FGF4在牛早期胚胎发育过程中的表达

应用实时荧光定量PCR和免疫荧光染色技术对成纤维生长因子4(FGF4)在牛早期胚胎发育各个阶段的表达和定位规律进行研究。结果表明,FGF4mRNA及蛋白在牛MⅡ期卵母细胞及各阶段早期胚胎均有表达,其表达量由强到弱依次为桑椹胚、囊胚、8-细胞胚、MⅡ期卵母细胞、4-细胞胚、2-细胞胚;从定位来看,FGF4在MⅡ期卵母细胞及8-细胞期前的各阶段早期胚胎的细胞质和细胞核中均有表达,而8-细胞期及之后的桑椹胚和囊胚期仅分布于细胞质。结果提示,FGF4在牛的早期胚胎发育过程中可能发挥重要作用。     

KDM2B在小鼠卵母细胞及早期胚胎发育过程中的表达分析

本研究旨在分析KDM2B在小鼠卵母细胞和早期胚胎中的表达规律,为KDM2B在卵母细胞减数分裂及胚胎发育过程中的生物学作用奠定基础。选择20只6～8周龄小鼠为试验动物,收集GV期、MⅡ期卵母细胞、2-细胞、4-细胞、8-细胞、囊胚各阶段胚胎,根据GenBank上已公布的小鼠(Mus musculus)KDM2B序列设计引物,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测KDM2B在胚胎各阶段mRNA的表达水平;通过免疫荧光染色定位KDM2B蛋白在胚胎各阶段的分布。结果显示,GV期卵母细胞KDM2B mRNA的表达量极显著高于MⅡ期(P<0.01);在2-细胞、4-细胞和8-细胞mRNA表达量较低,囊胚期其表达量极显著升高(P<0.01);卵母细胞成熟过程中,KDM2B在GV期主要表达于细胞核中,MⅡ期卵母细胞核中的荧光信号极显著减弱(P<0.01),早期胚胎发育过程中,KDM2B蛋白在2-细胞、4-细胞、8-细胞胚胎中均不表达,囊胚期重新表达于细胞核。综上表明,本研究成功建立KDM2B在小鼠卵母细胞及胚胎细胞中的时空及时序表达模式,关于KDM2B参与调控减数分裂与胚胎发育过程具体的作用机制有待进一步研究。     

去甲基化酶KDM4B在牦牛卵泡发育过程中的表达

采集牦牛卵巢组织,利用免疫组织化学法分析KDM4B在不同发育阶段牦牛卵泡中的表达与定位;根据牦牛卵泡直径大小,将卵泡分为大卵泡(≥7 mm)、中卵泡(3.0～6.9 mm)和小卵泡(≤2.9 mm)组,采用注射器抽取的方法分别收集各组别卵泡中卵丘卵母细胞复合体(cumulus-oocyte complex,COCs)及...     

YWHAZ在小鼠早期胚胎发育过程中的作用

为了探究YWHAZ蛋白在小鼠早期胚胎发育过程中的表达、定位和作用,本试验利用RT-PCR和Western blot方法检测Ywhaz基因及其编码蛋白在小鼠早期胚胎发育中的表达;利用免疫荧光技术检测YWHAZ蛋白在小鼠早期胚胎发育过程中的定位;使用特异性的siRNA沉默合子中的Ywhaz,在胚胎发育的1.5,2.5,3.0,3.5,4.5,5.0 dpc分别观察2-细胞、4-细胞、8-细胞、桑葚胚和囊胚的发育率,阐明在合子中沉默Ywhaz基因对小鼠早期胚胎发育的影响。结果显示,Ywhaz mRNA及其编码蛋白在小鼠1-细胞、2-细胞、4-细胞、8-细胞、桑葚胚和囊胚中均有表达,YWHAZ蛋白定位在小鼠早期胚胎的细胞质和细胞核中。Ywhaz沉默组的2-细胞、4-细胞、8-细胞、桑葚胚和囊胚的发育率均极显著低于对照组(P<0.01),沉默组5.0 dpc囊胚率显著高于其4.5 dpc囊胚率(P<0.05)。结果表明,Ywhaz mRNA及其编码的蛋白在小鼠早期胚胎中有表达,其蛋白主要定位在早期胚胎的细胞核和细胞质中;在合子中沉默Ywhaz基因可导致小鼠早期胚胎发育率降低且存在明显...     

