甘加型藏羊发情周期血浆雌激素测定及HPO轴ERα的表达

为研究甘加型藏羊(Ovis arise)发情周期内血浆雌激素的分泌规律及其受体α(Estrogen receptorα,ERα)在下丘脑-垂体-卵巢(Hypothalamic-pituitary-ovarian axis, HPO)组织中的表达及分布,选取发情周期内健康且未孕甘加型藏羊32只,运用酶联免疫分析法(ELISA)研究其血浆雌激素分泌规律,用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、蛋白免疫印迹技术(Western Blot)和免疫组织化学染色法(IHC)检测HPO组织中ERα mRNA及蛋白的表达与分布。结果显示,发情周期内血浆雌激素含量呈脉冲式和波动式交替变化,发情期最高,发情后第10小时达到第1个峰值(97.21 ng/mL);ERα mRNA及蛋白在HPO中均有表达。下丘脑组织中发情后期最高,显著高于间情期;垂体组织中发情期最高,与其他3个时期差异显著;卵巢组织中在发情前期最高,各时期表达差异显著。免疫组织化学试验结果显示,ERα阳性表达主要在下丘脑促垂体区神经胶质细胞胞核和大神经元胞体及轴突分布;在垂体远侧部及中间部嗜酸性细胞胞核中高表达,胞浆中表达较弱,在卵巢的生长卵泡颗粒细胞胞浆和胞核、卵泡内膜细胞及黄体细胞胞浆中分布。甘加型藏羊发情周期内血浆雌激素及其受体在HPO组织中呈动态表达变化,表明雌激素及其受体α参与调节甘加型藏羊的生殖生理活动。     

GPER激动剂对发情周期小鼠卵巢EGFR表达的影响

【目的】探讨G蛋白耦联雌激素受体(G-protein-coupled estrogen receptor,GPER)激动剂对卵巢表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor,EGFR)表达的影响,为阐明GPER和EGFR在卵巢功能维持中的作用奠定基础。【方法】取间情期小鼠,将其分为40,200,1 000ng/只G-1腹腔注射组和对照组(腹腔注射等体积生理盐水),每组20只,各组小鼠进行相应的处理。注射G-1后,依次取发情前期、发情期、发情后期和间情期小鼠各5只,脱颈处死,迅速取出卵巢,采用免疫组织化学SP法和实时定量RT-PCR法,研究不同剂量GPER激动剂G-1对发情周期小鼠卵巢EGFR分布及其mRNA表达的影响。【结果】EGFR在小鼠卵巢的各级卵泡、黄体和间质中均有表达,且在卵泡颗粒细胞和卵母细胞中表达最明显,在黄体和间质中的表达较微弱。同一发情时期卵巢中,EGFR的相对表达量随注射G-1剂量的增加而升高,除发情后期外,其他3个时期以1 000ng/只G-1注射组均极显著高于对照组(P0.01);间情期和发情前期则以200ng/只G-1注射组显著高于对照组(P0.05)。各组发情周期小鼠卵巢中EGFR mRNA表达量的变化规律与EGFR相对表达量的表现基本一致。【结论】G-1对发情周期卵巢中EGFR的表达有一定的上调作用,提示GPER可介导雌激素经EGFR信号级联参与卵巢周期性生殖活动和卵泡生长发育的调节。     

雌激素α、β受体在雌性山羊星状神经节的分布

【目的】研究雌性山羊星状神经节中雌激素受体(Estrogen receptor,ER)的分布特点,探讨雌性山羊星状神经节神经元对雌激素是否具有反应性。【方法】取雌性山羊星状神经节,制作石蜡切片,经免疫组化SP法染色后,在数码显微镜下拍照,用高清晰图像分析系统对ER的分布特点进行分析,并计算相对表达量。【结果】在星状神经节的神经元胞体、卫星细胞和过路纤维中均有ERα、ERβ免疫阳性产物分布,但主要分布于神经元胞体。在神经元胞体中,细胞膜和细胞质为强阳性染色,而细胞核为弱阳性染色。ERα在神经元胞体中的相对表达量显著高于非神经细胞结构(P0.05),ERβ在神经元胞体中的相对表达量极显著高于非神经细胞结构(P0.01)。【结论】雌性山羊星状神经节神经元具有对雌激素刺激反应的受体,提示星状神经节可能作为雌激素作用于心血管的内分泌途径和自主神经对心血管调节的神经途径之间相互协调的网络节点,从而对心血管系统起调节作用。     

