青天葵球茎的组织培养

[目的]通过组织培养方法获得青天葵组培苗。[方法]以青天葵的地下球茎为外植体进行组织培养,在不同生长阶段观察生长情况并记录相关数据。[结果]以MS+6-BA 5.0 mg/L作为初代诱导培养基较好;MS+6-BA 3.0 mg/L适合作为根状茎增殖培养基,根状茎用生长尖端增殖最好;不加任何激素的MS培养基适合诱导形成球茎;球茎移栽后长芽率达到83.9%。[结论]利用青天葵球茎进行组织培养,可为大面积人工栽培青天葵提供组培苗。     

青天葵球茎快繁组培技术研究

以青天葵地下球茎作为外植体,探讨不同激素组合（6-BA、NAA）、培养基等对青天葵根状茎、球茎诱导或增殖的影响,以获得适合球茎繁殖的再生体系。结果表明,青天葵根状茎诱导培养基以MS＋6-BA2．0mg／L＋NAA0．5mg／L为宜,根状茎的诱导率可达60％;根状茎增殖培养基以MS＋6-BA2．0mg／L＋NAA0．1mg／L＋10％椰子汁为宜,增殖系数可达5．0;球茎诱导培养基以1／2MS＋6-BA2．0mg／L＋NAA0．1mg／L＋10％椰子汁＋0．1％活性炭最佳,诱导系数为4．0。采用直径大于1cm的球茎进行移栽,球茎发芽早、发芽率高,出苗较为整齐。     

青天葵组织培养条件优化

分别以MS、1/2MS为基本培养基,采用正交试验研究植物生长调节剂对青天葵根状茎繁殖和新球茎诱导的影响,进而优化青天葵组织培养繁殖技术。结果表明:MS+2.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+0.2 mg/L IAA利于根状茎增殖,增殖倍数为6.5;MS+1.5 mg/L NAA+0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA适于诱导新球茎获得再生植株,诱导系数为11.5,球茎移栽发芽成活率达到90%。     

青天葵栽培技术

青天葵,学名毛唇芋兰,为兰科多年生宿根草本植物,以全草或叶入药,具清肺止咳,清热解毒,散结消疬之功效;主治肺痨、咳嗽咳血、瘰疬、肿毒、跌打损伤、急性咽喉炎等,对治疗小儿肺炎有特效.主产广东、广西、云南等地,是著名的“十大南药”之一.现已被列入《濒危动植物种国际贸易公约》,云南、广东少部分地区已开始进行青天葵野生驯化栽培研究工作.     

外源激素及浸泡条件对青天葵球茎休眠破除率的影响

【目的】研究破除青天葵球茎休眠的方法,为促进青天葵产业的发展和球茎类植物打破休眠提供技术参考。【方法】分别用赤霉素(GA)、玉米素(ZT)和激动素(KT) 3种激素对打破青天葵球茎休眠进行试验;再取其中破眠效果较好的激素进行不同激素浓度、不同浸泡时间和不同培养温度进行破眠试验,研究各处理对打破青天葵球茎休眠的效果。【结果】3种外源激素破除青天葵球茎休眠的优先顺序为KT ZT GA; KT浓度为5和10 mg/L时,以及浸泡10 min和1 h处理,均可在第4天破除青天葵球茎休眠;青天葵球茎浸泡清水后或10 mg/L的KT处理的第6天,均可在28和31℃的条件下破除青天葵球茎休眠。【结论】打破青天葵球茎休眠以选KT激素,浓度为10 mg/L,浸泡10 min,在28℃的条件下培养,破除球茎休眠时间最短,出芽整齐、健壮。     

青天葵的种植技术

青天葵又叫珍珠草．是多年生草本植物．具有清热解毒。化痰润肺．、止咳散淤．活血等功效．据1988年中国医药经济报报道。青无葵在10年内未能满足国内药用之需，目前每公斤售价高迭120元．青天葵原系野生．目价格猛涨，采挖严重，野生资源远远满足不了市场需要．因此推行家种势在必行．本人于1987年试种5地获得成功，1988年剪苗晒干出售和卖种球共收入10000乡元，亲身体会到大力发展事随青天葵是一条理想的致富门路．     

