犬细小病毒北京分离株的鉴定及其全基因组序列分析

首先对疑似犬细小病毒(CPV)感染的病犬粪便进行特异性PCR扩增,经目的片段测序分析,初步证明为CPV感染。将该病犬粪便处理物接种F81细胞,自第3代起,细胞出现典型CPE。对该株病毒进行电镜观察、理化特性试验、HA-HI及基因型等方面鉴定,证明该分离株为CPV,命名为CPV/BJ-L1株。该分离株的血凝效价为1∶512,其血凝性能被特异性抗体抑制;Reed-Muench法测定分离株病毒TCID_(50)为10-5.15/0.1 mL;电镜观察可见25nm左右的病毒颗粒;动物回归试验显示,攻毒犬能复制出CPV的典型临床症状和病理变化;对分离株的全基因组(包含两端完整的发夹结构序列)进行克隆、测序与分析。结果表明,BJ-L1为CPV-2a亚型,与GenBank中的21株CPV全基因序列核苷酸同源性为98.8%~99.8%,且与国内近期分离毒株高度同源。对2006-2014年北京市CPV分离株VP2基因进行序列分析,结果显示,CPV流行株的变异具有某种时间相关性。     

犬细小病毒山东流行株分离鉴定及其全基因组测序分析

为了解山东地区犬细小病毒的流行及其变异情况,应用F81细胞从山东地区送检的发病犬粪便中分离出4株细小病毒,根据PCR和电镜技术对其进行鉴定,并对分离株的全基因组进行克隆测序与序列分析。结果表明:所分离到的4株病毒均能在F81细胞上产生明显的细胞病变,经PCR及电镜观察鉴定为犬细小病毒,分别命名为QN1/QN2/QN3/QN4株。全基因组分析结果显示,除QN3株的基因组全长为4 756 nt外,其余3株均为4 757 nt;4个分离株之间全序列核苷酸同源性为99.31%,与GenBank登录的10株具有代表性的CPV核苷酸序列比对,同源性为98.2%⁹9.9%;VP2基因的核苷酸序列同源性为98.5%99.9%;VP2基因的核苷酸序列同源性为98.5%⁹9.9%,氨基酸序列同源性为98.1%99.9%,氨基酸序列同源性为98.1%¹00%;表明各分离毒株的亲缘关系较近,同属于NewCPV-2a亚型。     

犬细小病毒2c亚型毒株的分离与鉴定

采集一疑似犬细小病毒(CPV)患犬的粪便,用纳米PCR方法对病料进行CPV检测,并应用猫肾细胞F81进行病毒分离培养,采用免疫过氧化物酶单层细胞染色法(IPMA)检测病毒在F81细胞中的增殖动态。利用PCR扩增分离病毒的VP2基因,测序结果用DNAMAN软件对获得的VP2基因序列进行拼接,并与NCBI上已经公布的犬细小病毒的全基因组序列以及相关蛋白的核酸序列进行比较,确定其所分离的病毒株型并推导氨基酸序列。结果表明,纳米PCR检测结果为CPV核酸阳性,病料接种到F81细胞培养后出现明显细胞病变(CPE),血清学鉴定为CPV抗原阳性,序列测定分析表明,该毒株VP2基因开放阅读框(ORF)为1755 bp。进化分析显示,该毒株属于CPV-2c型,并命名为CPV-2c-Guangxi23。     

犬细小病毒的分离鉴定

用猫肾(F81)细胞从沈阳某养犬场病死犬的肠内容物中,分离到1株细小病毒.根据犬细小病毒(CPV)VP2基因的核苷酸序列设计合成了两对特异性引物,对分离的病毒株进行PCR扩增,分别得到846 bp和815 bp的2个片段,PCR产物经纯化后测序,测序结果与GenBank中已发表的CPV参考株PLI-IV(typeFPV)、CPV-b(type2)、V154(type2a)、LCPV-V204(type2b)、LCPV-V139(type2c(a))和LCPV-V203(type2c(b))的VP2基因序列相比较,根据分析比较的数据结果,确定此株细小病毒为CPV-2a亚型.     

