应用G3BP1稳转细胞系监测应激状态下的应激颗粒形成

哺乳动物细胞受到应激刺激后,会在细胞中形成致密的颗粒状结构,该结构被称为应激颗粒(stress granules,SG),其中G3BP1是应激颗粒重要的组成成分和标志蛋白。为了动态监测SG的形成情况,构建稳定表达GFP-G3BP1蛋白的HeLa细胞系。首先,扩增G3BP1基因,并将其克隆到慢病毒载体中,从而获得重组质粒Lenti-GFP-G3BP1,利用三质粒慢病毒包装系统包装为表达GFP-G3BP1蛋白的慢病毒颗粒,并感染HeLa细胞,通过嘌呤霉素初步筛选阳性细胞,随后,采用有限稀释法筛选出稳定表达GFP-G3BP1蛋白的HeLa单克隆细胞系,并采用Western blot和直接免疫荧光方法检测细胞系中GFP-G3BP1蛋白的表达及功能。结果发现,在荧光显微镜下可以观察到明显的G3BP1细胞质特异性荧光,Western blot结果显示GFP-G3BP1特异性条带,说明稳定表达GFP-G3BP1的HeLa细胞系构建成功。最后,作者利用亚砷酸钠/热休克/新城疫病毒处理细胞系后对GFP-G3BP1表达形态进行动态监测,证实了细胞受到刺激后,SG逐渐积累的过程。该细胞和相关动态监测方法为后续SG和新城疫病毒的相关研究奠定了基础。     

鸡源锌指蛋白ZEB1基因解析及其在新城疫病毒感染中的作用研究

锌指蛋白ZEB1(zinc finger E-box binding homeobox 1)是一种在不同物种中相对保守的转录因子,尤其在发生肿瘤的组织中具有较高的表达水平。为了证实禽类锌指蛋白ZEB1在新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)感染中的作用,本研究扩增获得了鸡源ZEB1的基因序列,并通过生物信息学软件对不同物种的ZEB1基因进行了同源性比对。通过Real-time PCR技术测定NDV感染DF-1细胞、CEF细胞以及SPF鸡后ZEB1的表达量变化,证实NDV感染可使细胞中的ZEB1含量显著升高。但是在细胞中过表达ZEB1对NDV的增殖和蛋白表达没有明显的影响,其生物学意义有待进一步研究。     

宿主细胞磷酸激酶在新城疫病毒感染中的作用

为探讨磷酸化通路在新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）感染中的作用,使用多种蛋白磷酸激酶抑制剂和激活剂预处理细胞,比较处理后NDV在细胞上生长状况的差异。结果显示NDV在PKC蛋白激酶抑制剂处理的细胞上的生长受到抑制,这种抑制作用能够被PKC蛋白激酶激活剂中和,而PKA蛋白激酶抑制剂和p38MAPK蛋白激酶抑制剂对其影响不大。通过PKC蛋白激酶抑制剂的细胞毒性试验证实,这种抑制作用不是由于药物对细胞的毒性或者因药物加入而改变培养基pH值而造成的。病毒在staurosporine处理的细胞上的生长曲线试验显示,浓度在20~200 nmol/L能对病毒感染产生抑制作用,并且药物浓度越高,上清中病毒的滴度相对越低。本研究结果表明PKC磷酸化通路在新城疫病毒的感染过程中发挥了重要作用。     

RNA病毒感染对应激颗粒的调控作用

哺乳动物细胞受到热休克、氧化应激、营养缺乏或者病毒感染等环境压力时,能够迅速启动细胞的压力应答机制,终止细胞内的蛋白翻译,在这个过程中,往往会形成应激颗粒。应激颗粒作为胞浆中终止活动的翻译起始复合物的聚集产物,在细胞的基因表达和内平衡中发挥着重要的作用。尤其是当病毒感染细胞时,应激颗粒的形成可以使细胞的蛋白翻译水平大大降低,从而抑制病毒的复制。然而在病毒的长期进化过程中,也衍生出了对抗细胞压力应答的相应机制,有些病毒甚至可以利用应激颗粒中包裹的沉默的转录本促进自身的复制。本文将着重就RNA病毒对应激颗粒的调控以及最近提出的压力应激与先天性免疫之间的关系做一综述。     

