钒诱导蛋鸡输卵管膨大部上皮细胞氧化应激模型的建立

本试验旨在通过蛋鸡输卵管膨大部上皮细胞(OMECs)的原代培养,构建利用偏钒酸铵(V5+)建立氧化应激模型的方法。试验选用开产前2~3周龄健康罗曼蛋鸡,分离、培养及鉴定OMECs。利用单因素设计6个不同水平的钒浓度(0、25、50、100、250、1 000μmol·L~(-1))处理12h后,测定细胞活力、细胞凋亡、细胞活性氧(ROS)的生成,细胞内超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)的活性,丙二醛(MDA)的含量,细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)的释放量。结果表明:1)分离培养的细胞24h后形成细胞岛,呈"铺路石样";免疫荧光染色细胞抗细胞角蛋白(CK18)、卵清蛋白(OVA)、雌激素受体1(ESR1)和孕酮受体(PGR)呈阳性,抗波形蛋白呈阴性。2)50和100μmol·L~(-1)的钒处理OMECs 12h后,细胞活力分别下降到(69.90±2.78)%和(63.60±1.57)%,显著低于25μmol·L~(-1)钒处理组(P0.05),但是显著高于250和1 000μmol·L~(-1)钒处理组(P0.05)。3)细胞凋亡率随着钒添加量的增多而升高,且各处理组差异显著(P0.05);1 000μmol·L~(-1)的钒细胞凋亡率为最高(P0.05)。4)ROS的测定结果表明,100和250μmol·L~(-1)钒处理组的FITC相对平均值显著高于0μmol·L~(-1)钒处理组(P0.05),且250μmol·L~(-1)钒处理组的FITC相对平均值显著高于100μmol·L~(-1)钒处理组(P0.05)。5)50μmol·L~(-1)钒处理组SOD活性显著低于0μmol·L~(-1)钒处理组(P0.05),但MDA含量差异不显著。而100μmol·L~(-1)钒处理组的MDA含量显著升高(P0.05);50和100μmol·L~(-1)钒处理组细胞CAT活性显著低于0μmol·L~(-1)钒处理组(P0.05);LDH释放量随着钒的添加剂量的增加而升高,1 000μmol·L~(-1)钒处理组LDH的释放量最高,且100μmol·L~(-1)钒处理组LDH的释放量显著高于0μmol·L~(-1)钒处理组(P0.05),达到141.61±2.81U·gprot-1。综上表明,OMECs原代细胞培养成功,在OMEC原代细胞里添加100μmol·L~(-1)的V5+处理12h,可建立OMECs氧化应激模型。     

亚油酸、亚麻酸及二者不同比例对鸡原代肝细胞增殖的影响

本研究使用原位二步灌流法分离鸡原代肝细胞,并测定亚油酸、亚麻酸及不同亚油酸/亚麻酸比例(30∶1,10∶1和2.5∶1)对肝细胞增殖的影响。结果表明:使用0.05%的胶原酶Ⅱ进行原位二步灌流分离鸡原代肝细胞不需要大量的胶原酶,细胞分离效果好,细胞活率高;100μm ol/L的亚油酸处理鸡原代肝实质细胞72 h显著增加细胞增殖,亚油酸/亚麻酸比值为10时细胞增殖能力最强。此方法的建立为研究脂肪酸种类或比例对鸡脂肪代谢和调控机理提供了依据。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对牛冷冻精液品质及受精能力的影响

本试验旨在探究牛冷冻-解冻精液中添加不同浓度表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对精液品质及受精能力的影响。在牛冷冻-解冻精液中添加不同浓度(0、5、10和20μmol·L~(-1))EGCG,38.5℃孵育1h后,检测精子动力学参数、结构完整性、精子中相关酶活力和体外受精能力。结果表明,10μmol·L~(-1)EGCG处理显著提高了精子活力(TM,%)和鞭打频率(BCF,Hz,P0.05);与对照组相比,5、10和20μmol·L~(-1)EGCG处理组精子质膜和顶体完整率显著升高(P0.05);5和10μmol·L~(-1 )EGCG处理组精子线粒体膜完整率显著升高(P0.05);10和20μmol·L~(-1 )EGCG处理能够显著提高精子中超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活力,10μmol·L~(-1 )EGCG处理降低乳酸脱氢酶(LDH)活力和丙二醛(MDA)含量(P0.05);10和20μmol·L~(-1 )EGCG处理显著提高了精子受精后早期胚胎卵裂率和囊胚率(P0.05)。综上表明,10μmol·L~(-1)EGCG处理牛冷冻-解冻精液能提高精液品质及受精能力。     