斑马鱼Mut-001基因的克隆及胚胎早期发育过程中的表达

为了研究斑马鱼Mut-001基因的克隆及其在个体早期发育过程中的时空表达图谱,试验提取斑马鱼胚胎的总RNA制备地高辛标记的Mut-001 RNA反义探针,采用整体胚胎原位杂交(WISH)的方法研究Mut-001基因在斑马鱼早期发育过程中的表达。结果表明:试验成功克隆斑马鱼Mut-001基因并合成Mut-001基因探针,获得Mut-001基因在斑马鱼早期发育过程中的表达情况,Mut-001基因在1 000细胞期(受精后3小时,即3 hpf)、50%外包期(受精后5.3小时,即5.3 hpf)前普遍性表达;受精后14小时(14 hpf)开始在头部、肌节边界及躯干肌肉有特异性表达;受精后24小时(24 hpf)时这些部位表达更明显并在听囊、脊索出现特异性表达;受精后36小时(36 hpf)开始除了在头部和躯干肌肉持续特异性表达外,在胸鳍原基和心脏也开始特异性表达;受精后48小时(48 hpf)时上述部位持续特异性高表达。说明Mut-001基因在早期参与了中枢神经系统与肌肉的发生,在脑部、脊索、肌肉的发育中可能起到了重要作用。     

牦牛KAT8基因在组织及卵泡发育过程中的表达

探究组蛋白乙酰化酶8(KAT8)在牦牛卵泡发育及卵母细胞成熟过程中的表达规律,为深入探讨KAT8在雌性牦牛生殖过程中的作用机制提供参考.采集3～5周岁成年未妊娠母牦牛卵巢,分离培养出生发泡时期(GV)、第1次减数分裂中期(MⅠ)和第2次分裂中期(MⅡ)的卵母细胞,分别提取上述3个时期卵母细胞总RNA,反转录获得cDNA...     

牦牛卵泡发育及卵母细胞成熟过程中CYP19A1表达差异分析

旨在探索CYP19A1在牦牛卵泡发育过程及不同成熟阶段卵母细胞中的表达水平.采用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)检测CYP19A1在牦牛不同级别卵泡(≤3 mm、3～5 mm、5～8 mm及≥8 mm)和卵丘—卵母细胞复合体(Cumulus-oocyte com...     

CYP11A1在牦牛不同级别卵泡及卵母细胞成熟过程中的表达

目的:本研究旨在探索CYP11A1在牦牛卵泡发育过程及不同成熟阶段卵母细胞中的表达情况.方法:采用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)和免疫荧光技术(Immunofluorescence,IF)检测CYP11A1在不同级别卵泡(0～3 mm、3～5 mm、5～8 m...     

水通道蛋白7和8在牛早期胚胎发育过程中的表达规律

以牛卵母细胞为研究对象,体外成熟后孤雌激活,收集各个时期的卵母细胞和不同发育阶段的早期胚胎,提取总RNA。根据GenBank公布的mRNA序列设计引物,进行RT-qPCR,检测不同阶段AQP7与AQP8的时空表达规律,结果表明:AQP7与AQP8在不同时期卵母细胞和早期胚胎中具有相似的表达规律,在8Cell达到峰值,而到16Cell期表达量均有显著下降。在牛早期胚胎发育阻滞期(8-16Cell期),胚胎发育由母源基因主导调控转向依赖合子自身遗传物质,这期间AQP7与AQP8表达变化说明其在转变过程中具有重要作用,本试验为AQP7与AQP8在牛早期胚胎发育过程中的功能研究奠定基础。     

