新疆伊犁昭苏不同动物源粪肠球菌耐药性及耐药基因检测

为掌握新疆伊犁昭苏地区不同动物源粪肠球菌的耐药性及耐药基因携带情况，在伊犁昭苏地区各散养户采集鸡的泄殖腔拭子及羊、牛的鼻拭子和肛拭子样品共1 120份，从中分离粪肠球菌，通过琼脂稀释法进行药敏试验，采用PCR方法检测其携带的相关耐药基因。结果表明，共分离鉴定出粪肠球菌263株，分离率23.5%，不同动物源粪肠球菌的耐药严重程度由高到低依次是羊源、鸡源和牛源。其中，羊源粪肠球菌对红霉素、四环素、氟苯尼考、多西环素的耐药率均大于75.0%，显著高于鸡源和牛源粪肠球菌（P<0.05）；鸡源粪肠球菌对抗菌药物的耐药率在0～50.0%之间；牛源粪肠球菌对抗菌药物耐药率均在21.1%以下；所有粪肠球菌对氨苄西林和万古霉素完全敏感。外排泵基因emeA在不同来源粪肠球菌中的检出率均高于80.0%;ermB、fexA、optrA、tet(M)和aph(3’)-Ⅲ基因在羊源粪肠球菌中的检出率高于70.0%，与耐药情况基本一致；未检出cfr、ermC和poxtA基因。不同动物源粪肠球菌对抗菌药物表现出不同程度的耐药性，且耐药基因型与耐药表型基本一致，建议当地加强动物源粪肠球菌耐药性和耐药基因的定期检测...     

3种不同水源粪肠球菌耐药情况

为了解水环境中粪肠球菌对常用抗生素的耐药情况,从某校鱼塘、污水沟和模型池塘中共分离出99株粪肠球菌,采用美国临床实验室标准委员会(NCCLS)推荐的微量肉汤稀释法进行药敏试验.结果显示:污水沟分离菌的耐药率最高,其中红霉素、土霉素、环丙沙星、氯霉素和氨苄西林的耐药率分别为89.3%、89.3%、82.1%、46.4%和32.1%,且多数对3-5种抗生素多重耐药;其次为鱼塘分离菌,耐药谱多为对1-2种抗生素同时耐药;模型池塘分离敏感菌较多;3处均未分离出万古霉素耐药粪肠球菌.提示不同水源粪肠球菌耐药情况与水源受抗生素污染程度存在联系,表明细菌耐药性监测及环境保护的重要性.     

3种不同水源粪肠球菌耐药情况

为了解水环境中粪肠球菌对常用抗生素的耐药情况,从某校鱼塘、污水沟和模型池塘中共分离出99株粪肠球菌,采用美国临床实验室标准委员会（NCCLS）推荐的微量肉汤稀释法进行药敏试验.结果显示：污水沟分离菌的耐药率最高,其中红霉素、土霉素、环丙沙星、氯霉素和氨苄西林的耐药率分别为89.3%、89.3%、82.1%、46.4%和32.1%,且多数对3-5种抗生素多重耐药;其次为鱼塘分离菌,耐药谱多为对1-2种抗生素同时耐药;模型池塘分离敏感菌较多;3处均未分离出万古霉素耐药粪肠球菌.提示不同水源粪肠球菌耐药情况与水源受抗生素污染程度存在联系,表明细菌耐药性监测及环境保护的重要性.     