组蛋白甲基化抑制剂UNC0638对水牛转基因细胞外源基因表达的影响

本研究旨在探讨不同浓度的组蛋白甲基化抑制剂UNC0638对转基因水牛成纤维细胞外源基因表达水平的影响,为外源基因表达机制研究及提高转基因水牛生产效率提供理论依据。试验首先使用不同浓度的UNC0638(0(对照组)、0.5、1.5、2.5、5.0μmol·L~(-1))处理水牛胎儿成纤维细胞(BFFs)8d,绘制细胞生长曲线,并在UNC0638(0(对照组)、0.5、1.5、2.5μmol·L~(-1))处理BFFs 48h后,检测细胞核型,同时利用细胞免疫荧光技术分析组蛋白H3K9me2甲基化水平,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测UNC0638对水牛转基因细胞外源基因表达效率的影响。结果表明:1)BFFs经不同浓度UNC0638处理后,生长曲线与对照组相似,均呈"S"形分布,0.5、1.5、2.5μmol·L~(-1 )UNC0638处理组与对照组相比细胞增殖效率没有发生显著变化,5.0μmol·L~(-1)UNC0638抑制BFFs增殖;2)各处理组细胞核型正常率与对照组间差异不显著;3)此外,UNC0638处理组的细胞组蛋白H3K9me2甲基化水平显著低于对照组(P0.05);4)UNC0638(0、0.5、1.5、2.5μmol·L~(-1))处理水牛转基因胎儿成纤维细胞24h,2.5μmol·L~(-1)组细胞eGFP的相对表达量显著高于对照组(P0.05);处理48h,0.5、1.5、2.5μmol·L~(-1)组eGFP的表达量与对照组相比显著提高(P0.05)。综上表明,UNC0638可有效降低水牛成纤维细胞组蛋白H3K9me2甲基化水平并提高水牛转基因细胞外源基因的表达效率。     

铜通过活性氧诱导鸡肝细胞发生焦亡

为探讨铜是否能诱导肝细胞发生焦亡及其发生机制,本研究通过培养鸡原代肝细胞,以不同浓度的硫酸铜(0,10,50,100μmol/L)处理细胞24h,CCK-8法检测细胞活力,实时荧光定量PCR检测细胞焦亡相关基因Caspase-1、IL-1β、IL-18、NLRP3的mRNA转录水平,酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞上清液中焦亡相关蛋白Caspase-1、IL-1β、IL-18的含量,并使用活性氧清除剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)与铜共同作用于肝细胞后观察上述指标的变化。结果显示,铜可诱导细胞存活率下降(P0.05),焦亡相关基因Caspase-1、IL-1β、IL-18和NLRP3表达显著上调(P0.05),并促使细胞上清液中Caspase-1、IL-1β和IL-18的含量升高(P0.05);NAC与铜联合作用可使肝细胞存活率较铜单独作用显著升高(P0.05),焦亡相关基因表达显著下调(P0.05),相关蛋白含量也显著降低(P0.05)。结果表明,铜可通过活性氧诱导鸡肝细胞发生焦亡。     