小鼠早期胚胎发育过程中的DNA去甲基化

表观遗传修饰在基因转录与表达、细胞生长与分化以及动物个体正常发育等过程中都具有重要的调控作用。表观遗传修饰发生异常,会引起机体生长发育中的各种异常。哺乳动物从精卵受精到附植前的胚胎早期发育阶段会发生重要的表观遗传重编程,主要包括DNA甲基化和组蛋白修饰。精卵受精后DNA发生主动和被动2种方式的去甲基化。本文主要综述了与DNA甲基化相关的蛋白和早期胚胎发育过程中的去甲基化机制,并对小鼠附植前胚胎发育过程中的DNA甲基化的动态变化进行了详细的论述。     

小鼠胚胎早期发育过程中OCT4作用的研究进展

OCT4属于POU转录因子。目前对于OCT4基因的研究认为在鼠和人体内,OCT4主要表达于胚胎干细胞及生殖细胞中,对于维持胚胎干细胞的多能性和自我更新有十分重要的作用,对于胚胎早期发育具有重大意义。但是目前OCT4在小鼠早期胚胎中的结合位点还不清晰,应进一步深入研究OCT4基因构建OCT4在小鼠早期胚胎发育过程中的调控网络,为揭开胚胎早期发育调控机制的面纱提供重要参考。     

OCT-4在哺乳动物早期胚胎中的表达和调控

转录调节因子OCT是POU家族的成员,有专一的细胞和组织表达模式,由于它们能与DNA八聚体模体(Oetamer motif) ATGCAAAT结合而被命名为Octamer binding protein,即OCT,并且分别从OCT-1命名到OCT-10,其中OCT-4(也称OCT-3、OCT-3/4、POU5f1、OTF3或NF-A3)属于POU家族的第V亚族,是OCT家族在胚胎发生过程中最先表达的因子.     

牛体外受精胚胎早期发育过程中基因差异表达的研究

本研究旨在筛选牛体外受精胚胎早期发育差异表达基因,并进行差异表达分析。选取牛卵母细胞、体外受精8细胞期和囊胚期胚胎为试验材料,进行mRNA差异表达研究。初步克隆出4个牛卵母细胞和早期胚胎发育不同阶段差异表达的基因,同源性分析显示,它们分别与高移动样蛋白盒结构域4基因(HMGXB4)、热休克蛋白40亚家族C成员8基因(Dnajc8)、突触膜胞吐调节2基因(RI MS2)和核糖体蛋白L31基因(RPL31)高度同源。RT-PCR检测验证,HMGXB4、Dnajc8、RI MS2和RPL31在牛卵母细胞和早期胚胎发育过程中mRNA表达量存在时间性差异,可能与其参与不同的生理活动有关。     

牦牛KDM4A基因克隆、组织表达谱及其在卵母细胞和颗粒细胞中的表达

本研究旨在阐明牦牛KDM4A基因的表达特性及其在牦牛卵母细胞和颗粒细胞中的作用。采集牦牛心、肝、脾、卵巢、肺、肾、睾丸、小肠、子宫、胃、大脑组织,以GenBank上已发布的黄牛KDM4A基因序列设计引物,利用RT-PCR方法扩增克隆牦牛KDM4A基因及检测其在牦牛各组织中的表达谱,并使用在线软件ExPASY分析KDM4A基因的结构和功能。采用实时荧光定量PCR法检测牦牛不同时期卵母细胞和颗粒细胞中KDM4A基因的表达水平。结果表明,本研究克隆得到牦牛KDM4A基因3 289bp的cDNA序列。牦牛KDM4A核苷酸序列与其它哺乳动物的遗传距离较近,表明KDM4A基因在进化中较为保守。牦牛KDM4A基因CDs区为3 201bp,编码1 066个氨基酸残基,相对分子质量122.48ku。KDM4A蛋白为亲水不稳定的酸性蛋白,无跨膜区和信号肽,二级结构主要包含α-螺旋和无规卷曲,与三级结构分析结果一致。KDM4A基因在所选牦牛组织样本中均有表达,其中在卵巢、脾和睾丸中表达量最高。牦牛KDM4A mRNA在MII期颗粒细胞中表达量显著高于在MI期和GV期颗粒细胞中的表达量(P0.05),GV期卵母细胞中,KDM4A mRNA的表达水平显著高于在MI期和MII期卵母细胞中的表达量(P0.05)。综上表明,本研究成功克隆了KDM4A基因及其在牦牛卵母细胞和颗粒细胞成熟过程中mRNA表达水平的差异,表明KDM4A基因在卵母细胞及颗粒细胞成熟过程中发挥一定作用。     

