猪瘟耐热活疫苗节能冻干曲线的优化研究

猪瘟疫苗真空冷冻干燥工艺,可减少冻干对制品活性的影响,降低制品冻干过程的耗能,缩短冻干周期,故研制安全、耐热、节能的猪瘟减毒冻干疫苗极为重要。选用甘露醇、甘氨酸等成分设计猪瘟耐热保护剂配方,通过间接免疫荧光法比较制品在37℃、10 d的冻干和耐热损失,并用兔体热反应法复核。检测优化配方的共晶点和塌陷温度设计冻干程序,比较不同预冻方式对猪瘟耐热疫苗冻干的影响,调整冻干周期。猪瘟耐热保护剂配方A-4的冻干和耐热损失最小,分别为0.30 lg和0.45 lg。根据制品的共晶点-27.51℃,对预冻方式筛选,发现快冻冻干和耐热损失最小,分别为0.17 lg和0.38 lg,根据塌陷温度-24.3℃,成功将冻干曲线缩短至24 h。调整后的配方可使猪瘟活苗在37℃保存15 d、45℃保存7 d;内毒素和动物试验表明该疫苗安全、无副反应。上述结果表明,试验成功筛选出猪瘟耐热保护剂配方A-4,在保证疫苗质量的前提下优化冻干曲线,调整后的保护剂配方保证疫苗耐热性能,安全无副反应。     

耐热保护剂提高鸡新城疫-传染性支气管炎二联活疫苗保存效果研究

为提高鸡新城疫-传染性支气管炎二联活疫苗的耐热性能,根据前期研究设计了3个耐热保护剂配方,比较不同配方对疫苗的抗原冻干损失、温度耐受性和保存期的影响.结果显示,保护剂TS11、TS37、TS51所制备疫苗的抗原冻干损失均在0.5 lg以下,相互之间差异不明显.但TS37所制备疫苗在37℃和45℃耐受后的抗原效价下降滴度明显低于TS11和TS51,这说明TS37具有更好的耐热保护效果.另外,25℃、2～8℃保存试验显示,配方TS37可使疫苗在室温下至少能保存1个月、冷藏条件下至少保存27个月而抗原含量和攻毒保护仍能达到质量标准要求.因此,本试验研制成功针对鸡新城疫-传染性支气管炎二联活疫苗的耐热保护剂TS37,该保护剂可使疫苗实现2～8℃下长期保存.     

鸡新城疫、传染性支气管炎二联活疫苗冻干工艺研究

为提高鸡新城疫、传染性支气管炎二联耐热保护剂活疫苗生产效率,该试验对冻干保护剂组方、冻干参数和冻干曲线进行优化研究。试验结果显示:优选工艺制备的疫苗冻干损失及37℃10d耐老化损失均在0.3个滴度以内,并且冻干时缩短17h,因此,优选工艺制备的鸡新城疫、传染性支气管炎二联活疫苗热稳定性较好、生产效率较高。     

猪瘟活疫苗耐热保护剂研究

为了延长猪瘟活疫苗保存期,提高产品质量,通过试验,初步筛选出1组符合要求的耐热保护剂.通过对比试验,证明应用耐热保护剂的猪瘟活疫苗优于常规保护荆疫苗.热稳定性试验结果表明,耐热保护剂疫苗在37℃条件下可保存14 d.外观性状、剩余水分、稳定性等都符合要求.     

新型猪瘟耐热活疫苗冻干工艺设计及放大研究

为了筛选耐热、安全的猪瘟活疫苗冻干工艺,探索工艺放大规律,为耐热冻干工艺从实验室到生产提供理论依据和技术支撑。根据新型猪瘟耐热配方的热参数科学设计冻干程序,通过冻形、加速耐老化实验、残余水分等指标筛选冻干程序并进行工艺放大。结果表明,新型猪瘟耐热活疫苗溶液的共晶点为-26.4℃、塌陷温度-22.4～-20.4℃,筛选得到冻干程序3,当预冻温度为-42℃,主干燥温度为-10℃时为最优曲线。将程序3在0.15 m~2—0.5 m~2—2 m~2进行逐级工艺放大摸索,规模放大3倍(0.5 m~2)时程序可不变,放大到13倍(2 m~2)时需在主干燥阶段下调隔板温度、延长干燥时间。采用新型猪瘟耐热配方及程序3制备的冻干活疫苗产品可在37℃保存20 d、45℃保存14 d;动物实验安全。上述结果表明成功筛选出新型猪瘟耐热配方的配套冻干工艺,并实现了工艺的逐级放大。     