GPR30在小鼠发情周期卵巢中的分布和表达

为了获得G蛋白偶联受体30(GPR30)在小鼠发情周期卵巢中的分布和表达规律,分别运用免疫组织化学SP法和RT-PCR法,对小鼠发情前期、发情期、发情后期和间情期卵巢中GPR30分布及GPR30 mRNA的表达进行研究.结果显示:GPR30免疫反应阳性产物分布于小鼠卵巢各级卵泡的颗粒细胞、卵泡膜细胞、卵母细胞以及黄体细胞和间质细胞的细胞膜和胞浆中,以次级卵泡和成熟卵泡的颗粒细胞中分布最多、着色最深;GPR30的相对表达量在小鼠发情周期卵巢中以间情期最低且极显著低于其他3个时期(P＜0.01),发情期最高但与发情前期和发情后期无显著差异(P＞ 0.05).发情周期卵巢中GPR30 mRNA的表达变化规律与GPR30的表达基本一致,其中发情期最高且极显著高于其他时期(P＜0.01),间情期最低且极显著低于其他时期(P＜0.01). GPR30在小鼠卵巢中的分布和表达量变化与卵泡发育过程以及发情周期雌激素变化规律基本一致,提示其介导了雌激素对发情周期卵泡发育和卵母细胞成熟的调节.     

G15对发情周期小鼠卵巢表皮生长因子受体表达的影响

【目的】研究G蛋白偶联雌激素受体(G-protein-coupled estrogen receptor,GPER)对发情周期小鼠卵巢表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor,EGFR)表达的影响。【方法】间情期小鼠腹腔注射GPER抑制剂G15,按注射剂量0.3,1.5和7.5nmol/只设3个注射组,另设腹腔注射等体积生理盐水的对照组;药物注射后,依次取发情前期、发情期、发情后期和间情期小鼠的卵巢,用免疫组织化学SP法和RT-PCR法分别检测各组小鼠发情周期不同阶段卵巢EGFR及其mRNA的表达。【结果】EGFR免疫组化阳性产物主要分布于卵巢的各级卵泡中,阳性染色随卵泡发育而逐渐增强,其中颗粒细胞越靠近卵母细胞染色越强,发情周期卵巢EGFR相对表达量表现为发情期发情前期间情期发情后期。小鼠注射G15后,各情期卵巢中EGFR的表达呈G15剂量依赖性减弱,除发情后期外,均极显著下降(P0.01);1.5和7.5nmol/只G15注射组各情期EGFR的相对表达量无显著差异(P0.05),但均极显著低于0.3nmol/只G15注射组(P0.01)。EGFR mRNA的变化规律与EGFR相对表达量的变化趋势完全一致。【结论】G15可在一定程度上通过GPER下调发情周期小鼠卵巢中EGFR的表达,从而影响发情周期卵巢的功能。     

雌激素α、β受体在雌性山羊腹腔肠系膜前神经节的分布

为探讨山羊腹腔肠系膜前神经节在雌激素影响胃肠道机能活动中的作用和意义,取雌性山羊腹腔肠系膜前神经节,经免疫组化SP法染色后,在数码显微镜下拍照、测量,用高清晰图像分析系统对雌激素受体(ER)的分布特点进行分析,并计算相对表达量。雌激素受体在腹腔肠系膜前神经节的神经元、支持细胞和过路纤维均有ERα、ERβ受体免疫阳性产物分布,但主要分布于神经元胞体。在神经元胞体中,细胞膜和细胞质为强阳性染色,而细胞核为弱阳性染色。ERα在神经元胞体的相对表达量显著高于非神经元胞体结构(P0.05),ERβ在神经元胞体的相对表达量极显著高于非神经细胞结构(P0.01)。雌性山羊腹腔肠系膜前神经节神经元具有对雌激素刺激反应的受体,提示腹腔肠系膜前神经节可能作为雌激素作用于胃肠道的内分泌途径和自主神经对胃肠道调节的神经途径之间相互协调的网络节点。     