犬细小病毒的分离鉴定

正犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)属于自主复制性细小病毒科,细小病毒属,它能引起急性肠炎,白细胞减少,呕吐以及幼犬的心肌炎等病症。为了更好的了解犬细小病毒病在我国的流行和变异情况,通过对宠物医院疑似犬细小病毒病例进行病毒分离,分离出一株犬细小病毒,经过形态学、生物学以子病毒学等鉴定,证明分离出的毒株为细小病毒。     

犬细小病毒的分离与鉴定

<正> 犬细小病毒(CPV)是引起犬急性出血性胃肠炎和幼犬心肌炎的主要病原。1977年首次由Eugster和Nairn从患腹泻的病犬粪便中分离出病毒,随后许多国家陆续报道。1980年秋以来,在我国警犬中发生疑似本病的流行,对养犬业造成了极大的威胁,严重影响了我国警(军)犬事业的发展。1982年开始使用国外引进疫苗,但仍未控制流行。为查清病原,确定病性,以便提供有效地诊断和     

进境犬中犬细小病毒的分离鉴定

进境犬中犬细小病毒的分离鉴定罗朝科，李超美，盛正太（南京动植物检疫局）犬细小病毒（ＣＰＶ）是犬细小病毒病的病原，发病率高达２０～１００％，死亡率为１０～５０％，对养犬业造成极大的威胁。该病１９７７年由美国学者Ｅｕｇｓｔｅｒ等最早从患出血性肠炎的犬粪便...     

江苏地区犬细小病毒的分离与变异分析

2007-2013年,在江苏省扬州市和苏州市的病犬临床样本中共分离鉴定了11株犬细小病毒(CPV)。经过VP2特定位置氨基酸的比较分析,证明其中9株为CPV-2a,1株为CPV-2b,1株为CPV-2。部分CPV-2a/b分离毒株在VP2蛋白氨基酸位点300位或440位有新的突变,VP2基因进化树分析表明,大部分江苏毒株在同1个独立分支中。     

犬细小病毒JL-M13株的分离鉴定及全基因组序列分析

将检测为犬细小病毒(CPV)阳性的病料经处理后接种F81细胞盲传3代并获得一株细小病毒,命名为JL-M13。应用重叠PCR技术从JL-M13中扩增出5条核苷酸序列,拼接后进行序列分析。结果表明,所获病毒核酸基因组大小为4 621bp,与其他犬细小病毒的基因相似性为98.2%~99.4%。系统发育树分析表明,JL-M13与CPV-2毒株(EF011664.1)相似率最高,与Type-2型犬细小病毒疫苗株相距较远。     

犬细小病毒YZ分离株的鉴定

对1999年冬季江苏省实验动物Beagle犬基地暴发的以拉稀、便血、高死亡率的病犬作流行病学调查、病理和实验室诊断。粪便血凝价高达2^14以上，并用HI加以验证，初步诊断为犬细小病毒感染引起的出血性肠炎。用FK81细胞（胎猎肾传代细胞）分离病毒，细胞上清HA试验阳性；负染电镜观察到在小为20nm左右的病毒粒子；接种病料的细胞IFA检测可见特异性的亮绿色荧光。在小肠的病理切片中见到典型的嗜酸性核内包涵体。以此确诊为犬细小病毒感染引起的出血性肠炎。利用双琼脂空斑技术克隆一株犬细小病毒，命名为CPV－YZ株，其核酸型是单链DNA，对甲醛敏感，对氯仿、酸、胰蛋白酶不敏感，80℃ 60分钟失去活力，0．1ml TCID50是10^-6.8,SDS-PAGE电泳两条清晰的条带分别为：76kD的VP1，64kD的VP2。     