维生素在应激过程中的重要作用

释放出的能量，通过维持大脑、肝脏、心脏、肺、肾脏等器官的正常功能，维持动物的健康和存活。生长、繁殖和免疫所需的能量和营养，由于对即时存活是非必需的而被中止。因此，适应的营养需要以牺牲重要经济参数(如生长和饲料效率)为代价。可利用养分依赖于必需辅助因子的可利用性，并按一定的代谢途径转化成能量。     

BP神经网络在新城疫预测研究中的应用

对气象条件和新城疫发病率进行相关性分析,结合动物流行病学理论确定影响新城疫发病的关键气象因素。利用Matlab软件进行BP(Back-propagation)神经网络预测模型构建,计算预测值与实际发病率的误差绝对值和决定系数R2对所建预测模型进行检验。结果表明将6种气象因素作为预测研究的关键气象因子,BP神经网络模型其决定系数R2=0.760,证实预测效果较好。初步构建出新城疫发病的神经网络预测模型,探索性地将BP神经网络理论在动物疫病预测研究领域中运用,为进一步展开动物疫病预测的研究提供理论参考。     

锌在防治鸡热应激损伤中的作用机制

热应激是指机体在受到高温刺激时所出现的非特异性反应,是生物体在长期进化过程中获得的适应性防御机制。鸡在热应激状态下的主要表现为：采食量降低、呼吸加速、细胞免疫和体液免疫受抑制、以及内脏器官发生病变等。这些不利因素造成鸡的生长发育迟缓和死亡率上升,给养殖者带来巨大的经济损失。     

鸡IL-2在新城疫病毒F基因疫苗免疫中的作用

利用国内首次克隆成功的鸡 IL- 2基因真核表达质粒与新城疫病毒 (NDV) D2 6株 F基因真核质粒 (F基因疫苗 )联合免疫 SPF雏鸡 ,观察了其诱导的免疫应答及免疫保护作用 ,以及不同免疫方式对其免疫作用的影响。结果证实了国内克隆鸡 IL- 2基因的免疫增强作用 ,以及作为免疫佐剂应用于禽类基因免疫的可行性 ,为鸡 IL- 2这一新型佐剂的实际应用提供了重要的试验依据。     

急性期蛋白及其在动物应激过程中的作用

检测急性期蛋白( acute phase proteins,APPs)水平可作为估计动物机体对疾病先天性免疫反应的一种方法.本文主要对APPs的结构和功能,及其在动物应激中的调节机制等方面进行综述,并指出APPs经进一步研究,有望成为评价动物健康的一项新技术.     

铬在鸡热应激下的作用

微量元素铬是动物机体生长和发育所必需的营养成分，不仅参与三大物质的代谢，而且可以促进动物生长、改善繁殖性能、提高胴体品质、提高机体免疫力、降低应激。而现在铬在禽热应激上的应用的研究是最热门的。     

MicroRNA在猪繁殖与呼吸综合征病毒感染过程中的作用

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道症状为主要特征的免疫抑制性疾病,给世界养猪业造成了巨大经济损失.microRNA(miRNA)是一种内源性非编码的单链小分子RNA,主要通过介导靶基因的翻译抑制或降解而发挥基因调节作用.近年来,miRNA成为人们关...     