雌激素受体α和孕激素受体在不同发情周期牦牛子宫中的表达变化

 【目的】观察发情周期不同阶段牦牛子宫中ERα、PR mRNA和蛋白的表达变化。【方法】采用实时荧光定量PCR技术和免疫组织化学SP法分别对发情期、发情后期、间情期和发情前期牦牛子宫中ERα和PR mRNA及ERα和PR蛋白的表达特点进行了研究。【结果】发情周期不同阶段牦牛子宫内膜和肌层中均有ERα mRNA和 PR mRNA的表达,ERα和PR蛋白免疫阳性产物表达于子宫腔上皮细胞、腺上皮细胞、基质细胞、血管内皮细胞和子宫肌层平滑肌细胞中;子宫内膜中ERα mRNA和PR mRNA在发情后期表达最强,间情期显著下降（P＜0.05）,发情前期回升;ERα和PR蛋白表达在发情期最强而间情期最弱;子宫肌层中ERα mRNA和PR mRNA的表达在发情期较高,发情后期显著下降（P＜0.05）,间情期降到最低,发情前期显著回升（P＜0.05）,且达到最高值;ERα和PR蛋白发情期表达最强,间情期最弱,但其间无显著差异（P＞0.05）。【结论】ERα和PR在牦牛子宫内膜和肌层中随发情周期不同呈周期性变化,参与调节发情周期不同阶段牦牛子宫内膜及肌层功能的发挥。     

小鼠各发情周期卵巢Ghrelin的表达

本研究通过免疫组织化学技术及DAB显色技术检测小鼠发情周期ghrelin的表达情况,以研究小鼠动情周期卵巢中ghrelin的定位及表达规律。结果显示,发情前期及间期ghrelin阳性细胞主要在生长卵泡中表达,而发情期开始在成熟卵泡中表达,并且黄体中也有阳性反应,到发情后期成熟卵泡中阳性反应明显,主要集中于颗粒细胞和卵丘;发情间期黄体中阳性反应最强。可见,ghrelin对动物生殖具有重要的影响。     

大鼠发情周期的子宫组织雌激素受体定位的初步研究

本试验选用SD系大鼠，用常规阴道抹片法鉴定发情，采用免疫组织化学的过氧化物酶一抗过氧化物酶复合物（PAP）法，进行雌激素受体（ER）定位。在子宫的内膜固有层、肌层和浆膜层，发现抗雌二醇抗体的反应阳性细胞，而在内膜上皮细胞内无阳性染色，这种阳性染色可以被 烯酚所阻断，不加抗雌二醇抗体的结果使染色呈阴性，发情周期4个不同时期的子宫组织中免疫反应阳性细胞表现出量的变化，以发情间期为基础，发情前期较多，发情期和发情后期依次减少，其动态变化与前人报道发情周期中雌二醇在血浆中的浓度变化是对应的。并发现发情周期中子宫组织的肥大细胞与雌激素受体的分布和变化有着相似的特点。     