不同动物来源肠球菌的分离·鉴定及耐药性研究

[目的]为动物肠球菌感染机制的研究提供理论依据。[方法]采用常规细菌分离方法从不同动物的肛拭样品中分离肠球菌,利用基于肠球菌保守tuf基因的PCR方法对其进行鉴定,同时采用KB纸片法对分离到的肠球菌进行药敏试验。[结果]共分离到177株细菌,经鉴定确定为肠球菌。药敏试验结果表明,鸡源肠球菌对青霉素的耐药率为80%,牛源肠球菌为46.4%;猪源肠球菌对环丙沙星的耐药率为27.3%,羊源肠球菌为2.8%;鸡源肠球菌对高浓度链霉素的耐药率为62.9%,而羊源未出现耐药菌株。[结论]来源于不同动物的正常菌群肠球菌对某些抗生素表现出不同程度的耐药性。     

粪肠球菌遗传演化关系分析

为探究不同国家、地区、宿主的粪肠球菌的遗传演化规律,明确不同地区粪肠球菌的同源程度和亲缘关系,试验采用生物信息学方法,对NCBI核苷酸数据库里粪肠球菌的16S rRNA基因进行筛选整理、剪裁对齐后与本试验分离菌株构建粪肠球菌的基因进化树,进行比较分析.结果表明:粪肠球菌在进化过程中跨地域稳定遗传,起源地可能是德国,与其...     

临床分离粪肠球菌的毒力基因和耐药基因检测及其耐药性研究

分离女性阴道中的粪肠球菌（Enterococcus faecalis）,通过PCR和Kirby-Bauer(K-B)纸片扩散法探究其毒力基因、耐药基因及其耐药表型,为揭示粪肠球菌感染机制及其临床治疗提供科学依据。结果表明：从157个样品中共分离出22株粪肠球菌;在这些粪肠球菌中：毒力基因检出率为efa A (100%)、asa1 (90.9%)、cyl A (90.9%)、fsr (90.9%)、cpd (90.9%)、acm (86.4%)、gel E (81.8%)、esp (68.2%)、ace (54.5%)和hyl (0);耐药基因的检出率为van A (0)、van B (0)、van C (18.2%)、aac (40.9%)、ant(6)-1 (59.1%)、erm B (68.2%)、mef A(54.5%)、tet M (72.2%)和tem (81.8%);药敏结果显示粪肠球菌对万古霉素、呋喃妥因、利奈唑胺、替考拉宁敏感;对其他抗菌药物具不同程度的耐药。由此得出,阴道易受粪肠球菌感染,体外实验支持糖肽类抗菌药物可用于粪肠球菌感染的临床治疗。     

鹅粪肠球菌分离鉴定及耐药与毒力基因检测

【目的】为该送检病死鹅病的实验室诊断提供参考资料,并探明对该病原的耐药机制和致病机理进行初步探讨。【方法】用8只病死鹅的肝脏组织进行病原菌的分离鉴定、体外抑菌试验及其耐药和毒力基因检测。【结果】从上述病死鹅肝脏组织中分离到1株革兰氏阳性链状排列的球菌。同源性分析显示：该菌为粪肠球菌;该菌耐药性强,仅对头孢噻呋钠和头孢喹肟中度敏感。该菌携带卡那霉素类耐药基因aadA1、头孢菌素类耐药基因blaCMY-2、β-内酰胺类耐药基因blatem-1和磺胺类耐药基因Sul1;该菌携带毒力基因有：明胶酶基因gelE,胶原蛋白黏附素基因ace,心内膜抗原基因efaA。【结论】从病死鹅分离到1株粪肠球菌,该菌携带多重耐药基因和多个毒力因子。     

一株水貂源致病性粪肠球菌分离与鉴定

对水貂肠淋巴结中分离得到的一株新细菌性病原进行分离鉴定,并作形态学和培养特征观察、生化试验、16S r RNA基因PCR鉴定、药物敏感试验、致病性试验。结果表明,该分离株可确定为粪肠球菌(Ente rococcus fae calis),其16S r RNA基因序列与Gen Bank中从猪、羊、鸡、牛、马等动物体内分离出的粪肠球菌基因同源性均在97%以上,且与猪源粪肠球菌亲缘关系最近。药物敏感试验表明,分离菌株对头孢曲松钠、万古霉素、阿莫西林、庆大霉素、多西环素、环丙沙星、左氟氧沙星、诺氟沙星、氟苯尼考、红霉素高度敏感,对其他19种抗生素具有明显抗性。致病性试验表明,分离菌株对小鼠有较强致病性。毒力基因检测结果表明,其携带cyl A、ge l E和e fa A三种毒力基因。这是从水貂中分离得到致病性粪肠球菌的首次报道,研究结果可作为水貂与肠球菌相关疾病检测、鉴别、诊断、治疗和预防依据。     