青天葵的采收加工

<正>青天葵又名天葵、独脚天葵、马蹄草等,为兰科植物毛唇芋兰的全草,具有清肺止咳、健脾清积、镇静止痛、清热解毒、散瘀消肿等功效,主治肺结核咳嗽咯血、支气管炎、小儿疳积、小儿肺炎、精神病、跌打肿痛、口腔炎、急性喉头炎、疮毒等症,为市场紧俏的贵重中药材。     

落葵组织培养研究

以落葵子叶和胚轴为外值体 ,在 MS基本培养基中添加不同浓度激素培养。结果表明 ,胚轴在 NAA0 .1～ 0 .3 mg/ L和 BA1～ 3 mg/ L范围内能产生愈伤组织 ,而子叶在上述培养基上均不能产生愈作组织。胚轴愈伤组织在 NAA0～0 .3 mg/ L 和 BA3 mg/ L 及 KT3 mg/ L 上分化出芽 ,在 1 / 2 MS NAA0 .3 mg/ L培养基上 ,生根率和根的质量均最好 ,再生小植侏移栽成活率达 1 0 0 %。     

墨兰组织培养中原球茎的形态解剖研究

通过对墨兰（Ｃｙｍｉｄｉｕｍ ｓｉｎｅｎｓｅ）组织培养中原球茎外部形态、内部结构的观察研究,发现墨兰茎尖组织培养中产生的原球茎和丛生型原球茎虽外形差别较大,但内部结构都具有根的典型特征。牙的分生组织可以在原球茎表层、丛生型原球茎或其顶端发生。芽的顶端分生组织与随后产生的根的顶端分生组织共同构成胚状结构,其形态与种子胚相似。由于墨兰组培中先后产生的原球茎和丛生型原球茎其内部结构都属典型的根结构,故称     

药用植物青天葵的悬浮培养条件优化

以悬浮细胞干重增加率、酶活力为考察指标,研究不同培养基、光照条件、蔗糖浓度、培养基pH值对药用植物青天葵细胞生长的影响,对青天葵悬浮细胞培养方法进行条件优化。结果表明,1/4MS和1/2MS培养物外观形态最佳,1/2MS组培养物干重增加率最大,MDA含量最低,POD含量最高;暗培养条件有利于愈伤组织干重的增加;蔗糖浓度为1%时愈伤组织干重增加率显著高于其他处理组,pH6.0为青天葵悬浮培养的合适pH值,培养基中添加MES可明显提高干重增加率。     

青天葵叶片原生质体分离条件的优化

以青天葵Nervilia fordii(Hance)Schltr.的新鲜叶片为试材,对青天葵原生质体的制备分离技术进行研究。用不同浓度的甘露醇溶液处理青天葵叶片下表皮细胞,进行细胞质壁分离试验,确定青天葵叶片细胞的等渗浓度;采用正交设计研究酶解法制备青天葵叶片原生质体的最适合纤维素酶浓度、离析酶浓度及酶解时间。结果表明,青天葵叶片细胞的等渗浓度为11%甘露醇;采用1.0%纤维素酶R-10+0.6%离析酶R-10的混合酶液酶解青天葵叶片12 h能达到很好的分离效果,获得高质量的原生质体。     

青天葵DXR基因编码蛋白的生物信息学分析

为后期青天葵DXR基因的全长克隆、功能鉴定和调控研究奠定基础,采用生物信息学方法对前期通过转录组测序获得的青天葵DXR基因编码蛋白序列进行分析。结果表明:NfDXR序列包含457个氨基酸,分子量约为49.72Ku,为亲水性、混合结构型蛋白质。NfDXR属于1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶超级家族,含有DXR功能域、2个NAPDH结合基序和2个DXR活性位点基序,不具有跨膜结构域和信号肽结构。NfDXR与其他单子叶植物DXR同源性高,其中与铁皮石斛DXR的序列相似度达90%。     