小鼠子宫内膜雌激素受体表达规律的研究

为探讨雌激素对子宫内膜容受性的影响,实现主动干预子宫内膜容受性、提高体外受精-胚胎移植(IVF-ET)的成功率,本研究利用免疫组化法检测了雌激素受体在小鼠发情周期子宫内膜中的表达规律.结果显示,自然发情受孕组、自然发情假孕组(对照组)和超数排卵组小鼠在见栓后第2天,子宫内膜上雌激素受体(ER)表达量3组之间差异不显著(P＞0.05);之后的第4、6、8天,超数排卵组雌激素受体表达量显著高于其他2组(P＜0.05);自然发情受孕组小鼠子宫内膜中ER的表达在第4、6天时显著高于自然发情假孕组(P＜0.05),在第8天时,自然发情受孕组小鼠子宫内膜中的ER阳性率与自然发情假孕组差异不显著(P＞0.05).与自然发情受孕组相比,自然发情假孕组和超数排卵组小鼠子宫内膜容受性下降,窗口期开放延迟,而自然发情假孕组和超数排卵组差异不明显(P＞0.05).以上结果表明,雌激素通过ER对小鼠胚胎着床及窗口期子宫内膜容受性变化具有调节作用.     

甘加型藏羊发情周期下丘脑-垂体-卵巢轴中ERβ mRNA及其蛋白的表达

为阐明甘加型藏羊(Ovis arise)发情周期下丘脑-垂体-卵巢(hypothalamic-pituitary-ovarian axis, HPO)轴中雌激素受体β(estrogen receptor β,ERβ)mRNA和蛋白的表达及分布,本试验选取健康且在发情周期内的甘加型藏羊32只,运用qRT-PCR、Western blot 技术和免疫组织化学染色法检测甘加型藏羊发情周期ERβ mRNA及蛋白在HPO轴中的表达和分布差异。结果显示,甘加型藏羊整个发情周期(发情前期、发情期、发情后期及间情期)ERβ mRNA及其蛋白在HPO轴中均有表达和分布。下丘脑中ERβ mRNA及其蛋白在下丘脑中发情前期表达最多,显著高于其他3个时期(P<0.05);垂体中ERβ mRNA及蛋白均在发情前期表达最高,与其他3个时期差异显著(P<0.05);在卵巢中间情期表达最高,显著高于其他3个时期(P<0.05)。免疫组织化学染色结果显示,ERβ阳性表达主要分布在下丘脑大神经元胞体和轴突中;在垂体中多分布在远侧部及中间部嗜酸性细胞胞浆中,胞核中分布较少;在卵巢中,生长卵泡颗粒细胞胞浆和胞核、卵泡内膜细胞及黄体细胞胞浆中均有分布。ERβ mRNA及其蛋白在甘加型藏羊发情周期HPO轴的差异性表达表明雌激素受体β参与调节甘加型藏羊的生殖生理活动。     

姜曲海母猪初情期前生殖器官雌激素受体mRNA表达丰度的研究

采用非同位素标记原位杂交组织化学方法,检测姜曲海母猪初情期前(初生及15、30、45、60日龄)卵巢和子宫中雌激素受体(ER)mRNA的表达丰度。图文分析系统扫描结果显示：初生卵巢内ER mRNA表达不明显,15～45日龄时阳性率逐渐上升,60日龄时略有下降,阳性斑点主要集中于原始、初级、次级各级卵泡,且大卵泡阳性斑点较小、卵泡密集;子宫内ER mRNA阳性率与日龄呈正相关,且阳性斑点主要出现在子宫内膜腺体中,基质部分较少。     