Viroporins在病毒感染中的作用

Viroporins是一类由病毒编码的小分子疏水性跨膜蛋白,具有1个~3个跨膜结构域,通过寡聚化形成离子通道,主要通过其离子通道活性来增加膜的渗透性,进而影响细胞运输、离子通量以及细胞器之间的连接和交换等基本生物学过程。病毒编码的Viroporins不仅与病毒致病性有关,还参与调节宿主细胞的电化学平衡,并影响病毒的复制,因此它们有望成为抗病毒治疗的靶点。不同病毒的Viroporins在结构上具有不同的特点以及对病毒复制的影响、诱导的宿主细胞生物学反应,包括细胞自噬、细胞凋亡、细胞焦亡等方面具有不同的作用。随着生物技术的发展,Viroporins的结构和功能被研究的越来越透彻,为发现新的和更有效的病毒感染抑制剂提供参考。     

宠物在病原菌耐药性形成过程中的作用

宠物携带的病原菌呈现耐药性升高的趋势,且耐药谱也越来越广,尤其是一些重要的人兽共患病病原菌,如耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、耐万古霉素肠球菌和多重耐药鼠伤寒沙门菌等,对人类健康造成严重威胁.耐药菌株增加的主要原因有三,一是细菌许多耐药基因定位于可移动遗传元件,二是人与宠物的密切接触,三是人与宠物在临床上使用同样的抗生素.由于研究数据的缺乏,耐药菌株传播风险还难以准确评估,国内这方面的研究尚存空白.宠物作为耐药菌的贮存宿主的问题需要得到更多关注.文章对宠物与病原菌耐药性形成的关系进行了分析性综述.     

应激活化蛋白激酶在猪繁殖与呼吸综合征病毒感染和调节病毒诱导的细胞因子生产中的作用研究

试验旨在研究p38 MAPK和JNK通路在繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染的猪肺泡巨噬细胞(PAM)中的作用。感染PRRSV后36 h,p38和JUK1/2逐渐被激活;感染后48 h,其磷酸化水平显著降低至基线。然而紫外线灭活的PRRSV不能引起这些应激活化蛋白激酶(SAPKs)的磷酸化,表明病毒侵入后的步骤才能激活这些激酶。单独用p38或JNK抑制剂处理,都能显著降低PRRSV的感染,导致病毒基因组和亚基因组RNA合成、病毒蛋白表达、子代病毒生产的显著降低。并且抑制SAPKs时,感染PRRSV的PAM细胞中细胞因子的产生会发生改变。本研究结果表明,p38和JNK信号通路在病毒复制中发挥关键作用,并可能在病毒感染时调节免疫应答。     

醛化鸡红细胞在新城疫病毒检测中的应用

鸡红细胞可以被多种病毒所凝集,因此可用以检测多种病毒,尤其在新城疫病毒(NDV)的检测中更为常用。过去,检测NDV的HA和HI试验皆使用新鲜的鸡红细胞,常因红细胞表面吸附的免疫球蛋白等物质洗涤不彻底而影响试验结果。醛化红细胞不易破碎,保存时间长,并可消除不同个体间红细胞的差异对试验的影响。水文就应用醛化鸡红细胞代替新鲜鸡红细胞在NDV检测中的效果进行了研究。     

鸽新城疫病毒在鸡胚中的生长规律

目前,国内用于ND免疫预防的主要措施是以鸡胚作为病毒繁殖的载体,收集尿囊液,经灭活制成不同佐剂的灭活疫苗。为了探索ND在鸡胚中的生长规律,笔者采用ND接种9日龄鸡胚,以HA检测不同时间的胚体、卵黄、尿囊膜、羊膜、尿囊液、羊水中ND的血凝效价,从而掌握ND在鸡胚内的生长规律。1材料与方法1.1材料1.1.1鸡蛋来源于非疫区的非免疫区的非免疫鸡场。1.1.2鸽新城疫种毒种毒为自行分离,经中国农业科学院哈尔滨兽医研究所鉴定确认为ND。1.1.3红细胞采自20周龄健康非免疫的伊沙蛋用公鸡,由本所提供。1.2方法1.2.1病毒的接种将种毒作1∶100稀释…     