鸭瘟鸭病毒性肝炎二联弱毒疫苗的研究 Ⅱ、稳症性、保存条件及保存期的测定

本文报道了鸭瘟鸭病毒性肝炎二联弱毒疫苗的稳定性、保存条件和保存期。稳定性的测定是采用了不同保存条件、不同保存期（月）的二联苗，用抗鸭瘟高免血清或抗鸭病毒性肝炎高免血清中和掉二联苗中的相应弱毒后，测定剩下的鸭病毒性肝炎弱毒和鸭瘟弱毒（满度）分别对9日龄鸡压的半数致死置（LD60）和对鸡胚成纤维细胞（CEF）的半数感染量（TCID60）来判定二联苗的稳定性．保存期的测定是采用不同保存条件（℃）不同保存期（月）的二联苗免疫成年鸭，10天后采血测定抗鸭肝炎病毒中和抗体效价及抵抗1万倍最小致死量鸭瘟强毒攻击的能力．试验结果表明：非冻干二联苗子－15—25℃条件下可保存18个月，0℃冻冻结态下可保存1年，4－10℃可保存半年，15－25℃保存10天。疫苗冻干后，－15—25℃条件下可保存20个月，0℃保存问个月，4－10℃保存12个月，15－25℃保存20天．     

畜禽免疫失败原因初探

1 疫苗方面原因 1.1 疫苗的保存 作为畜禽预防接种用的各类疫苗都有严格的保存条件要求.比如,大多数的活疫苗都采用冷冻真空干燥的方式冻干保存,这类疫苗常在-15℃以下保存,一般保存期是2a;2～8℃保存时,保存期是9个月.油佐剂灭活疫苗以白油为佐剂乳化而成,大多数病毒性灭活疫苗采用这种方法.该类疫苗要求2～8℃保存,严防冻结.冻干苗属活苗,其中的疫苗细胞和病毒在真空环境下处于休眠状态,若真空环境遭到破坏,也会造成疫苗失效,从而导致接种失败.     

猪繁殖与呼吸综合征疫苗室温保存工艺的研究

为了提高猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）弱毒活疫苗的耐热性能,用蔗糖、胰蛋白胨、EDTA、乳糖等成分配伍成不同组方,对PRRS病毒进行梯度真空泡沫干燥。37℃ 10 d耐老化试验结果表明,组方T28C-1、T28C-4、T28C-5和T28C-7的病毒损失均＜0.5 Lg;疫苗长期保存期试验结果表明,T28C-4、T28C-5在37℃可保存4个月,25℃及自然条件下可保存5个月以上;将37℃、25℃及4℃下保存3个月的T28C-4干燥疫苗免疫20日龄仔猪,免后2周ELISA抗体水平合格且与商品苗趋势相当。试验结果表明PRRSV泡沫干燥疫苗有很好的耐热效果。     

鸡新城疫活疫苗室温保存工艺的初步研究

选用海藻糖、明胶、PVP等成分配制耐热保护剂,采用梯度真空干燥方法,将鸡新城疫病毒(La Sota株)进行泡沫干燥,通过37℃10 d耐老化试验筛选到配方T5的病毒滴度损失为0.2 Lg;NDV-T5泡沫干燥疫苗经DSC测定配方玻璃化转变温度Tg为56.45℃,扫描电镜观察可见较为规则的片状结构;NDV-T5在各温度耐热性能均较好,2℃~8℃保存24个月,25℃保存15个月、37℃保存5个月,病毒含量下降≤1.0 Lg;将不同保存温度的NDV-T5泡沫干燥疫苗免疫1月龄雏鸡,鸡只均能在免疫后14 d产生抗体,与现有商品疫苗效力相当。     