黄曲霉毒素B_1致肉仔鸡肝损伤的氧化应激机制研究

本试验旨在研究黄曲霉毒素B_1(AFB_1)对肉鸡原代肝脏细胞线粒体氧化磷酸化、线粒体膜电位、活性氧(ROS)、细胞凋亡、抗氧化酶及其相关基因表达的影响。选取18~20日龄健康爱拔益加(AA)肉鸡分离的肉鸡原代肝脏细胞(BPHs),分为3个处理组,每个处理组5个重复,试验组分别添加1μmol/L和2μmol/L的AFB_1,对照组添加等量的DMSO。结果表明:随着AFB_1浓度的升高,线粒体Ⅲ和Ⅳ呼吸作用显著增强(P0.05),而线粒体呼吸控制率却显著下降(P0.05);随着AFB_1浓度的升高,线粒体电位下降,并呈现浓度依赖型模式,当AFB_1为2.5μmol/L时BPHs线粒体电位显著下降(P0.05);AFB_1极显著引发了ROS的产生(P0.01);高浓度的AFB_1(2.5μmol/L)处理使得BPHs细胞凋亡率明显上升(P0.05)以及caspase-3、caspase-9表达明显增加(P0.05);AFB_1显著提高了Nrf2的m RNA表达水平(P0.05);与对照组相比,HO-1、SOD的m RNA表达量显著下降(P0.05);高浓度的AFB_1(2.5μmol/L)显著提高了NQO1的m RNA表达水平(P0.05)。以上研究结果显示,AFB_1使线粒体氧化磷酸化过程解偶联,线粒体膜电位下降,ROS大量产生,抗氧化酶活力降低,细胞发生凋亡,抗氧化酶相关基因m RNA表达下降,而Nrf2基因m RNA表达增强。AFB_1导致胞内ROS上升引发氧化应激,可能与Nrf2信号通路有关。     

缺氧条件下巨噬细胞移动抑制因子对肉鸡心肌脂肪酸代谢的影响

旨在探讨缺氧条件下巨噬细胞移动抑制因子(MIF)对肉鸡心肌脂肪酸代谢的影响。取9~12日龄鸡胚,采用胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶联合消化法分离培养心肌细胞,镜下观察细胞形态及活力,并对其进行免疫细胞化学鉴定。以低氧诱导因子1α(HIF-1α)为缺氧指标,化学缺氧模拟剂氯化钴(CoCl_2)处理鸡胚心肌细胞,构建细胞缺氧模型。为了确认MIF与磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)的关系,在缺氧模型上用MIF抑制剂(ISO-1)阻断MIF,观测p-AMPK是否随MIF阻断而变化。利用Western bolt检测脂肪酸代谢关键酶脂肪酸转运酶(FAT/CD36)、磷酸化乙酰辅酶A羧化酶(p-ACC)及肉毒碱棕榈酰转移酶(CPT-1A)是否在缺氧状态下发生变化。结果:经差速培养的鸡心肌细胞纯度达90%以上;镜下观察,细胞呈梭形和不规则形,并可自发节律性搏动,频率80~130次·min~(-1)。Western bolt检测显示,经600μmol·L~(-1) CoCl_2处理心肌细胞24h,HIF-1α表达较正常对照组极显著升高(P0.01);100μmol·L~(-1) ISO-1阻断MIF后,MIF及p-AMPK表达量均明显降低(P0.01)。与正常组相比,缺氧组心肌MIF、p-AMPK、FAT/CD_(36)、p-ACC和CPT-1A表达均极显著升高(P0.01);ISO阻断组心肌各目的蛋白质的表达较缺氧组均极显著下降(P0.01)。缺氧条件下,心肌自分泌MIF增多,通过激活AMPK促进脂肪酸相继进入细胞质和线粒体,加强氧化供能,为缺氧提供代偿性保护。     

外源性添加磷酸二羟基丙酮对小鼠脂肪细胞三酰甘油及关键代谢酶含量的影响

旨在研究磷酸二羟基丙酮对小鼠脂肪细胞三酰甘油及其关键代谢酶的影响。将小鼠3T3-L1前脂细胞诱导成成熟的脂肪细胞,在诱导培养第14天,分别加入含0μmol·L~(-1)(ck组)、20μmol·L~(-1)(试验Ⅰ组)、50μmol·L~(-1)(试验Ⅱ组)、200μmol·L~(-1)(试验Ⅲ组)磷酸二羟基丙酮的完全培养基培养细胞,于0、36、72h收集细胞并进行ELISA及后续检测;利用双抗体夹心法检测三酰甘油(TG)代谢中关键酶含量,如乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、脂肪酸合成酶(FAS)、激素敏感脂肪酶(HSL)等。结果表明:1)在36和72h,试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组合成的TG量极显著高于对照组(ck组)(P0.01);试验各组葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)、二硫辛酰胺转乙酰基酶(DLAT)、二硫辛酸脱氢酶(DLD)和脂肪酸合成酶(FAS)含量均极显著高于对照组(P0.01);2)在36和72h,试验各组激素敏感脂肪酶(HSL)、肉碱脂酰转移酶1(CPT1)和游离脂肪酸(FFA)含量均极显著低于对照组(P0.01)。磷酸二羟基丙酮能够促进小鼠脂肪细胞三酰甘油的合成和沉积;磷酸二羟基丙酮还能极显著提高TG合成代谢中G6PD、DLAT、DLD、FAS的含量;能够极显著降低TG分解代谢中HSL、CPT1的含量。     

