松墨天牛肌钙蛋白T基因全长cDNA克隆及分析

采用c DNA末端快速扩增(RACE)方法获得了松墨天牛(Monochamus alternatus)肌钙蛋白T基因c DNA,全长1531bp,命名为Ma Tn T(Gen Bank:KJ756400).该基因开放阅读框(ORF)为1020 bp,编码339个氨基酸,等电点为9.26,推测的编码蛋白质分子质量为37.29 ku.同源比对结果表明:Ma Tn T与褐飞虱(Nilaparvata lugens)、黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)等12种昆虫肌钙蛋白氨基酸同源性为87%-88%;构建的系统发育树显示Ma Tn T处于独立分支;Ma Tn T没有信号肽和跨膜螺旋,属于亲水性氨基酸,二级结构包含了螺旋和不规则卷曲两种形式,含有丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)、酪氨酸(Tyr)磷酸化位点数分别为8、9、3个.RT-q PCR检测表明,Ma Tn T基因在幼虫、蛹和成虫中均有表达;在成虫触角和足中表达量最高.     

松墨天牛铁蛋白重链相似物的cDNA克隆及生物信息学分析

昆虫铁蛋白(ferritin)由两个亚基组成,类似于脊椎动物铁蛋白的重链和轻链.从松墨天牛(Monoc hamusahe rnatus)cDNA文库中筛选出erritin基因的重链同源物(HCH) cDNA序列,其开放阅读框(ORF)长669 bp,编码222个氨基酸,命名为Mafer,GenBank登录号为KJ872588,该序列推测的蛋白分子质量为25.8 ku,等电点为5.72.预测的松墨天牛ferritin信号肽长度为18个氨基酸残基,在5'非编码区没发现铁反应元件(IRE),N末端有保守的半胱氨酸,符合脊椎动物重链特点.相似性比对显示,松墨天牛ferritin与光肩星天牛(Anoplophora glabripennis)和桑天牛(Apriona germari) ferritin的相似性分别为93％和69％;系统进化树分析显示,松墨天牛与光肩星天在同一分支下,与黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)亲缘关系较远.     

松墨天牛转铁蛋白基因克隆及生物信息学分析

转铁蛋白是一类非血红素结合铁的β1–球蛋白,广泛分布于脊椎动物和无脊椎动物体内。克隆了松墨天牛转铁蛋白基因(登录号:KU213914),命名为Ma Tf,其核苷酸序列全长为2 549 bp,包含一个2 178 bp的开放阅读框(ORF)和一个371 bp的带有加尾信号的3'非编码区(3'UTR)。采用生物信息学方法分析Ma Tf的编码蛋白,结果显示:松墨天牛转铁蛋白分子量约为80 ku,等电点为7.36,为稳定蛋白,有信号肽,不含跨膜结构域,有1个糖基化位点,有平均分布在整条肽链的43个磷酸化位点。二级结构多为随机卷曲,仅有21.52%α螺旋,24%β片层(延伸链)结构,能形成三段卷曲螺旋,为亲水性蛋白,N端和C端各有1个TR_FER结构域。     

松墨天牛dynamin-1-like protein基因的鉴定及表达分析

为了探讨GTP酶超基因家族中dynamin-1-like protein基因在昆虫中的表达特性,以松墨天牛为研究对象,从已构建的cDNA文库中筛选到松墨天牛dynamin-1-like protein基因,命名为Ma DLP1(Gen Bank:KU245763)。该序列长为2 133 bp,编码710个氨基酸。由此预测的蛋白质二级结构主要由α螺旋与无规则卷曲组成,其次是β片层与β转角;Ma DLP1基因编码蛋白质,定位于细胞核。通过DNAMAN软件比对发现Ma DLP1与赤拟谷盗的DLP1同源性最高,为82%,且存在3个保守酶域;用Clustal X和MEGA4.0构建系统发育树,显示松墨天牛与赤拟谷盗处在同一分支。RT-qPCR分析结果显示,Ma DLP1在各虫态不间断表达,幼虫期在5龄幼虫中表达量最高,化蛹期间表达量先上升后下降,羽化期间表达量表现为先上升后下降,并在初羽化的成虫中表达量达到最大值;Ma DLP1在幼虫和成虫头部表达量较高,且在幼虫脂肪体中表达最高;成虫的足、翅、触角和卵巢中也都有表达。说明Ma DLP1的表达与松墨天牛的完全变态发育相关。     