猪瘟疫苗冻干保护剂的筛选及免疫效果评价

为了筛选耐热性能好、能提高猪瘟病毒(SFV)疫苗经口服途径免疫效果的冻干保护剂,配比不同组分的冻干保护剂与黏膜佐剂LTRG蛋白、SFV按比例混合,通过对冻干工艺的优化,制备了4种.SFV的冻干苗;口服免疫小鼠,测定血清IgG和粘膜IgA抗体效价。结果表明:试验2组即甘氨酸+明胶组和试验4组即明胶组的外观形态较好,水溶后呈现澄清的状态;试验2组和试验4组的冻干苗经口服免疫,诱导小鼠产生的IgG抗体水平显著高于SFV组、SFV+LT组及其他试验组(P0.01)。二免7 d试验2组小鼠肛试子IgA抗体显著高于其他组(P0.01),且小鼠脾脏IFN-γ和IL-4细胞因子的表达量也极显著高于其他组(P0.01)。研究初步筛选出第2组配方,即以甘氨酸和明胶配伍作为猪瘟口服疫苗冻干保护剂,为研制口服途径免疫的猪瘟疫苗奠定了基础。     

水貂犬瘟热Vero细胞活疫苗保存期试验研究

对-20℃保存90d、120d、150d、180d、210d、240d、300d的水貂犬瘟热Vero细胞活疫苗的病毒含量以及疫苗免疫试验进行测定。结果表明,保存180d的疫苗病毒含量基本保持不变,保存240d疫苗病毒含量有所下降;疫苗免疫240d中和抗体仍在临界保护值1:40以上,确定该疫苗在-20℃条件下保存期为180d。     

鸭病毒性肝炎间接血凝诊断抗原的制备

【研究目的】建立一种便于检测鸭病毒性肝炎抗体的方法。【研究方法】将纯化的鸭病毒性肝炎I型病毒(DHV-I)致敏双醛化红细胞,制备检测DHV抗体的间接血凝诊断抗原。【研究结果】使用该抗原对9种常见的禽传染病阳性血清、15只随机抽样的非免疫鸭血清进行检测,抗体均为阴性;检测被鸭病毒性肝炎I型病毒阻断后的阳性血清,抗体为阴性;用不同批次的诊断抗原检测同一血清样品结果显示一致;敏感性是琼脂扩散试验的32～64倍;对15只随机抽样的免疫鸭进行检测,阳性率达93%。【结论】该方法敏感性较高、特异性强、重复性好,可用于疫苗免疫后抗体水平的检测及鸭病毒性肝炎的流行病学调查。     

口蹄疫病毒抗原保护剂的研究

[目的]研究几种(海藻糖、蔗糖、山梨醇、聚乙烯吡咯烷酮、硫脲、明胶、L-精氨酸、抗坏血酸)保护剂,为口蹄疫抗原保护剂配方的形成提供参考。[方法]用三因素、三水平、双重复正交试验方法筛选出了对口蹄疫病毒(FMDV)抗原保护效果最好的I(4#)保护剂配方,以加保护剂A(已申请专利)的病毒为对照,比较其在不同条件下的TCID50和146s抗原的含量。[结果]通过方差分析4#保护剂保存病毒测得TCID50极显著的高于1、3、5、6、7、8号,显著高于2、9。将4#保护剂加入被保存的病毒抗原中,分别于4℃下保存90、120、150 d,其logTCID50分别为5.3、5.0和4.5,而加保护剂A(已申请专利)的对照病毒则为5.0、4.5和4.3;在37℃下保存40、50和60 h,其logT-CID50分别为4.5、2.5和1.0;而加保护剂A的对照病毒则为3.5、1.5和0.5,为了进一步验证保护剂对FMDV抗原的保护性能,进行了FMDV146s抗原含量的测定。分别于4℃下保存150 d,37℃下保存40 h,测得结果分别为0.796、0.462μg/ml,而加保护剂A的对照病毒则为0.602、0.307μg/ml。[结论]该复合配方保护剂I(4#)对FMDV有效抗原的保护作用优于保护剂A,尤其是病毒保护剂对提高FMDV的冷冻保存时间和耐热效能作用明显。     