鸡传染性喉气管炎病毒适应性细胞的筛选

为了克服鸡传染性喉气管炎弱毒活疫苗产品制备中存在的缺陷,通过对BHK-21细胞、Vero细胞、DF1细胞、原代鸡胚成纤维细胞(CEF)、原代鸡胚肝细胞、原代鸡胚肾细胞等六种细胞进行病毒适应性培养,采用PCR和免疫荧光(IFA)跟踪检测的方法成功筛选出具有稳定病毒滴度的病毒适应性细胞——鸡胚肝细胞。然后采用新的克隆方法缩短了克隆时长并对筛选的鸡胚肝细胞进行克隆纯化,通过与原代鸡胚肝细胞进行比较,结果显示本试验所采用的克隆方法具有高几率的特点,并且能够克隆出高活性的鸡胚肝细胞,并能够繁殖较高效价的鸡传染性喉气管炎病毒,为解决鸡传染性喉气管炎弱毒疫苗在生产上存在的瓶颈问题提供了重要的基础条件。     

罗格列酮对非酯化脂肪酸体外诱导的犊牛原代肝细胞线粒体功能紊乱的影响

本试验旨在探讨非酯化脂肪酸(Nonestesterified fatty acid,NEFAs)对体外原代培养犊牛肝细胞线粒体功能以及罗格列酮对NEFAs诱导的线粒体功能紊乱的影响。体外添加NEFAs(1.8mmol/L)处理犊牛原代肝细胞不同时间,运用Western blot和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测线粒体呼吸链复合体IV(COX IV)蛋白水平及mRNA水平的影响。另外选取细胞,罗格列酮(10nmol/L)预处理细胞24h后添加NEFAs(1.8mmol/L)处理9h。运用Western blot和qRT-PCR方法检测PGC-1α、Mfn-2的蛋白表达水平及COX IV mRNA表达水平。结果显示,随着NEFAs作用时间的增加,与0h组相比,NEFAs处理5h以上时COX IV蛋白表达水平极显著降低(P0.01),处理7~12h时COX IV mRNA表达水平呈显著降低(P0.05)。添加罗格列酮后,罗格列酮可极显著增加COX IV mRNA水平,PGC-1α、Mfn-2蛋白表达水平(P0.01)。结果表明,NEFAs可诱导犊牛原代肝细胞发生线粒体功能紊乱,罗格列酮可缓解由NEFAs诱导的犊牛原代肝细胞线粒体功能紊乱。     