青天葵PAL基因序列特征和表达分析

在前期完成的青天葵(Nervilia fordii)转录组测序数据的基础上,采用生物信息学方法对3个青天葵PAL基因家族成员(NfPAL1、NfPAL2和NfPAL3)的c DNA序列及其编码蛋白质的氨基酸序列进行特征分析,并计算这些基因在青天葵叶片和球茎中的表达量。结果表明,从转录组数据中获得的3个青天葵PAL基因家族成员c DNA序列长度为1 743~2 091 bp,编码581~697个氨基酸。这些PAL基因编码包含苯丙氨酸解氨酶多功能域,并且不含跨膜结构域、信号肽和转运肽的亲水性稳定蛋白。3个青天葵PAL基因在青天葵中的表达呈组织特异性,其中,NfPAL1和NfPAL3在球茎中的表达量较高,而NfPAL2在叶片中具有较高的表达水平。     

药用植物青天葵叶片原生质体的制备与纯化

[目的]研究青天葵原生质体的制备与纯化方法。[方法]以青天葵新鲜叶片为试验材料,以青天葵叶片原生质体产量及原生质体存活率为考察指标,研究了预处理、酶解方式、酶解温度、离心转速、光照、筛网目数等因素对青天葵原生质体分离纯化效果的影响。[结果]适宜青天葵叶片原生质体游离的条件是用浓度13%甘露醇溶液预处理叶片1 h、酶解温度（25±1）℃、黑暗、静置;原生质体纯化采用离心沉淀法,以200目筛网过滤后离心8 min（800 r/min）,操作2次,可得到大量完整清晰、细胞碎片少的原生质体。[结论]该方法获得了制备青天葵原生质体的理想条件与参数,为建立青天葵原生质体再生体系提供了依据。     

濒危药用植物青天葵内生真菌的鉴定及抑菌活性研究

研究广西青天葵内生真菌的抗菌活性,并筛选出具有抗菌活性的菌株。从广西青天葵植株中共分离得到23株内生真菌,以15种病原真菌为指示菌株,用平板对峙法对分离的内生真菌进行抑菌试验,结果显示,内生真菌MQY-1对多种病原真菌指示菌具有较强的抗菌活性,结合其形态特征和分子生物学分析结果,将其鉴定为Colletotrichum truncatum,证明青天葵中存在一定的抗菌活性物质,为寻找新型抑菌物质提供一定基础。     

青天葵HMGR 基因片段的鉴定 和生物信息学分析

采用生物信息学对青天葵转录组测序获取的3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶编码基因片段Nf HMGR及其编码蛋白进行功能鉴定和表达分析。结果表明,Nf HMGR基因片段序列长度为1 563 bp,与其他植物HMGR基因的同源性最高可达88%;编码含有521个氨基酸、分子量约为55.34 ku的亲水性不稳定蛋白。Nf HMGR蛋白具有3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶Ⅰ类酶功能域,归属于3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶超级家族,包含3处跨膜结构域,不含任何信号肽、转运肽,二级结构表现为混合型结构蛋白质。在青天葵不同组织中,Nf HMGR基因在球茎中的表达量高于在叶片中的表达量。     

青天葵EBP1基因原核表达载体的构建

[目的]构建青天葵器官大小调控基因——Erb3结合蛋白(Erb3-binding protein,EBP1)编码基因的原核表达载体,以期为通过原核表达体系鉴定该基因的功能奠定基础。[方法]将引入酶切位点的NfEBP1基因的PCR产物及表达载体pET-28、pET-16b分别进行双酶切,之后连接相应的酶切产物,热击转化到E.coli Top10细胞,通过菌落PCR、测序和酶切筛选阳性重组子。将确认的阳性重组子质粒转化至E.coli BL21表达宿主菌,并对其进行双酶切验证。[结果]构建了重组表达质粒pET-28-NfEBP1-1188和pET-16-NfEBP1-1188,其转化E.coli BL21表达宿主细胞后,分别获得含有2个载体的工程菌。[结论]该研究成功构建了青天葵EBP1基因的原核表达载体,为后续通过原核表达体系鉴定该基因的功能奠定了基础。