牦牛HDAC1基因克隆及其在组织和卵母细胞减数分裂过程中的表达研究

旨在克隆牦牛组蛋白去乙酰化酶1(histone deacetylases 1,HDAC1)基因,并检测其在牦牛不同组织及卵母细胞减数分裂过程中的表达水平,从而为研究HDAC1在牦牛生殖发育中的作用机制提供理论依据。本试验采用牦牛为研究对象,通过RT-PCR技术获得牦牛HDAC1基因CDS序列,使用相关生物信息学软件分析其结构和功能,通过实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测HDAC1基因在牦牛脑、心、肌肉、卵巢、肾、脾、小肠、肝、肺和子宫组织中的表达谱及在卵母细胞减数分裂过程中mRNA的表达水平。结果表明,HDAC1基因开放阅读框为1 302 bp,编码433个氨基酸,与黄牛、山羊和绵羊的同源性较高;HDAC1基因在牦牛的各个组织中均有表达,其中在脾、肾和小肠中的表达量极显著高于其他组织(P0.01)。在牦牛减数第一次分裂中期(MⅠ)和减数第二次分裂中期(MⅡ)卵母细胞中,HDAC1基因的表达水平极显著高于生发泡(germinal vesicle,GV)期(P0.01)。提示,HDAC1基因参与牦牛卵母细胞减数分裂过程。本试验为进一步研究HDAC1基因在高寒、低氧环境下的牦牛生殖繁育中的作用提供了理论依据。     

5-羟色胺对卵母细胞成熟及胚胎早期发育影响的研究进展

5-羟色胺(5-HT)是一种神经递质,广泛分布在中枢神经系统及胃肠道中,在雌性动物生殖组织中也有分布,其受体可分为7个亚家族,不同的受体通过多种信号通路发挥作用,参与广泛的生理活动,在调控卵泡发育、卵母细胞成熟及早期胚胎发育中发挥着重要的作用.本研究总结了5-HT的合成及代谢过程,以及5-HT及其受体家族的组成结构及发...     

HSPA9B在牦牛体外受精胚胎中的表达

本试验旨在研究热休克蛋白70-9B(heat shock 70 000protein-9B,HSPA9B)在牦牛早期体外受精胚胎中的表达差异及其与体外受精胚胎发育的关系。在正常生理条件下,采集青海高原牦牛卵巢,捡取质量良好的卵丘-卵母细胞复合体(cumulus-oocyte complexes,COCs),进行体外受精和体外培养,采取实时荧光定量(RT-qPCR)和间接免疫荧光技术,检测HSPA9B在不同时期体外受精胚胎中的表达差异及其蛋白分布。实时荧光定量结果表明,HSPA9B在2~4细胞期胚胎中的相对表达量,分别是在桑椹胚和囊胚中的6.693 4、5.227 4倍,HSPA9B在4~8细胞期胚胎中的相对表达量分别是在2~4细胞期胚胎、桑椹胚和囊胚中的1.136 8、9.089 7和5.937 2倍。间接免疫荧光染色结果表明,在2~4细胞期胚胎、4~8细胞期胚胎和桑椹胚中,胞核HSPA9B的相对表达量较胞质弱,在囊胚中胞核HSPA9B的相对表达量较胞质强。由此得出结论:通过基因水平研究,发现HSPA9B在牦牛早期各时期的体外受精胚胎中存在表达差异,HSPA9B在2~4、4~8细胞期胚胎中的相对表达量与其在桑椹胚和囊胚中的相对表达量差异性极显著(P0.01),提示:可能是HSPA9B在胚胎早期发育中发挥重要作用;通过蛋白水平研究,发现HSPA9B在2~4细胞期胚胎、4~8细胞期胚胎和桑椹胚中,胞核HSPA9B的表达量较胞质的表达弱,在囊胚中胞核HSPA9B的表达量较胞质的表达强,结果表明,在体外培养的环境应激条件下,牦牛体外受精胚胎发育至囊胚时,HSPA9B蛋白的分布可能发生了移位。     