抗菌药物对LPS诱导鸡肝细胞损伤的影响及复方甘草酸单胺的修复效应

旨在探索LPS诱导鸡肝细胞损伤过程中抗菌药物的影响及复方甘草酸单胺(CAG)的修复作用。选用半原位灌流法分离鸡肝细胞,原代培养48h,筛选LPS最佳致肝细胞损伤剂量;固定其最佳致损半量,并添加不同质量浓度的恩诺沙星、氟苯尼考、阿莫西林,观察致损效果;LPS(30μg·mL-1)+恩诺沙星(80μg·mL-1)致损24h,给予不同浓度CAG,检测细胞存活率及ALT、AST、SOD、GSH、MDA活性,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果表明,LPS≤50μg·mL-1,肝细胞损伤不明显,LPS≥60μg·mL-1,肝细胞存活率极显著降低(P0.01),ALT、AST活性极显著升高(P0.01)。LPS(30μg·mL-1)各组随恩诺沙星、氟苯尼考、阿莫西林添加量增加,肝细胞损伤程度相应加大,LPS(30μg·mL-1)+恩诺沙星(80μg·mL-1)、LPS(30μg·mL-1)+氟苯尼考(40μg·mL-1)、LPS(30μg·mL-1)+阿莫西林(60μg·mL-1)可达肝细胞损伤标准。CAG剂量依赖性(25、50、100、200、400μg·mL-1)抑制LPS(30μg·mL-1)+恩诺沙星(80μg·mL-1)引起的ALT、AST、MDA活性和肝细胞早期凋亡比率的升高,提高SOD、GSH及肝细胞存活率。结果提示,LPS可致肝细胞损伤;抗菌药物使LPS更易诱发肝损伤;CAG通过抗氧化,并抑制细胞凋亡对鸡肝细胞发挥保护作用。     

过氧化氢诱导斜带石斑鱼原代肝细胞氧化损伤模型的构建

本试验以斜带石斑鱼原代培养肝细胞为研究对象,以过氧化氢为刺激源,以肝细胞存活率和抗氧化指标的变化为判断指标,旨在建立稳定的斜带石斑鱼原代肝细胞氧化损伤模型。在原代肝细胞培养液中分别添加0(对照)、100、200、400、600、800和1 000μmol/L过氧化氢,使之分别作用2、4、6、8、12和24 h,共42组,每组10个重复,测定肝细胞存活率。在得出适宜过氧化氢作用时间的基础上,使每个浓度的过氧化氢(每个过氧化氢浓度设6个重复)作用于肝细胞适宜时间后,收集肝细胞和培养液测定抗氧化指标,筛选使肝细胞发生氧化损伤的适宜过氧化氢作用浓度。结果显示:800μmol/L过氧化氢作用肝细胞8 h,斜带石斑鱼肝细胞的存活率降低至61.98%;800和1 000μmol/L组与其他各组相比,肝细胞超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶(600μmol/L组除外)和过氧化氢酶活性显著降低(P0.05),丙二醛与脂质过氧化物含量显著升高(P0.05),但800和1 000μmol/L组之间差异不显著(P0.05)。以上结果表明,过氧化氢作用浓度为800μmol/L、作用时间为8 h,可作为建立斜带石斑鱼肝细胞氧化损伤模型的适宜条件。     

黄芩苷对原代大鼠肝细胞CYP3A1的影响

胶原酶二步灌流法获取原代大鼠肝细胞,用不同浓度的黄芩苷处理1~3 d,Western Blot法检测细胞色素P4503A1(CYP3A1)的表达。结果表明,通过胶原酶灌流法,每只大鼠可获得2-4×108个肝细胞,存活率约为95%。低浓度(<10μmol/L)的黄芩苷处理后,肝细胞CYP3A1的表达随黄芩苷浓度的增加和处理时间的延长而呈升高的趋势。高浓度(>10μmol/L)黄芩苷对细胞产生毒性,原代大鼠肝细胞可用于黄芩苷药物代谢的研究,为探讨其他药物的代谢打下了基础。     

油菜素内酯对盐胁迫下黑麦草种子萌发及幼苗生长的生理调控作用

本研究探讨了2, 4-表油菜素内酯(2, 4-epibrassinolide, EBR)对盐胁迫下黑麦草(Lolium perenne)种子萌发及幼苗生长相关生理方面的影响。结果表明,在种子萌发过程中,盐胁迫下外源0.01μmol·L~(-1)的EBR处理,提高了黑麦草种子的发芽率、发芽势、活力指数、株高、鲜重和根系活力,并增强了萌发过程中黑麦草种子的α-淀粉酶活性。在幼苗生长期,盐胁迫下外源0.1μmol·L~(-1)的EBR处理,使得黑麦草幼苗的超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化物酶(peroxidase, POD)、过氧化氢酶(catalase, CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GPX)活性显著提高(P 0.05),而丙二醛(malondialdehyde, MDA)含量显著降低,可溶性糖、可溶性蛋白和叶绿素含量显著升高(P 0.05)。综上所述,外源0.01μmol·L~(-1)的EBR处理可以缓解100和150 mmol·L~(-1) NaCl胁迫对黑麦草种子萌发的抑制效果,外源0.1μmol·L~(-1)的EBR处理可以缓解250 mmol·L~(-1) NaCl胁迫对黑麦草幼苗生长的伤害程度。本研究结果为盐碱地黑麦草的生产和种植提供了一定的理论依据。     