发酵葡萄籽粕冻干粉工艺优化及产品开发

【目的】优化葡萄籽粕发酵液冻干保护剂配方,以发酵葡萄籽冻干粉为原料开发乳酸菌发酵葡萄籽功能性含片,为葡萄酒副产物的综合利用提供理论依据及实践基础。【方法】以葡萄籽粕发酵液为原料,经单因素试验筛选冻干保护剂基质与保护剂因子,以正交试验设计确定最佳冻干保护剂配方,制备发酵葡萄籽粕冻干粉。在此基础上,以发酵葡萄籽粕冻干粉为主要原料,通过模糊映射评价矩阵进行感官评价,优化并建立发酵葡萄籽粕咀嚼片最佳配方。【结果】葡萄籽粕发酵液冻干保护剂配方为：脱脂乳粉5%,山梨醇1.5%,聚葡萄糖2%,海藻糖3%,与发酵液比例为1∶1,乳酸菌冻干保护率为84.5%,发酵葡萄籽粕冻干粉的水分活度为0.028±0.002。发酵葡萄籽粕咀嚼片的最优配方为：发酵葡萄籽粕冻干粉添加量30%,赤藓糖醇添加量为20%、微晶纤维素添加量为20%、麦芽糊精添加量为17.5%、葡萄果粉添加量为10%、柠檬酸添加量为1.5%、硬质酸镁添加量为1%,产品感官评分为83.7,水分活度为0.119±0.002,乳酸菌活菌数为2.02×10⁷ CFU/g,其他理化指标均符合要求。【结论】筛选和优化的冻干保护剂可有效保...     

鸡新城疫病毒耐热冻干保护剂的研究

对利用耐热保护剂制成的新城疫病毒冻干品的研究表明 :制品在 3 8℃条件下 8、14和 2 1d ,其中较理想一组冻干病毒的EID50 / ( 0 .1ml)由 10 6 .33分别下降为 10 3.6 7、10 4 .33、10 3.6 7。     

鸭出血性卵巢炎实验感染模型的建立

 【目的】建立鸭出血性卵巢炎的实验动物感染模型并对其发病特点进行观察,为疫苗研究和筛选评价抗病毒药物提供工具。【方法】以每只约104个ELD50的剂量经滴鼻、点眼和口服途径感染196日龄北京鸭后,观察鸭临床症状,于感染后5、7、9、21、28、34 d采血和剖检鸭,应用固定病毒稀释血清的方法测定血清中和抗体,取卵泡膜、肝脏、脾脏和脑组织进行病毒分离,对主要组织脏器进行病理学检查。【结果】攻毒后3、4、5d采食量均显著下降（下降80%）,6d采食量恢复至约正常量的50%,11d恢复到正常水平;攻毒后3、4、5d产蛋量出现明显下降,6、7、8d鸭群未见产蛋,36d发病鸭群的产蛋率恢复到60%,39d鸭群的产蛋率达到80%。攻毒后5d 3只（3/3）鸭的卵泡膜和肝脏均可以分离到病毒,7d 2只（2/2）鸭的卵泡膜中均分离到病毒,1只鸭（1/2）脾脏和脑组织中均分离到病毒,9d 1只鸭（1/2）的卵泡膜中分离到病毒,21d和28d卵泡膜病毒分离结果均为阴性。感染鸭的卵巢变性、变形,卵泡膜充血、出血;卵巢、肝脏、脑、脾等组织和脏器均出现以网状细胞（巨噬细胞）增生为主的病理变化,表现为急性出血性卵巢炎、间质性肝炎、非化脓性脑炎、坏死性脾炎、间质性肾炎和轻度的心肌炎。感染后3周可检测出低效价的中和抗体。【结论】实验感染鸭出血性卵巢炎病毒后可引起急性出血性卵巢炎,利用产蛋北京鸭建立的鸭出血性卵巢炎模型,可用于评价抗病毒药物和疫苗的研究。     