犬用细小病毒自然弱毒株的分离、鉴定和免疫研究

应用猫肾传代细胞F81系,以同步接毒和带毒传代的方法。先后从50份犬、15份狐、75份貉和8份狮、虎、豹病料中分碍15株犬细小病毒(cpv)、3株貉细小病毒和6株猫泛白细胞减少症病毒,未分到狐细小病毒。通过人工感染试验,从中挑选到1株对犬和本动物无致病性、但具有良好免疫原性的细小病毒——貉细小病毒CR86106株。经核酸型、形态学、理化学、生物学特性试验以及与CPV核酸酶切图比较试验等系统鉴定,CR86106株病毒为1株与CPV特性基本相同,但也存在有一定差别的小DNA病毒。免疫试验和田间试验证明,CR86106株病毒遗传性稳定;对母源抗体干扰具有较强的抵抗力;免疫接种犬虽可随粪便排出少量原接种病毒,但不会使同居犬感染发病;试验犬经两次疫苗接种后攻毒,可获得完全保护,且不会随粪便排出强毒。累计免疫军、警犬3320只,全部安全,保护率达99.28％。     

犬细小病毒的分离鉴定与生物学特性分析

本研究旨在获得华中地区的犬细小病毒分离株并对其基因型分型、生物学特性及致病力进行探讨.从武汉部分宠物医院采集胶体金初检阳性的14份可疑病料,用猫肾细胞(F81)进行病毒分离.根据犬细小病毒2型(CPV-2)保守的VP2,先后设计2对引物,进行PCR扩增.在细胞上对其进行空斑纯化,进行一步法生长曲线测定,并进行电镜观察.最后对这5株病毒都进行动物回归试验.细胞传代结果表明得到5株细小病毒.PCR扩增结果表明获得390和583 bp 2个片段.将2个片段测序的结果与GenBank发布的CPV-2比对,表明所获得的5株病毒中,有4株属于2a型,1株属于2b型.空斑纯化及生长曲线绘制结果表明分离毒株增殖滴度可达105.5PFU·mL-1.电镜观察结果表明,感染细胞的线粒体肿胀.动物试验结果表明犬都能表现不同程度的发病状况,大体解剖发现肠管有坏死、心肌变薄.将病变的心脏制作切片观察,结果表明心肌细胞变性、坏死.本研究结果为进一步研究CPV-2的分子生物学和分子致病机理奠定了基础.     

猪细小病毒S-1毒株的分离和鉴定

据文献记载猪细小病毒能引起母猪繁殖障碍,主要表现为对6~9月龄的青年母猪引起流产、死产和产木乃伊胎猪.近年来,上海郊区的一些猪群中虽经乙脑疫苗预防仍发生头胎母猪的繁殖障碍.怀疑是猪细小病毒所致.但未被得到证实。1982年秋,我们在S一1猪场进行了观察,这个场曾注射过乙脑弱     

猪细小病毒自然弱毒株的分离与鉴定

猪细小病毒（porcineparvovirus，PPV）是引起母猪繁殖障碍的主要病原之一。第一株PPV是Mayr和Mahnel在１９６６年从细胞培养物中首次发现的，可能是细胞内潜伏感染的病毒。Caytwyight和Huck在１９６７年首次从流产胎儿脏器中分离到病毒，证明其为DNA病毒，并证实了其致病作用。在我国，潘雪珠于１９８３年首次分离到PPV犤１犦，此后，在我国各地陆续分离到了数株PPV。本研究从流行病学调查中分离到了一株PPV，并从形态学、血清学、生物学几个方面对其进行了鉴定，根据实验结果，推测该毒株可能是一株弱毒株，命名为闽－０１。１材…     