零售鲜猪肉中肠球菌的鉴定与毒力基因检测

2007年～2008年间，分别从郑州市5个农贸市场鲜猪肉销售摊点采集了52份猪肉样品，经细菌分离得到30株疑似肠球菌，通过细菌形态学和培养特性的观察，并采用Vitek-32全自动细菌鉴定系统对其进行分析，最终鉴定为肠球菌，其中粪肠球菌(E. faecalis)16株、屎肠球菌(E. faecium)4株、铅黄肠球菌(E.casseliflavus)6株、鸟肠球菌(E.avium)2株、鹑鸡肠球菌(E. gallinarum )2株。药敏试验结果表明：肠球菌对呋喃妥因、万古霉素、替考拉宁和氨苄青霉素有较高的敏感性，对四环索、卡那霉素和红霉索的敏感性较低。经过对肠球菌6种公认的毒力基因cylA、gelE、efaA、ace、AS和esp的检测，发现分离株携带毒力基因不同，7号粪肠球菌携带6种，而12号屎肠球菌则全部为阴性，其它菌株则携带1～5种不等的毒力基因。     

宠物犬粪肠球菌耐药性流行病学调查

为了解福州市宠物犬粪肠球菌耐药性的现状,采用美国临床实验室标准委员会(CLSI)推荐的肉汤微量稀释法及判定标准,调查了96株分离自宠物犬的粪肠球菌对6种抗菌药物的耐药性.结果显示:分离菌对土霉素和红霉素有高的耐药率,分别达到86.5％和72.9％,对环丙沙星和氯霉素的耐药率分别为22.9％和27.1％;分离菌对万古霉素...     

河南地区猪源性大肠杆菌耐药性及耐药基因型分析

【目的】掌握河南地区猪源性大肠杆菌的耐药情况及不同的耐药基因类型,为临床防治用药提供依据。【方法】以从河南地区规模化猪场中分离鉴定的23株大肠杆菌为研究对象,选用21种抗生素药物对大肠杆菌耐药性进行分析,用PCR方法对耐药质粒DNA进行扩增,并对氨基糖苷类(aac(3)-Ⅳ、aph(3′)-Ⅱ)、四环素类(tetD、tetB)、β-内酰胺类(TEM、SHV)、大环内酯类(ermB、ermC)等4类耐药基因型进行检测。【结果】23株致病性大肠杆菌对抗生素类药物均有不同程度的耐药性,其中对青霉素、红霉素、四环素、卡那霉素、多西环素、氟哌酸、氨苄西林等7种抗生素的耐药性较强,耐药率分别为100.0%,91.3%,86.9%,78.2%,78.2%,73.9%和73.9%,且均在70%以上。23株大肠杆菌检出的耐药基因包括氨基糖苷类aac(3)-Ⅳ和aph(3′)-Ⅱ、四环素类tetD和tetB及β-内酰胺类SHV、大环内酯类ermC等6个基因型,其与GenBank数据库中相关序列的同源性均在97%以上,未检出TEM和ermB。【结论】河南地区大肠杆菌耐药基因类型多而复杂,耐药性严重并存在多重耐药性。     

2015-2017年新疆动物源鼠伤寒沙门菌耐药性分析

为完善新疆动物源鼠伤寒沙门菌耐药的相关数据,为多重耐药病源菌的防控提供依据,本研究检测了2015-2017年新疆不同动物源鼠伤寒沙门菌的流行情况、耐药特性及耐药基因携带率.对经选择性培养基和特异性PCR鉴定的不同动物源鼠伤寒沙门菌,通过琼脂稀释法进行环丙沙星等12种抗菌药物的最小抑菌浓度测定,同时采用PCR方法测定耐药...     