IL-1β及其受体在雌牦牛主要生殖器官和孤雌激活胚胎中的表达定位

为探索正常生理条件下IL-1β和IL1R1参与雌性牦牛生殖调控及早期胚胎发育的生物学作用,试验采集雌性牦牛主要生殖器官(卵泡期:输卵管、卵巢、子宫;黄体期:输卵管、卵巢、子宫;妊娠期:输卵管、卵巢、子宫),并生产孤雌激活胚胎。实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测IL-1β和IL1R1 mRNA在组织和胚胎发育过程中的表达;并采用蛋白质免疫印迹(Western-blot,WB)和免疫组织化学方法从蛋白水平分析IL-1β和IL1R1在各生殖器官的表达水平与定位。结果显示IL-1β和IL1R1在牦牛主要生殖器官和孤雌激活胚胎中均有表达。其中卵泡期输卵管中IL-1β和IL1R1表达均高于黄体期和妊娠期,卵泡期卵巢和妊娠期卵巢中IL-1β和IL1R1的表达高于黄体期,妊娠期子宫中IL-1β和IL1R1的表达高于卵泡期和黄体期,孤雌激活胚胎中IL-1β和IL1R1的表达桑椹胚最高,8细胞次之,2细胞和囊胚期最低。免疫组织化学结果显示IL-1β和IL1R1在输卵管黏膜上皮、卵泡颗粒层、黄体细胞、子宫上皮和子宫腺体均有表达。研究结果表明IL-1β和IL1R1参与牦牛生殖周期和胚胎发育的调控作用,为进一步探究IL-1β和IL1R1的作用机制提供了理论基础,有助于牦牛胚胎体外培养技术的改进。     

大鼠发情周期的子宫组织雌激素受体定位的初步研究

本试验选用 SD 系大鼠,用常规阴道抹片法鉴定发情。采用免疫组织化学的过氧化物酶—抗过氧化物酶复合物(PAP)法,进行雌激素受体(ER)定位。在子宫的内膜固有层、肌层和浆膜层,发现抗雌二醇抗体的免疫反应阳性细胞,而在内膜上皮细胞内无阳性染色。这种阳性染色可以被乙烯酚所阻断,不加抗雌二醇抗体的结果使染色呈阴性。发情周期4个不同时期的子宫组织中免疫反应阳性细胞表现出量的变化,以发情间期为基础,发情前期较多,发情期和发情后期依次减少,其动态变化与前人报道发情周期中雌二醇在血浆中的浓度变化是对应的。并发现发情周期中子宫组织的肥大细胞与雌激素受体的分布和变化有着相似的特点。     

发情周期小鼠下丘脑中GPR30的表达

探讨G蛋白偶联受体30(GPR30)在发情周期小鼠下丘脑中的分布和表达规律。分别运用免疫组织化学SP法和RT-PCR法对发情前期、发情期、发情后期和间情期小鼠下丘脑中GPR30的分布和GPR30mR-NA表达进行研究。结果表明,GPR30免疫反应阳性物质分布于发情周期小鼠下丘脑中的大部分核团以及部分胶质细胞的胞膜,其中视上核、视交叉上核、室旁核、室周核、弓状核、乳头体外侧核分布较多;视上核和视交叉上核的GPR30相对表达量分别在间情期与发情前期以及发情前期与发情期间呈极显著差异(P<0.01),均呈上升趋势,而其他核团中GPR30相对表达量在发情各期相对稳定且无显著差异(P>0.05);下丘脑中GPR30的相对表达量以发情前期和发情期较高,整个发情周期呈先升后降趋势。发情前期和发情期下丘脑中GPR30mRNA相对表达量较高,但与其他各期间无显著差异(P>0.05)。说明下丘脑中GPR30在一定程度上参与对动物发情周期的调节。     