KDM2B基因克隆及其在牦牛组织和卵母细胞减数分裂过程中的表达研究

本研究旨在克隆牦牛组蛋白去甲基化酶2B(Lysine-specific histone demethylase 2B,KDM2B)基因,检测其在牦牛不同组织及其在卵母细胞减数分裂过程中的表达水平,从而为研究KDM2B基因在牦牛减数分裂中的作用机制提供试验依据。牦牛屠宰后,采集心、肝、脾、肺、肾、脑、小肠、胃、肌肉、卵巢、睾丸和子宫组织样品,分别提取各个样本的总RNA。另选择3~5周岁的健康牦牛,采集卵巢后,抽取卵丘-卵母细胞复合体(Cumulus-oocyte complex,COCs),透明质酸酶作用后,获得卵母细胞和颗粒细胞,利用RT-PCR扩增得到KDM2B基因CDS区序列,实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测KDM2B基因在不同组织中的表达水平。体外培养获得GV、MI、MII 3个时期COCs,用qRT-PCR法检测KDM2B基因在卵母细胞减数分裂过程中的表达规律。结果表明,KDM2B基因CDS区长为3 930bp,编码1 309个氨基酸,与牦牛已有预测序列相比,属于长型转录本。与牛、绵羊、山羊的同源性较高,与斑马鱼和鸡的同源性较低。KDM2B基因在牦牛的各个组织中均有表达,其中脾、子宫、睾丸和卵巢的表达量较高。在MI期卵母细胞中,KDM2B基因的表达水平显著高于GV期和MII期(P0.01)。在卵丘颗粒细胞中,KDM2B基因的表达水平随减数分裂的进行而显著增加(P0.01)。本研究为进一步研究牦牛卵母细胞减数分裂机制及改善牦牛繁殖效率提供基础资料。     

降钙素基因相关肽在鸭腔上囊胚胎及胚后发育过程中的表达

应用免疫组织化学技术研究降钙素基因相关肽在鸭腔上囊胚胎及胚后发育过程中的表达特征.结果显示,降钙素基因相关肽强阳性细胞出现于20 d胚龄至胚后14周龄的滤泡间上皮,20 d胚龄至胚后17周龄的小结相关上皮,新生雏至胚后14周龄的滤泡皮质,24 d胚龄至胚后14周龄的滤泡髓质,20 d胚龄至胚后14周龄的肌层和小动脉平滑肌.结果说明,降钙素基因相关肽表达于鸭腔上囊的不同部位及不同发育阶段;在腔上囊退化期,降钙素基因相关肽的表达表现出明显的变化特征,这可能是导致腔上囊退化的原因之一;滤泡间上皮与小结相关上皮在神经肽表达方面存在差异.     

Oct4在山羊睾丸组织中的表达与定位

探讨不同时期山羊睾丸组织中干细胞的分布和特点,以45 d和75 d山羊胎儿及出生后4月龄山羊睾丸为试验材料,进行了HE染色和Oct4抗体的免疫组化染色。结果显示,在45 d山羊胎儿睾丸组织中睾丸实质细胞聚集呈团状,形成岛屿状组织结构;发育到75 d山羊胎儿睾丸组织中睾丸的间质与实质组织结构差异明显,睾丸生精小管已经形成,生精小管管腔闭锁;出生后4月龄山羊睾丸组织结构明显,生精小管形态特征清晰,但管腔仍处于闭锁状态;Oct4免疫组织化学显示在45 d山羊胎儿睾丸组织中Oct4阳性细胞呈岛屿状分布,多见于生精小管前期的组成细胞;对于75 d山羊胎儿睾丸组织Oct4阳性细胞呈环状分布于生精小管中,睾丸间质组成细胞中则较少;在出生后4月龄山羊睾丸中阳性细胞主要分布于睾丸组织生精小管基底膜,沿基底膜环状分布。试验证实了在早期山羊睾丸组织中Oct4主要表达在生精前体细胞。