磁性微粒在核酸研究中的应用

磁性微粒作为固相载体应用于生物分子的合成、分离和检测,是一种非常有效、快速和方便的方法。在挪威、英、美、德等国已实现了商业化并得到了广泛的应用,而我国目前还处于研究阶段。对磁性微粒在mRNA的分离与纯化、DNA的分离与纯化以及核酸的杂交、扩增、检测等核酸研究领域中的应用进行了较为全面的综述。     

磁性微粒在核酸研究中的应用

磁性微粒作为固相载体于生物分子的合成,分离和检测,是一种非常有效、快速和方便的方法,在挪威、英、美、德国等国已实现了商业化并得到了广泛的应用,而我国２还处于研究阶段。对磁性微烊ｍＲＮＡ的分离与纯化、ＤＮＡ的分离与纯化以及核酸的杂交、扩增、检测等酸领域中的进行了较同的综述。     

自组装型金磁复合颗粒的制备与表征

基于磁性纳米颗粒的磁分离具有操作简单、分离速度快、易实现功能化、不影响分离物质的活性等优越的理化性质和生物相容性。金纳米颗粒作探针载体时可负载多个信号分子,从而对靶分子的检测信号进行放大。将磁性纳米颗粒和金纳米颗粒结合制备的金磁复合颗粒,既具有快速磁分离的优点,又具有金纳米颗粒对靶分子的检测信号进行放大的作用。采用自组装技术制备了金磁复合颗粒,并对所制备的金纳米颗粒和金磁复合颗粒进行了各种表征。结果表明,制备的金纳米颗粒大小比较均匀且性能稳定,通过自组装技术金纳米颗粒成功共价结合在Fe3O4@SiO2磁性颗粒表面,所制备的金磁复合颗粒具有良好的磁响应性。     

水热法制备磁性微球及其在植物基因组DNA提取分离中的应用

[目的]建立一种适用于多种植物组织快速提取基因组DNA的方法。[方法]以水热反应制备出Fe3 O4磁性纳米微球,并对其粒径、形貌、磁学性质等进行表征分析,并以此作为核酸提取载体,对多种新疆特色经济作物和植物的叶片、根、茎、籽粒等组织进行DNA的提取分离,并优化分离纯化过程的各环节。[结果]通过OD260紫外吸收值的检测、琼脂糖凝胶电泳,结果显示,用该方法纯化得到的植物基因组DNA纯度高、完整性好,能够满足下游分子生物学操作对基因组DNA质量的要求。[结论]建立了一种简便、快速、普适的从多种植物组织中获得高产量和高纯度的基因组DNA,为全自动化、规模化提取DNA提供了理论和实践基础。     

硅包银纳米颗粒的制备及其光散射法检测腺苷

将腺苷的核酸适配体设计成两段DNA链,一段修饰在硅包银纳米颗粒上,另一段修饰在磁性颗粒上.利用腺苷与其核酸适配体的特异性结合,通过检测磁性分离后上清液中硅包银纳米颗粒的光散射信号变化,实现了腺苷检测.方法的线性范围为8.0×10~(-6)~5.0×10~(-4)mol/L,线性相关系数(r)为0.981 8,其他的核苷不干扰测定.     

石墨烯纳米材料在农产品及其制品污染物分析前处理中的应用进展

农产品及其制品中的污染物分析面临着样品基质复杂多样的挑战。作为一种新型碳纳米材料,石墨烯具有比表面积大、热稳定性和化学稳定性优良、易于功能化修饰等特性,在食品污染物分析样品前处理中具有较好的应用前景。本文综述了石墨烯及其相关复合材料在农产品及其制品分析前处理中的应用,具体应用领域包括固相萃取、分散固相萃取、磁性固相萃取、固相微萃取等。     

磁珠分离法快速提取大肠杆菌质粒DNA

以单分散羧基功能化纳米磁性粒子为固相载体,PEG/NaCl为结合液,对大肠杆菌(Escherichia coli)裂解液中的质粒DNA进行了纯化研究.结果表明:PEG8000质量分数7.5％,NaCl浓度1.25 mol/L,磁珠用量0.9 mg时,在室温下,从1.5 mL大肠杆菌菌液中提取到的质粒DNA量为8.3μg...     