异花柽柳种子萌发对温周期和盐分的响应

以新疆吐鲁番沙漠植物园的异花柽柳(Tamarix gracilis)为研究材料,设置4个温周期、10个NaCl溶液浓度梯度,在实验室条件下研究了温周期和盐分对异花柽柳种子萌发的影响。结果显示,1)异花柽柳种子在5℃/15℃、10℃/20℃、15℃/25℃、20℃/30℃温周期下均快速萌发,温度越高,萌发速度越快。2)异花柽柳种子在低于0.4mol·L~(-1)的NaCl溶液处理下萌发率均高,且处理之间无显著差异(P0.05);而高于0.6mol·L~(-1)的处理则显著抑制种子的萌发(P0.05),且NaCl溶液的浓度越高,最终萌发率越低,大于1.6 mol·L~(-1)的溶液处理中未见种子萌发。3)异花柽柳种子在解除盐分胁迫后恢复萌发率低。0.6~1.2 mol·L~(-1)的NaCl溶液处理下未萌发的种子恢复萌发率在2.1%~34.5%,大于1.2mol·L~(-1)的NaCl溶液处理后种子未见萌发,表明1.2 mol·L~(-1) NaCl为异花柽柳种子的最大耐盐浓度。综上,异花柽柳种子适宜萌发的温周期范围宽,种子萌发耐盐能力属于中耐盐性,耐盐机制为耐盐型。     

内毒素及NO抑制剂对体外培养山羊肝细胞增殖的影响

为了研究内毒素(LPS)和NO酶抑制剂(NOSI)[氨基胍(AG)、左旋硝基精氨酸(L-NNA)、NG-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)]对肝细胞增殖的影响,试验通过体外培养山羊肝细胞,应用LPS结合NO酶抑制剂对细胞进行处理观察细胞增殖的变化。结果表明:当LPS1μg/m L时抑制体外肝细胞的增殖,且随着剂量的增加差异显著(P0.05),说明大剂量的LPS能抑制肝细胞的增殖。应用NOSI(AG,L-NNA,L-NAME)结合1μg/m L LPS处理肝细胞,则发现AG(1 mmol/L)+LPS试验组与LPS对照组肝细胞的增殖差异显著(P0.05);LPS+L-NAME(1 mmol/L)处理的d组显著高于LPS对照组,差异显著(P0.05),使吸光度达到最高水平;LPS+L-NNA(1 mmol/L)处理的γ组、δ组与LPS对照组相比差异显著(P0.05)。说明随着NOSI(AG,L-NNA,L-NAME)浓度的增加,NOSI可以颉颃LPS对肝细胞增殖的抑制,使肝细胞的增殖水平在一定程度上恢复到正常。     

维生素C对肉鸡缺氧肺动脉平滑肌细胞缺氧诱导因子-1α转录水平的影响

旨在体外培养肉鸡肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)的基础上利用氯化钴(CoCl2)建立细胞缺氧模型,探讨维生素C(VC)对缺氧肉鸡PASMCs中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)及其下游靶基因血管内皮生长因子(VEGF)及血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)mRNA转录的影响。选用21d健康AA肉公鸡,分离、培养并鉴定PASMCs,利用CoCl2建立细胞缺氧模型,再用7个浓度的VC(0、50、100、200、500、1 000和1 500μmol·L-1),5个培养时间(6、12、24、48和72h)处理,试验共设35个处理,每个处理6个重复。结果表明,利用组织块法可成功培养出肉鸡PASMCs;与对照组相比,不同浓度CoCl2均可使细胞缺氧基因(HIF-1α、VEGF、VEGFR2)转录量显著增加(P0.05),促进细胞增殖,250μmol·L-1 CoCl2处理48h可成功建立肉鸡PASMCs缺氧模型;500或1 000μmol·L-1VC处理48或72h可显著降低缺氧PASMCs中HIF-1α、VEGFR2mRNA的转录(P0.05),而1 500μmol·L-1VC则显著增加缺氧PASMCs中HIF-1α、VEGF、VEGFR2mRNA的转录(P0.05)。结果提示,缺氧会导致肉鸡肺动脉平滑肌细胞缺氧基因表达量与细胞增殖增加,而VC能降低细胞对缺氧信号的敏感性,使缺氧基因的相对表达量降低。     