不同来源的SMA耐药性对比分析

目的 为探究不同来源的嗜麦芽寡养单胞菌对养殖场常用抗菌药物的耐药性差异。方法 参照CLSI标准采用微量肉汤稀释法测定两种不同来源菌株的MIC值;采用统计学分析方法进行统计分析;并采用PCR方法检测其耐药基因携带情况。结果 养殖场人源嗜麦芽寡养单胞菌对兽医临床常用的抗菌药物耐药水平较高,对人医临床治疗嗜麦芽寡养单胞菌感染常用的磺胺类与四环素类仍具有较高的耐药水平,且表现出多重耐药,最高有七重。医院人源嗜麦芽寡养单胞菌对多西环素、金霉素、氟苯尼考、复方新诺明、恩诺沙星、氧氟沙星六种抗菌药物表现出高度敏感性,对四环素、磺胺异恶唑、多粘菌素B、头孢他啶、庆大霉素、奥格门丁、亚胺培南、氨苄西林、头孢噻呋、大观霉素10种药物具有较高的耐药水平,耐药重数最高有六重。 结论 来自养殖场环境中的人源嗜麦芽寡养单胞菌对人医临床不常用的药物表现出较高的耐药性,并且对人医临床常用于嗜麦芽寡养单胞菌感染治疗的药物具有较高的耐药性。医院人源嗜麦芽寡养单胞菌耐药谱相对较窄,且对不常用于人医临床的药物多西环素、金霉素、氟苯尼考、恩诺沙星等药物都表现出了较高的敏感性。     

宠物源大肠埃希菌耐药性及耐药基因调查

【目的】了解广州市宠物源大肠埃希菌Escherichia coli耐药性和耐药基因携带情况。【方法】2016年7月至2017年7月从广州市4家宠物医院采集健康或患病犬猫样品共319份,其中,健康动物127份,患病动物192份。采用选择性培养基分离大肠埃希菌,利用基质辅助激光解析串联飞行时间质谱仪(MALDI-TOF MS)鉴定菌种;采用琼脂稀释法测定大肠埃希菌对11种抗菌药物的敏感性,利用PCR和测序检测耐药基因的携带情况。【结果】319份样品共分离得到大肠埃希菌203株,其中,患病动物源109株,健康动物源94株。203株大肠埃希菌中有179株至少对1种抗生素耐药;对氨苄西林耐药率最高(76.85%),对头孢噻肟、四环素、多西环素和磺胺甲噁唑-甲氧苄啶耐药率均高于50%;对阿米卡星最为敏感,耐药率仅为10.84%。患病动物源大肠埃希菌对11种抗菌药物的耐药率均高于健康动物源,除阿米卡星、氟苯尼考和磷霉素外,对其他药物的耐药性均差异极显著(P 0. 01)。耐药基因检测结果显示,floR检出率最高(检出率为34.97%),blaCTX-M-9G、blaCTX-M-1G、fos A3、rmt B和bla CMY-2检出率分别为22.66%、20.19%、17.73%、10.34%和1.48%,未检测到blaCTX-M-2G和blaCTX-M-25G。【结论】广州地区宠物源大肠埃希菌耐药状况严峻,且常携带多种重要耐药基因。应当加强对宠物源细菌耐药性的监测。     