松墨天牛防治探讨

松墨天牛是为害松树的主要蛀干害虫,又是传播松材线虫病的主要媒介昆虫。该文介绍了松墨天牛不同虫态的形态特征及生物学特性,并从检验检疫、农业防治、物理防治、生物防治、化学防治等几个方面分析探讨了松墨天牛的防治方法。     

松墨天牛有效积温测定

研究测定了松墨天牛(Monochamus alternatus)的卵、幼虫、蛹在不同温度条件下的发育起点温度(C)和有效积温(K)。卵期恒温条件下:C=14.1士0.93℃,K=100.83士7.16日度;幼虫恒温条件下:C=12.6士1.06℃,K=657±6.4日度。幼虫自然变温条件下1~3龄幼虫C=13.1±0.78℃,K=327±10.96日度。4~5龄幼虫C=12.4±1.24℃,K=314±8.24日度;蛹期恒温条件下:C=11.18±0.91℃,K=169±10.68日度。以此对陕南秦巴山区的松墨天牛成虫羽化盛期和幼虫钻蛀期进行准确预测,为防治适期提供了依据。观察结果表明:松墨天牛在饲养条件下成虫羽化期6~10 d,交配2~4 d后产卵,雌虫平均产卵量62.3个;卵期为5~7d,卵的孵化率为83.4%;幼虫共5龄,1~5龄幼虫龄期分别为5~8 d、8~11 d、8~12 d、12~15 d和8~11 d,幼虫化蛹率82.49%;蛹期为8~14 d,蛹的羽化率为89.58%。成虫一生的产卵量169.89±53.22粒。     

松墨天牛14-3-3ζ 基因的鉴定及生物信息学分析

为探究松墨天牛(Monochamus alternatus)14-3-3ζ基因特性,通过构建cDNA文库,从松墨天牛cDNA文库中克隆到14-3-3ζ基因,命名为Ma14-3-3ζ,GenBank登录号为KT970073.1。克隆得到的Ma14-3-3ζcDNA全长为902 bp,其中开放阅读框为747 bp,编码248个氨基酸。推测的Ma14-3-3ζ蛋白等电点为4.73,分子量为28.16 ku。Ma14-3-3ζ的氨基酸序列与大黄粉虫(Tenebrio molitor)同源性最高、为98%,与褐飞虱(Nilaparvata lugens)等12种昆虫同源性在95%~90%之间。系统发育树表明松墨天牛与大黄粉虫在同一分枝上。     

松墨天牛ADP核糖基化因子1基因的序列及表达特性分析

为了探讨Ras基因超家族中ADP核糖基化因子1基因(ARF1)在昆虫生长发育进程中以及在温度胁迫下的表达特性,以松墨天牛为研究对象,从已构建的cDNA文库中筛选到松墨天牛ARF1基因,命名为MaARF1(Gen Bank:KY368168),对其进行序列分析以及不同虫态和不同温度胁迫下的表达特性分析。结果显示,MaARF1基因编码区序列长为549 bp,编码182个氨基酸。预测蛋白质二级结构主要由α螺旋与β片层组成,其次是无规则卷曲和β转角。通过DNAMAN软件比对发现,MaARF1与赤拟谷盗ARF1蛋白氨基酸序列完全一致,二者同源性为100%,且存在1个十四酰基化位点(G~2)和5个保守域(G_1 box—G_5 box)。通过RT-qPCR分析表明,MaARF1的表达量与松墨天牛的完全变态发育相关,各虫态不间断表达,幼虫期在2龄幼虫(L2)、5龄幼虫(L5)中表达量较高,蛹化期间(L5—P0)表达量表现为上升趋势,并在第2天蛹(P2)中达到最大值,羽化期间(P10—A0)表达量表现为下降趋势;MaARF1在不同温度胁迫下均有表达,低温与高温都会导致表达量下调,温度越高或越低,表达量下调越显著。因此,MaARF1可能主要影响松墨天牛蛹化和羽化这2个变态发育关键点,从而影响整个变态发育历程,同时其也可能参与了松墨天牛体内依赖温度的Ca~(2+)信号途径。     