维生素C对铜孵育的肉鸡原代肝细胞周期及细胞膜电位的影响

为了研究维生素C对铜孵育的肉鸡原代肝细胞周期及细胞膜电位的影响,试验将全量换液24 h后的原代肝细胞分为正常对照组(Ⅰ组)和10μmol/L Cu2+(Ⅱ组)、30μmol/L Cu2+(Ⅲ组)、50μmol/L Cu2+(Ⅳ组)、50μmol/L维生素C+50μmol/L Cu2+(Ⅴ组)刺激组,于体外刺激后48小时用流式细胞仪测定各组的细胞周期及细胞膜电位。结果表明:30μmol/L和50μmol/L Cu2+能明显引起静止期肝细胞数增多,增殖期肝细胞数减少,细胞膜电位下降(P<0.05),10μmol/L Cu2+组没有出现明显变化。说明维生素C可显著抑制50μmol/L Cu2+引起的变化,对细胞具有保护作用。     

蛋氨酸对HepG2细胞和鸭原代肝细胞生长和脂质代谢的影响

本研究旨在研究蛋氨酸（Met）对HepG2细胞和鸭原代肝细胞生长及脂质代谢的影响。设置2个体外肝细胞试验,分别以HepG2细胞和鸭原代肝细胞为研究对象,研究不同浓度Met培养基对HepG2细胞和鸭原代肝细胞的存活率、脂质沉积及其相关基因和蛋白表达的影响。结果表明：1）培养基中Met浓度为0μmol/L时HepG2细胞存活率显著低于其他Met浓度（P<0.05）,培养基中Met浓度为0、6.25、12.5和25μmol/L时鸭原代肝细胞存活率显著低于显著100和200μmol/L时（P<0.05）,随着培养基Met浓度增加,25μmol/L Met时HepG2细胞存活率达到平台,100μmol/L Met时鸭原代肝细胞存活率达到平台。2）与200μmol/L Met组相比,0、25μmol/L Met组脂滴数量明显增加,单位细胞数目油红O的吸光度显著增加（P<0.05）,且0、25μmol/L组之间无显著差异（P>0.05）。3）与200μmol/L Met组相比,0、25μmol/L Met组HepG2细胞中链酰基辅酶A脱氢酶（ACADM）、二氢硫辛酸脱氢酶（D...     

伏马毒素B_1对人脐静脉血管内皮细胞的毒性作用研究

为探究伏马毒素B_1(FB_1)对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)的毒性及作用机制,采用不同质量浓度的FB_1处理HUVEC,通过CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞周期,荧光显微镜观察细胞氧化应激,流式细胞术检测线粒体膜电位变化,Hoechst33342染色检测细胞凋亡,荧光定量PCR检测细胞凋亡相关基因的转录情况。结果显示:FB_1处理组在低质量浓度(2.5、5μg·mL~(-1))短时间(6、12h)处理后细胞活力变化不显著,超过此剂量和时间细胞活力显著降低(P0.05或P0.01),且质量浓度为10、20μg·mL~(-1) FB_1处理组活性氧(ROS)的荧光信号增强;FB_1处理组细胞周期由G_0/G_1期向S期转换时阻滞,细胞线粒体膜电位降低,细胞凋亡相关基因Caspase-3转录升高,Bcl-2转录显著降低(P0.05),Caspase-9和Bax转录极显著升高(P0.01)。结果表明,FB_1对人脐静脉血管内皮细胞有毒性作用,能抑制细胞增殖,使细胞周期阻滞在G0/G1期;能通过线粒体途径诱导HUVEC凋亡。研究结果为深入研究FB_1对人类细胞的毒性作用机制及相关疾病治疗奠定基础。