lncRNA在乙脑病毒感染PK15细胞过程中的作用研究

本研究旨在初步探索乙脑病毒（JEV）感染PK15细胞后的增殖情况,筛选与病毒感染相关的lncRNA,并对其进行亚细胞定位及靶基因预测。通过免疫荧光试验来检测病毒结构蛋白E的表达情况,采用TCID₅₀法检测PK15细胞中病毒的增殖情况,利用实时荧光定量PCR检测病毒感染后lncRNA的表达水平,在NONCODE数据库对lncRNA进行亚细胞定位,通过starBase、NONCODE、KEGG等数据库对其进行靶基因预测和信号通路分析。结果显示,JEV感染PK15细胞后,24~36 h为病毒滴度指数增长期,感染后36 h病毒滴度已达10^-5.75 TCID₅₀/mL。PK15细胞在感染JEV 12 h后,lncRNA A、B、C表达水平均无显著变化（P>0.05）,lncRNA D表达水平极显著下降（P<0.01）;感染JEV 24、36和48 h后lncRNA A、B、C表达水平极显著上升（P<0.01）,lncRNA D表达水平极显著下降（P<0.01）。lncRNA A主要定位在胞质溶胶,lncRNA B在细胞核和细胞质中均有分布,lncRNA C主要定位在细胞质中,在细胞核中也有可能分布,lncRNA D可能在细胞内呈现广泛性分布。通过靶基因预测和信号通路分析,lncRNA A、B、C的靶基因主要为OAS1、OAS2、OASL、COX1等,lncRNA D的靶基因主要为DST、ND1、ND2、ND4等。信号通路分析发现lncRNA可能通过肿瘤坏死因子（TNF）、NF-κB和Toll样受体（TLR）等信号通路参与病毒感染后的增殖过程。本研究为进一步探索宿主细胞lncRNA对病毒增殖的影响奠定一定的基础。     

lncRNA在乙脑病毒感染PK15细胞过程中的作用研究

本研究旨在初步探索乙脑病毒(JEV)感染PK15细胞后的增殖情况,筛选与病毒感染相关的lncRNA,并对其进行亚细胞定位及靶基因预测。通过免疫荧光试验来检测病毒结构蛋白E的表达情况,采用TCID_(50)法检测PK15细胞中病毒的增殖情况,利用实时荧光定量PCR检测病毒感染后lncRNA的表达水平,在NONCODE数据库对lncRNA进行亚细胞定位,通过starBase、NONCODE、KEGG等数据库对其进行靶基因预测和信号通路分析。结果显示,JEV感染PK15细胞后,24～36 h为病毒滴度指数增长期,感染后36 h病毒滴度已达10~(-5.75) TCID_(50)/mL。PK15细胞在感染JEV 12 h后,lncRNA A、B、C表达水平均无显著变化(P0.05),lncRNA D表达水平极显著下降(P0.01);感染JEV 24、36和48 h后lncRNA A、B、C表达水平极显著上升(P0.01),lncRNA D表达水平极显著下降(P0.01)。lncRNA A主要定位在胞质溶胶,lncRNA B在细胞核和细胞质中均有分布,lncRNA C主要定位在细胞质中,在细胞核中也有可能分布,lncRNA D可能在细胞内呈现广泛性分布。通过靶基因预测和信号通路分析,lncRNA A、B、C的靶基因主要为OAS1、OAS2、OASL、COX1等,lncRNA D的靶基因主要为DST、ND1、ND2、ND4等。信号通路分析发现lncRNA可能通过肿瘤坏死因子(TNF)、NF-κB和Toll样受体(TLR)等信号通路参与病毒感染后的增殖过程。本研究为进一步探索宿主细胞lncRNA对病毒增殖的影响奠定一定的基础。     

鸡传染性支气管炎病毒与新城疫病毒在鸡体中的干扰

据Beara和Raggi Piguattelli(1975)报道,鸡传染性支气管炎病毒(IBV)与新城疫病毒(NDV)两种病毒在细胞培养物上和鸡胚中均出现干扰现象.我们的