松墨天牛生物学特性初探

<正>松墨天牛(Monochamus alternatus Hope)又名松褐天牛、松天牛。主要为害马尾松,其次为害冷杉、云杉、雪松、落叶松、桧属等生长衰弱的树木或新伐倒木,它不仅使松树枯死,而且还是松材线虫病的主要传播媒介。而马尾松是我市森林最重要的骨干树种,松墨天牛已成为我市危害马尾松最为严重的害虫之一。为掌握松墨天牛在我市的生物学特性,特别是成虫生活史,为相关防治工作提供理论依据,我们于2005年在青山     

松墨天牛生物学特性研究

松墨天牛（Ｍｏｎｏｃｈａｍｕｓ ａｌｔｅｒｎａｔｕｓ Ｈｏｐｅ）为松树的主要蛀干害虫,同时也是松材线虫的传播媒介。该虫在安徽省１年发生１代,以３、４龄幼虫在树干木质部蛹室内越冬。翌年４月中、下旬开始化蛹,５月上、中旬成虫开始羽化忆,盛期为６月中、下旬;出孔成虫靠爬行与飞翔扩散,大都到树冠上部取食当年生至２年生枝皮进行补充营养,同时传播线虫。其后２～３周进行交配与产卵,产卵期６月上旬至９月上旬。成虫     

松墨天牛种群动态研究

通过对遵义市松墨天牛的野外调查和实验室饲养条件下观察,结果表明:在试验疫区松墨天牛雌雄比例接近1∶1,在实验室内雌雄成对饲养时,雌虫寿命在20 ～94 d之间,平均为53.6 d,雄虫寿命在21～113 d之间,平均为60.6d.每只雌性松墨天牛平均日产卵3.0粒,松墨天牛的平均刻槽有卵率、孵化率及平均刻槽入孔率、入孔迁飞率均较高,分别为97.3％、96.9％、86.9％、93.8％.     

松墨天牛分子生物学研究综述

松墨天牛(Monochamus alternatus Hope)是危害马尾松等林木的重大森林害虫,是松材线虫的主要传播媒介。从松墨天牛的分子生物学基础研究、分子分类及鉴定、c DNA文库与转录组的构建、基因克隆、药剂胁迫对基因表达的影响等5个方面综述其在分子生物学领域的最新进展,以促进松墨天牛基础研究,并为探索松墨天牛安全有效的防治方法提供参考。     

松墨天牛防治技术综述

对目前国内外松墨天牛防治技术,分化学、物理、生物防治及引诱剂诱杀技术4个方面进行综述。结合多种防治手段进行综合治理能有效地降低松墨天牛虫口密度,控制其扩散速度,进而对松材线虫病进行防范及防治。     

松墨天牛防治技术综述

对目前国内外松墨天牛防治技术,分化学、物理、生物防治及引诱剂诱杀技术4个方面进行综述。结合多种防治手段进行综合治理能有效地降低松墨天牛虫口密度,控制其扩散速度,进而对松材线虫病进行防范及防治。     