鸡源大肠杆菌CRISPR特征及其与耐药性的关系

【目的】研究鸡源大肠杆菌成簇间隔短回文重复序列(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)与耐药性的关系,并对CRISPR进行生物信息学分析,为进一步研究CRISPR功能及其对细菌耐药的影响奠定基础。【方法】对从安徽省合肥地区养鸡场分离鉴定的130株鸡源大肠杆菌进行耐药性(16种抗菌药物)和CRISPR检测,分析CRISPR与鸡源大肠杆菌多重耐药的关系。挑选扩增出片段长度不同的12株大肠杆菌,对其CRISPR PCR产物进行测序,通过BLAST进行二级结构预测,用CRISPRTarget等对其重复序列和间隔序列进行生物信息学分析。【结果】130株鸡源大肠杆菌对16种抗菌药物的耐药率为2.3%~97.7%,118株大肠杆菌对3种及3种以上药物耐药;共有39株菌检测到CRISPR,阳性率为30%;CRISPR阳性菌株均为多重耐药菌株,其耐药率(100%)显著高于CRISPR阴性菌株(87%),CRISPR序列差异性与耐药性之间无直接相关性。CRISPR序列同源性较低的12株大肠杆菌均包含2条(11号菌除外)长度为29bp的重复序列,这些序列可分为5类,其RNA二级结构都能形成回文结构,但茎环大小有差异。从这12株大肠杆菌中共发现间隔序列168条,其中77条为新发现序列;同源性比对发现,在112条有比对结果的间隔序列中,72.3%来源于质粒,25.0%来源于噬菌体,2.7%来源于细菌和病毒。【结论】携带CRISPR的鸡源大肠杆菌广泛存在,CRISPR可能与大肠杆菌耐药表型相关,明确了CRISPR的结构特征。     

内蒙古无乳链球菌耐药性及四环素耐药基因检测

为了解内蒙古地区隐性乳房炎无乳链球菌分离株耐药性及耐药基因,采集内蒙古不同地区的规模化养殖场隐性乳房炎乳样,采用Kirby-Bauer(K-B)纸片扩散法测试分离株对16种抗菌药物的敏感性,PCR方法检测其耐药基因。结果显示:无乳链球菌对大部分抗生素较敏感。对其有较强抑菌作用的药物为:青霉素G、头孢噻肟、头孢唑啉、阿莫西林、红霉素、环丙沙星、恩诺沙星、氧氟沙星、林可霉素、呋喃妥因、万古霉素。其敏感性达到90%~100%。该菌株对四环素有较强的耐药性,耐药率达77.27%。PCR扩增四环素耐药基因tetM、tetO、tetK、tetL,结果显示22株无乳链球菌均含有tetM基因,其基因的检出率为100%。其中7株同时含有tetK基因,tetO、tetL基因未检出。     

新疆某规模化猪场“人—动物—环境”来源沙门菌耐药性分析

为了解新疆某规模化猪场人、动物和环境来源沙门菌的流行情况、耐药性及耐药基因的携带情况，本研究从该场采集养殖人员粪便和鞋底拭子、猪肛拭子和环境样品共855份进行沙门菌的分离鉴定，并对分离得到的沙门菌采用CLSI推荐的琼脂稀释法进行11种抗菌药物最小抑菌浓度的测定，通过PCR方法检测相关耐药基因。结果表明：1)共分离到沙门菌288株，3种来源样品中沙门菌分离率从高到低依次为养殖人员样品(47.2%),猪肛拭子(33.9%)及环境样品(32.3%)。2)3种来源沙门菌对四环素、氟苯尼考、多西环素和氨苄西林的耐药率均在75.0%以上；环境源沙门菌耐药情况最严重，人源与猪源沙门菌耐药情况相近。该场沙门菌对头孢噻呋和亚胺培南的敏感性较高，未检出对左氧氟沙星和阿米卡星耐药的菌株。分离株共有30种耐药谱型，3耐及以上菌株占81.3%,以7耐菌株为主，环境源沙门菌7耐菌株检出率(65.4%)高于猪源和人源沙门菌。3)分离株中检出11种相关耐药基因，bla_TEM基因的检出率为100.0%,ant(3″)-Ia、aac(6′)-Ib和floR基因的携带率均高于50.0%。猪源沙门菌中四...     