猪细小病毒S-2毒株的分离和鉴定

应用仔猪肾原代细胞(PK)或胎猪睾丸细胞株(ST)从7窝木乃伊胎猪组织悬液中分离到猪细小病毒,定名S-2毒株,该株6组病毒的PK或ST培养物对组织培养的最小感染量达到10~(-7),有的可达10~(-8)。S-2毒株的组织培养液能凝集豚鼠红血球,此种血凝活性能被比利时PS-1阳性血清所抑制。盖玻片组织培养物用比利时荧光抗体染色时,可见明亮的绿色核内荧光,证实S-2毒株与比利时PPV的同一性。HI试验证明,分离到S-2毒株的胎猪的7头母猪血清均能抑制S-1毒株的血凝活性。     

犬细小病毒分离鉴定及其基因型调查的基础研究

用F81细胞从不同地区送检的25份肠炎犬病料中分离出10株细小病毒，经形态学，理化学，生物学和分子病毒学等鉴定，结果这10株病毒均能在F81细胞上生长，产生细胞肿胀、变圆、破碎、脱落等细胞病变；病毒粒子呈立体对称，直径为20～24nm，无囊膜，抗氯仿，耐酸，耐热，能被5-IUDR抑制，可凝集猪、马、猫的红细胞，不能凝集人、鸡、豚鼠、兔的红细胞，HA试验能被抗CPV的特异性抗体所抑制，用犬细小病毒（CPV）特异性引物对10株病毒进行PCR扩增，结果扩增片段与阳性对照大小一致(771bp），用PV/犬/JL/1/02、PV/犬/BJ/1/99和PV/犬/GZ/1/02三个毒株进行人工感染犬试验，结果人工感染犬在接种后白细胞总数出现短期不同程度的下降，在攻毒后4～14d粪便PCR检查阳性，其中接种PV/犬/BJ/1/99的一只犬出现严重的肠炎症状并死亡，其余接种犬没有出现明显的临床症状，但血清抗体均升高（大于5倍），而对照组的白细胞总数和血清抗体没有明显的变化，粪便PCR检测阴性，表明所分离毒株能够感染犬，鉴定结果证明，CPV在我国犬群中仍广泛存在。     

鹅细小病毒强毒株的分离鉴定与遗传进化分析

为了了解齐齐哈尔地区鹅细小病毒（GPV）现地强毒株的流行及抗原变异情况,试验从齐齐哈尔龙江县某养殖场采集疑似小鹅瘟病死雏鹅的肝脾病料进行病毒分离培养,对获得的疑似尿囊液进行PCR检测、血凝性检测、动物回归试验及VP3基因序列分析。结果表明,分离到的病毒株能使12日龄鹅胚在144 h内死亡;血凝性检测未检测出血凝价;动物回归试验,可复制该病,致使5日龄雏鹅在96～144 h内全部死亡;VP3基因PCR扩增条带大约为1 600 bp,与目的条带大小相符;对其进行序列分析,判定该分离株为鹅细小病毒毒株,与我室之前分离鉴定的鹅细小病毒HH10强毒株核苷酸同源性为98.17%,与标准B株核苷酸同源性为97.13%。说明鹅细小病毒基因保守。     

犬细小病毒敦化株的分离与鉴定

为了丰富我国延边地区犬细小病毒流行病学研究资料,为进一步研究有效的疫苗及诊断试剂做前期基础工作。采集延边州敦化市地区疑似犬细小病毒感染病犬的粪便样品,经过预处理后同步接种猫肾细胞(F81),盲传至细胞出现明显病变,经形态学、分子生物学、免疫学等方法进行分析鉴定。结果:分离到的病毒可使F81细胞出现特异性病变、电镜下可见清晰的病毒粒子、其培养物可使红细胞发生凝集且能被特异性阳性血清所抑制、用特异性引物进行PCR检测结果呈阳性、免疫荧光试验可见培养物出现特异性绿色荧光,针对其VP2序列建立的进化树显示其与new CPV-2b型犬细小病毒有较高的同源性。结论:通过上述试验确定分离出1株犬细小病毒,分离的病毒为new CPV-2b型,命名CPV-DH-3株。