猪NCOA1基因PCR-RFLP多态性分析

[目的]研究猪NCOA1基因的PCR-RFLP多态性,为猪的分子育种和标记辅助选择提供理论依据。[方法]以81头山东寿光六和原种猪场的长白猪为研究对象,采取常规酚-氯仿抽提法从猪耳组织提取基因组DNA,以基因组DNA为模板进行PCR扩增获得440bp的NCOA1基因目的片段,利用限制性内切酶RsaⅠ对PCR产物进行酶切和琼脂凝胶电泳检测,并计算各等位基因频率和基因型频率。[结果]琼脂糖电泳检测酶切产物出现3种基因型：AA型（1条带：440bp）、AB型（3条带：440、282、158bp）、BB型（2条带：282、158bp）;基因型频率分别为0.54、0.43和0.03;A和B2个等位基因的基因频率分别为0.76和0.24。[结论]该研究猪群中,A为优势等位基因,AA基因型频率较高。     

松墨天牛前胸背板及鞘翅电镜扫描

使用扫描电镜系统观察并描述了松墨天牛前胸背板及鞘翅上的超微结构。结果表明,松墨天牛雌雄成虫前胸背板表面均不光滑,前胸背板有大量的凹陷和刚毛;雄虫前胸背板拥有多个圆形、椭圆形信息素腺孔,且分布在每个包含一个单一的刚毛刻痕的周围;而雌成虫的前胸有类似于雄性表皮的凹痕,但没有信息素腺孔,通常只有一个中央刚毛;雌雄成虫前胸背板后缘皱褶状,具一排密集整齐的刚毛;鞘翅上密布光滑瘤状突起及刚毛,毛孔窝常分布2~3根刚毛。     

松墨天牛危害特点及综合防治技术

松墨天牛是一种危险的蛀干类次生性害虫,介绍了松墨天牛的分布现状及其寄主,总结了其危害特点,并提出综合防治技术,以期有效地遏制松墨天牛危害,尽可能地减少松墨天牛传播松材线虫病。     

云南省松墨天牛地理分布及危害程度调查

松墨天牛是松材线虫的主要传播媒介昆虫,为了预防松材线虫病,采用路线调查法、查迹调查法和样地调查法调查云南省松墨天牛的地理分布与危害程度。在云南省129个县市区中,尚未发现松墨天牛的县市区13个,占10．1％;有松墨天牛分布的县市区116个,占89．9％。其中轻度危害的县市区85个（65．9％）,中度危害的县市区16个（12．4％）,重度危害的县市区15个（11．6％）;松墨天牛的垂直分布范围为649～3255m,海拔高差2606m;危害的寄主树种有云南松、思茅松、高山松、马尾松和华山松。     

绵羊IGFBP-7基因的克隆及序列分析

试验以凉山半细毛羊为研究对象,采用RT-PCR方法克隆了其IGFBP-7基因的CDS全序列,生物信息学方法深入分析其序列。结果表明,凉山半细毛羊IGFBP-7基因的CDS序列为846 bp,编码282个氨基酸,与牛、人、鼠的CDS同源性分别为99%、95%、90%,氨基酸序列同源性分别为98%、93%、89%,Gen Bank登录号为FJ589640.1;IGFBP-7基因的氨基酸分子质量为29.0 ku,理论等电点(p I)为8.25;进化分析显示其与牛、山羊等哺乳动物关系较近,与斑马鱼、鲍等亲缘关系较远;IGFBP-7基因的蛋白质疏水性区域与亲水性区域间隔较为均匀分布,有1个信号肽、2个跨膜区、16个磷酸化位点、4个N-糖基化位点和1个O-糖基化位点;二级结构分析显示无规卷曲、α-螺旋和β-折叠区域分别为64.89%、19.86%、15.25%;三级结构分析显示存在IGFBP_N和Ig-like功能域。该试验为进一步研究绵羊IGFBP-7基因的功能奠定了基础。     

松墨天牛对江西松林生态环境的危险性分析

[目的]进一步加强对江西省松林松墨天牛的综合治理,有效控制其在江西全省的蔓延扩散和危害。[方法]采用有害生物危险性分析方法,对松墨天牛在江西省的危险性进行定性与定量分析。[结果]江西省松墨天牛危险性值R为1.89,可判定松墨天牛在江西省属于接近高度危险的森林有害生物。[结论]该研究可为制定江西省松墨天牛防治策略提供参考。