氧化硅包裹的磁性纳米粒子抽提质粒DNA

质粒的分离纯化在分子生物学实际工作中占有重要地位, 本文依据DNA在高盐条件下吸附于氧化硅介质, 低盐条件下脱附的原理, 采用包裹有氧化硅的磁性纳米粒子, 粒径为20 nm左右, 在外磁场作用下提取细菌质粒DNA, 操作简便, 在20 min内完成. 从1～3 mL过夜培养的大肠杆菌LB培养液中可纯化得到1～30 μg的高纯度质粒DNA, 该质粒DNA可直接用于分子生物学下游操作.     

氧化硅包裹的磁性纳米粒子抽提质粒DNA

质粒的分离纯化在分子生物学实际工作中占有重要地位,本文依据DNA在高盐条件下吸附于氧化硅介质,低盐条件下脱附的原理,采用包裹有氧化硅的磁性纳米粒子,粒径为20nm左右,在外磁场作用下提取细菌质粒DNA,操作简便,在20rain内完成．从1～3mL过夜培养的大肠杆菌LB培养液中可纯化得到1～30μg的高纯度质粒DNA,该质粒DNA可直接用于分子生物学下游操作．     

磁性分子印迹聚合物的制备及对食品中氯霉素残留的检测

将磁性分离技术和表面分子印迹技术相结合,首先通过化学改性的方式在Fe₃O₄磁性纳米粒子表面接枝双键,以氯霉素(chloramphenicol,CAP)为模板分子、甲基丙烯酸(methacrylic acid,MAA)为功能单体、乙二醇二甲基丙烯酸酯(ethylene glycol dimethacrylate,EDGMA)为交联剂、偶氮二异丁腈(azobisisobutyronitrile,AIBN)为引发剂,采用悬浮聚合法合成CAP的磁性分子印迹聚合物微球(magnetic molecularly imprinted polymer,MMIP),以及对应的非印迹微球(magnetic molecularly non-imprinted polymer,MNIP)。在表征试验中,用傅里叶变换红外光谱仪对每一步合成的产物进行红外光谱检测,用扫描电子显微镜对MMIP和MNIP的微观形态进行观察,用振动磁强计测定磁性纳米粒子和MMIP的饱和磁强度。对MMIP和MNIP的吸附性能进行研究,将MMIP作为固相萃取剂应用于实际样品检测,进行方法学考查。试验结果表明,合成的磁性分子印迹聚合物微球直径400~700 nm,分散性较好,在溶剂中可在外加磁场作用下快速分离。MMIP的最大表观吸附容量可达29.18 mg·g^-1,具有良好的选择识别性能。MMIP作为固相萃取剂在对实际样品进行检测时回收率(86.30%~94.21%)、精密度(RSD≤1.53%)、稳定性(RSD≤1.87%)均良好,且具有较低的检测限(3.0 μg·kg^-1)。将MMIP作为固相萃取剂用于食品中残留氯霉素的分离检测具有良好的效果。     

应用纳米磁珠快速检测芒果果核象甲

利用纳米磁珠(magnetic nanoparticles,MNP)的磁性分离特性,结合PCR技术,建立一种简单方便的芒果果核象甲Sternochetus mangiferae检测新方法。该方法可以较简便的提取出昆虫的DNA,且用时仅10min左右,相对普通DNA提取试剂盒效率明显提升。     

糖基化磁性纳米粒子的制备及其对凝集素的富集分离

为了构建简单高效的病原微生物分离纯化方法,首先制备了双金属磁性纳米粒子Au-Fe3O4,然后在Au组份的表面修饰了可特异性结合凝集素及病原微生物的的乳糖基(Lac),获得了糖基化磁性纳米粒子Lac-Au-Fe3O4,并进一步研究了Lac-Au-Fe3O4与蓖麻凝集素(RCA120)之间的反应及其对RCA120分离效率的影响,结果表明:1)Au-Fe3O4纳米粒子尺寸均一(8+14 nm),呈哑铃状,Au和Fe3O4组份分别位于哑铃的两端;2)Lac-Au-Fe3O4具有良好的水溶性和磁学性质,在30 min之内可特异性地与RCA120充分结合;3)在外加磁场作用下,Lac-Au-Fe3O4对水溶液中RCA120的分离效率约为70％,可有效分离微量样品(1 nmol/L).通过本实验,笔者对糖基化磁性纳米粒子的制备及其与凝集素的反应有了较为深入的了解,为进一步发展简单、快速的病原微生物分离方法奠定了基础.     