氯霉素速测金标试纸条及其保护剂配方研究

 【目的】研制出一种适合于氯霉素残留快速测定的金标试纸条,并对该试纸条的保护剂进行研究,使得研制出的试纸条保存期足够的长。【方法】根据竞争性金免疫层析法原理,研制了氯霉素速测金标试纸条,并选择了蔗糖、葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）、聚乙二醇（PEG）、牛血清蛋白（BSA）、表面活性剂Tween20、防腐剂等物质,采用经验尝试法配制了一系列的配方,对试纸条不同部位进行处理,通过37℃和60℃下热稳定性测试,并与未经稳定剂处理的对照进行比较,筛选出适宜的试纸条保护剂。【结果】经该复合保护剂处理的氯霉素速测金标试纸条,在4℃、37℃和60℃下分别保存180 d、30 d和10 d,显色基本不变,对于标准溶液,其检测灵敏度（目测）可达到1.5 ng?ml-1。未经该复合保护剂处理的氯霉素速测金标试纸条,在4℃、37℃和60℃下保存60 d、3 d和1 d后就迅速失活,无法用于检测。【结论】 研制出的氯霉素金标试纸条检测灵敏度较高（对于添加样品,检测灵敏度为0.75～1.5 ng?ml-1）,经保护剂处理后,4℃下至少可保存半年。     

PPV_(S-1)A株保存期研究及免疫原性测定

为了确保疫苗质量,保证生产用种毒的稳定性,将猪细小病毒PPVS-1A株的干毒和湿毒分别在-20℃和-70℃保存,每12个月取样一次,分别进行病毒含量测定、红细胞凝集价测定、乳鼠安全试验和豚鼠抗体检测。结果病毒含量均大于107.25;红细胞凝集价为1∶1024;乳鼠接种未见不良反应;豚鼠抗体检测HI均不低于1∶32。确定猪细小病毒PPVS-1A株湿毒在-20℃的保存期为24个月,在-70℃的保存期为48个月;猪细小病毒PPVS-1A株冻干毒在-20℃的保存期为36个月,在-70℃的保存期为60个月。猪细小病毒PPVS-1A株毒保存期长,具有良好的安全性和免疫效力。     

布鲁氏菌病活疫苗加改良保护剂冻干后的效果观察

为了提高冻干产品的档次 ,对现有的老式冻干机进行了改造 ,冻干工艺由原来的间接板层冻干改变为直接板层冻干 ,由于冻干工艺的改变 ,使用明胶蔗糖保护剂冻干的布鲁氏菌病活疫苗 (M5株 )物理性状不好 ,出现结晶、不易脱壁、残余水分超标等现象。在原明胶蔗糖保护剂的基础上添加了规程容许的其它保护剂成分后 ,问题得到了解决 ,经活菌计数、残余水分测定、物理性状检查 ,保存 4个月、7个月、12个月后活菌计数等与 2 0 0 2 0 3批布鲁氏菌病活疫苗 (S19号 )比较 ,证明疫苗质量并没有下降。试验成果运用在布鲁氏菌病活疫苗(M5株 ) 2 0 0 2 0 7～ 2 0 0 2 15批的生产中 ,疫苗质量有了明显提高 ,完全达到了《规程》标准     

2个厂家不同剂量猪瘟疫苗临床免疫效果比较

【目的】比较2个厂家不同剂量猪瘟疫苗的临床免疫效果。【方法】将60头断奶空怀母猪随机平均分为2组,一组接种较高剂量猪瘟疫苗E(E组),另一组接种较低剂量猪瘟疫苗A(A组);当母猪产仔后,所产仔猪在20d与60d时分别接种1次;采集不同阶段的母猪、仔猪与生长猪的血清,用阻断ELISA方法检测猪瘟病毒抗体。【结果】在断奶空怀母猪阶段,两组之间无差异。在其他阶段,E组猪瘟病毒抗体阻断率一直高于A组,各个阶段均达到显著(P0.05)水平;除35d与56d仔猪外,E组猪瘟病毒抗体阻断率变异系数都小于A组;E组猪瘟病毒抗体阳性率都高于A组,其中在35d仔猪达到显著水平。抗体检测结果显示,E组猪瘟免疫抗体数据优于A组,表明猪瘟疫苗E的临床免疫效果优于疫苗A。【结论】较高剂量猪瘟疫苗的临床免疫效果好于较低剂量疫苗,为剂量存在差异的不同厂家猪瘟疫苗的临床选用提供了试验依据。