监测

从武汉郊区规模化养殖场采集腹泻仔猪的棉拭子和病死动物的泄殖腔分泌物或肝脏,分离鉴定出致病性大肠杆菌73株,分离率为100%.采用K-B法对分离菌株进行体外药物敏感试验.根据CLSI2006标准判定结果.结果显示,猪源性大肠杆菌仅仅对阿米卡星和大部分头孢类抗菌药物的耐药率较低,对多数抗菌药物均表现为较高的耐药率,并呈现出严重的多重耐药现象,主要表现为7重耐药、8重耐药、9重耐药和10重耐药;禽源性大肠杆菌对头孢类、氨基糖苷类和硝基呋喃类抗菌药物的耐药率<30%,其他的均＞75%,多重耐药主要表现为6重耐药,总体看来.其耐药性较猪源性大肠杆菌轻微.     

132株临床分离仔猪大肠杆菌的耐药性分析

为了解吉林省不同地区猪场仔猪大肠杆菌的耐药性情况,实验采用Kirby-Bauer氏法(K-B法)测定了临床分离的132株致病性大肠杆菌对22种抗菌药物的耐药性,继而通过平皿二倍稀释法测定了其中的40株多重耐药性大肠杆菌对6种常用抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC)。结果表明,132株大肠杆菌均表现出不同程度的耐药,并且多数为多重耐药株,其中的40株多重耐药大肠杆菌对6种常用抗菌素的耐药率在31.3%~93.8%之间。这些结果为临床大肠杆菌病的诊断和治疗提供理论依据。     

猪源大肠埃希菌超广谱β-内酰胺酶的检测及其耐药性分析

为了解辽宁地区猪源大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)情况及耐药情况,采用纸片扩散法对从辽宁地区分离到的65株大肠埃希菌进行ESBLs检测及耐药性分析,并用PCR方法对确证的产ESBLs大肠埃希菌进行TEM、CTX-M、OXA和SHV基因型检测。结果发现,在65株大肠埃希菌中,20株大肠埃希菌产ESBLs,阳性率为30.77%;在20株产ESBLs大肠埃希菌中,9株为TEM型,1株为CTX-M型,8株为同时携带TEM型和CTX-M型,1株为同时携带TEM型和OXA型,1株为同时携带TEM型、CTX-M型和OXA型。药敏试验结果表明,产ESBLs菌株的耐药率明显高于非产ESBLS菌株,且产ESBLs菌株均为多重耐药菌株。可见,辽宁地区产ESBLs猪源大肠埃希菌的检出率较高,流行的主要基因型为TEM型和TEM+CTX-M型。