不同处理对柿属植物DNA提取产率和品质的影响

基于CTAB法对鄂柿一号、前川次郎、君迁子3份材料进行DNA提取纯化,探讨不同采样时期、不同的纯化及沉淀方法对柿属植物DNA产率和品质的影响.结果表明,不同时期采样对DNA产率影响很大,随叶片生长,DNA产率不断下降,成熟叶片DNA产率仅为幼嫩叶片的16.7％～19.4％;在苯酚氯仿法、高盐乙醚法、CTAB沉淀法中以高盐乙醚法效果最好,可酶切,能有效去除多糖污染,产率较高;4种沉淀方法中,高浓度的盐溶液有助于去除多糖、多酚等杂质,相比单纯的乙醇或异丙醇沉淀可获得更高品质的DNA.另外,不同材料间提取DNA难度存在较大差异.     

胶树白粉菌收集及DNA和RNA提取方法比较

橡胶树白粉菌（Oidium heveae）是专性寄生的病原真菌,难以获取足量和纯度高的菌体,因而不易提取到足够多和质量高的核酸,阻碍了该菌的分子生物学研究袁目前关于橡胶树白粉菌核酸提取方法少有报道.采用软毛笔刷取和醋酸纤维乙酯撕取两种方法收集白粉病菌遥在尝试使用常规的菌物RNA提取方法基础上袁通过优化操作步骤、方法等,研究出改良的Trizol法,用该法能高效率提取到纯度高的橡胶树白粉菌RNA。比较不同DNA提取方法的效率,推荐使用得率高、纯度好的OMEGAFungalDNA kit提取法,用于提取橡胶树白粉菌的DNA。     

基于磁珠的细菌基因组DNA快速提取方法

[目的]为临床上大肠杆菌O157∶H7的快速检测提供参考。[方法]依据高盐离子浓度下多聚核苷酸与羧基修饰的磁珠表面可发生非特异性吸附,而蛋白、单糖、多糖和脂类等细胞成分不被吸附的原理,建立了一种以磁性微珠为载体的细菌基因组DNA纯化方法—磁性DNA纯化法。[结果]该方法可在7min内完成对大肠杆菌O157∶H7基因组DNA的高效富集与纯化;与德国进口同类试剂盒gene-MAG-DNA/Bacteria及AxyPrep细菌基因组DNA纯化试剂盒相比,该方法操作简单、耗时短、不需要使用离心机和有机试剂,且无需常规快速提取法的沸水浴等步骤,安全、快速、成本低,在临床、食品、环境病原体快速检测领域具有巨大的推广价值。[结论]该研究成功建立了一种细菌基因组DNA的快速提取方法。     

新型的分子印迹固相萃取小柱分离富集饲料中的三聚氰胺

[目的]研制一种新型的分子印迹固相萃取小柱,用于分离富集饲料中的三聚氰胺。[方法]采用本体聚合法制备了三聚氰胺分子印迹聚合物,以该聚合物为填料制作三聚氰胺分子印迹固相萃取(MIP-SPE)小柱,优化了固相萃取条件,应用高效液相色谱(HPLC)法测定浓缩液中的三聚氰胺含量。[结果]自制的MIP-SPE小柱可以从饲料中选择性地分离、富集三聚氰胺,有效地去除饲料中的复杂基质,加标回收率约为95%。MIP-SPE小柱与空白印迹固相萃取小柱(NMIP-SPE)的对比试验表明,前者的萃取效率明显高于后者。[结论]自制的新型三聚氰胺MIP-SPE小柱可用于饲料提取液中的三聚氰胺高选择性分离富集,使用简便,具有广阔的应用前景。     

基于磁性微球的基因组核酸提取及其在中药材真伪鉴别和亲缘关系分析中的应用

为从分子水平上对中药材质量进行控制,基于磁性微球对中药材核酸进行纯化及后续生物鉴定,采用磁分离技术提取高纯度的核酸模板,以高磁响应性、粒径均一的超顺磁性四氧化三铁微球为固相载体,在聚乙二醇和氯化钠等的协同作用下,对根、茎、叶、花、果实、种子类中药材基因组核酸进行提取;分别提取丹参和柴胡的基因组核酸,并对其进行聚合酶链式反应扩增(PCR)和随机扩增多态性分析(RAPD),用于对丹参的真伪鉴别和对柴胡进行亲缘关系分析.结果表明:经提取,获得了纯度较高(OD260 nm/OD280 nm介于1.6~2.0)的中药材核酸模板;通过扩增叶绿素rpl16基因片段,可有效鉴别丹参及其伪品牛蒡;采用3个有效随机引物,可从基因水平上分析4个柴胡品种的亲缘关系远近