甘加藏羊发情周期下丘脑-垂体-卵巢轴KISS-1/GPR54的表达与分布

为了研究高原甘加藏羊(Ovis aries)发情周期下丘脑-垂体-卵巢轴(hypothalamic-pituitary-ovary axis,HPOA)中肿瘤转移抑制基因(kisspeptins,KISS-1)/G蛋白偶联受体54(G protein-coupled receptors 54,GPR54)的表达及其对藏羊季节性发情周期的调控作用,本实验选取处于发情周期的甘加藏羊32只,应用qRT-PCR和免疫组织化学技术,检测其在发情周期HPOA组织中的表达和分布。qRT-PCR结果显示,甘加藏羊整个发情周期HPOA组织中均有KISS-1和GPR54 mRNA表达。下丘脑组织中发情前期KISS-1 mRNA相对表达量显著(P<0.05)高于其他3个发情时期;在垂体组织中发情前期和间情期的相对表达量较高,与发情后期差异显著(P<0.05);卵巢轴组织中间情期的相对表达量最高,显著(P<0.05)高于其他3个时期。下丘脑组织中发情期GPR54 mRNA相对表达量显著(P<0.05)高于其他3个时期;垂体组织中发情前期的相对表达量显著(P<0.05)高于其他时期;卵巢轴组织中发情后期的相对表达量显著(P<0.05)高于其他时期。免疫组织化学染色结果显示:Kisspeptin和GPR54阳性产物在下丘脑中主要分布于促垂体区的弓状核、脑室前腹侧区;腺垂体中主要在嗜碱性细胞和嫌色细胞中表达;卵巢轴中主要在卵泡颗粒层及卵泡内膜上表达。KISS-1和GPR54在藏羊发情周期HPOA中的差异表达,对藏羊季节性发情周期有一定的调控作用。     

表皮生长因子受体在绵羊卵巢中的表达

收集成年绵羊卵巢标本,采用免疫组织化学的方法检测EGFR蛋白在绵羊卵巢组织中的表达情况。研究结果表明,在绵羊卵巢中EGFR蛋白的表达具有时空特异性,它集中分布在发育各阶段的卵泡颗粒细胞中,并随卵泡的发育程度表现出表这量的差异。本研究说明EGFR与其配体EGF结合具有刺激颗粒细胞增殖分化、促进卵丘扩展和刺激卵母细胞成熟的功能。     

贵州香猪睾丸发育中雌激素受体和一氧化氮合酶的表达

为探明香猪睾丸发育过程中雌激素受体(ERα,ERβ)和一氧化氮合酶(NOS)蛋白的表达情况,手术取出30日龄、40日龄、50日龄、70日龄、90日龄和110日龄贵州香猪右侧睾丸,采用免疫组织化学方法检测了睾丸组织中ERα、ERβ和上皮型一氧化氮合酶(eNOS)蛋白的表达量。结果表明:ERα只在睾丸输出小管上皮细胞胞核中表达,且30~50日龄时表达率显著高于70~110日龄(P0.05)。ERβ在睾丸生精小管细胞胞质中的表达率先随日龄增加而升高,50日龄达到最高(P0.05),随后降低;在输出小管上皮细胞和管周细胞核中的表达率无显著变化;在附睾中表达率在30~50日龄时无显著差异,70~110日龄随年龄增长表达率显著升高(P0.05)。eNOS在生精小管细胞中先随日龄增加表达率增大,30日龄时表达率最低(P0.05),50日龄表达率最高(P0.05),随后逐渐减少。     

ERα基因与小梅山猪生殖器官发育特性的关系

采用PCR-RFLP技术从性成熟小梅山青年母猪中筛选雌激素受体α(ERα)不同基因型(AA、AB、BB型)母猪,记录发情周期,屠宰测定其生殖器官组织学特性,探讨ERα基因与卵巢、子宫组织学特性的关系。结果表明:ERα3种基因型个体间卵巢重、子宫重、卵巢长、卵巢宽、子宫角长差异不显著,发情周期长短与乳头数无明显差异。ERα基因型与梅山猪生殖器官(卵巢、子宫、乳头)发育特性无明显相关,提示ERα基因影响产仔数的调控不是通过影响母猪性腺组织生长发育而完成的。     

神经生长因子受体TrkA在母牛性腺及性腺外生殖器官中的表达研究

采用FQ-PCR方法和Western Blot技术对成年母牛卵泡期和黄体期的子宫、卵巢、输卵管中TrkAmR-NA和蛋白表达进行检测,旨在探讨TrkA在母牛卵泡期和黄体期子宫、卵巢、输卵管3种组织中的表达情况。结果表明:TrkA mRNA和蛋白在卵泡期和黄体期的子宫、卵巢、输卵管中均有表达,且卵泡期输卵管中TrkAmRNA表达量极显著高于卵泡期卵巢和黄体期卵巢(P0.01),其他组织间无显著性差异。