baeR基因对沙门菌耐药相关蛋白表达及耐药基因的调控作用

【目的】探究baeR对鼠伤寒沙门菌耐药相关蛋白表达水平的影响以及对耐药基因的调控作用,为鼠伤寒沙门菌耐药性的深入研究提供理论依据。【方法】采用非标记定量蛋白质组学技术，以差异倍数（FC）≥1.5且P<0.05为标准，筛选鼠伤寒沙门菌baeR和acrB双缺失CR株（鼠伤寒沙门菌ATCC13311体外诱导环丙沙星耐药株）(C1)、baeR过表达C1株(CA)和baeR回补株(CM)的差异表达蛋白，对筛选的差异蛋白进行GO富集和KEGG通路富集分析，探究差异蛋白的主要功能和涉及的生物过程；采用平行反应监测（PRM）蛋白质组学技术对筛选到的抗药相关差异蛋白CysP、GltI、ArgT、MdtA、OmpF、ArcA、FrdD、DcuB、TorR、UhpA、NarZ、PgtA、MraY、CheM、CheA、Trg进行验证；采用LacZ报告基因融合实验研究baeR对靶基因pmrF和mdtC的调控作用。【结果】CA/C1比较组中共筛选到393个差异蛋白，其中上调182个，下调211个；CM/C1 比较组中共筛选到391个差异蛋白，其中上调202个，下调189个。差异表达蛋白主要集中在外排泵、外膜蛋白、生物膜、生物合成、双组分系统等通路。PRM验证结果定量到CysP、GltI、ArgT、OmpF、ArcA、DcuB、TorR、PgtA、CheM、CheA、Trg等11个蛋白，其表达水平变化趋势与非标记定量结果一致，证实了蛋白质组结果的可靠性。baeR可以正向调控pmrF和mdtC的表达。【结论】明确了baeR过表达对鼠伤寒沙门菌耐药相关蛋白水平的影响及对相关耐药基因的调控作用。     

捻转血矛线虫伊维菌素耐药相关长链非编码RNA及其调控功能分析

为探究捻转血矛线虫伊维菌素耐药分子标记和关键调控元件,通过高质量的长链非编码RNA(Long non-coding RNA,lncRNA)表达谱对捻转血矛线虫敏感与耐药虫株lncRNA的顺式调控(Cis-regulation, cis)和竞争性内源RNA(Competing endogenous RNA,ceRNA)调控进行分析,筛选影响虫体伊维菌素耐药机制的微小调控分子。本研究利用RNA-seq技术对捻转血矛线虫伊维菌素敏感虫株和耐药虫株进行测序,根据生物学软件预测结果,筛选出位于蛋白编码基因上下游10 kb以内的lncRNA作为顺式调控作用的元件。对差异lncRNA进行GO和KEGG富集分析,并将显著差异的lncRNA和miRNA通过Target finder和Cytoscape v3.7.1软件建立lncRNA-miRNA调控网络和可视化分析。根据miRNA调控元件对lncRNA-circRNA-miRNA-mRNA调控网络进行连通性分析,结合耐药相关信号通路的富集结果构建lncRNA-miRNA-mRNA可视化网络,同时对随机选取的10个差异lncRNA进行qRT-PCR验证。...     

我院近5年表皮葡萄球菌医院感染的调查及菌株耐药性分析

目的了解我院表皮葡萄球菌致医院感染状况及耐药性,以便采取更有效的控制措施。方法对2003年1月至2008年1月间我院365例医院感染患者的各个感染部位进行表皮葡萄球菌的分离和耐药性检测。结果表皮葡萄球菌检出率逐年增加,菌株分布以呼吸道最多见,其次为伤口和血液;321株分离的表皮葡萄球菌中,耐甲氧西林菌株(MRSE)逐年递增;MRSE对头孢霉素类、红霉素、庆大霉素及环丙沙星等常用抗生素的耐药率呈逐年上升趋势,但对阿米卡星耐药率仍<20%,对利福平和左氧氟沙星耐药率<50%;甲氧西林敏感表皮葡萄球菌(MSSE)对大多数药物依然保持较低的耐药率;未发现对万古霉素的耐药株。结论表皮葡萄球菌的分布广泛,耐药情况严重,MRSE菌株逐年增多,应引起临床高度重视,抗生素的使用应根据药敏试验结果,参考本地区耐药趋势作出合理选择。