新城疫病毒La Sota株和鸡传染性支气管炎病毒M41株低免疫鸡胚同胚培养研究

为研究新城疫病毒(NDV)La Sota株和鸡传染性支气管炎病毒(IBV)M41株在低免疫鸡胚中进行同胚接种培养的可行性,通过将不同稀释倍数的La Sota株和M41株接种同一低免疫鸡胚,分别测定收获尿囊液La Sota株和M41株含量,确定最佳的稀释倍数以及适宜的培养温度和培养时间。结果显示:La Sota株和M41株以10 000∶5 000的比例稀释,培养96 h病毒含量和收获量最佳,La Sota株含量可达到109.17EID50/0.1 m L,HA效价为1∶1 024,M41株含量可达到106.50EID50/0.1 m L。接种后孵育温度为36.5℃时,每胚收获量比37℃培养增加了1.0～1.2 m L。按照此工艺生产病毒制备疫苗免疫SPF鸡,NDV和IBV抗体均符合国家标准要求。试验探索并优化了La Sota株和M41株在低免疫鸡胚中同胚接种的培养条件,为大规模抗原生产提供数据支持。     

ND La Sota毒种在SPF鸡胚中增殖规律初探

为了探索ND La Sota弱毒株在SPF鸡胚中的增殖规律,保证生产用种毒的质量,我们采用不同的时间段来收获ND La Sota弱毒株感染的胚液,然后测定胚液的EID50。结果发现,SP鸡胚在接种病毒后85~100h之间出现死亡高峰期,经病毒含量测定,该时段感染胚液比其他时间死亡的感染胚液病毒含量高出1.5~6倍以上,表明ND La Sota弱毒株的增殖高峰与SPF鸡胚接种后的死亡时间有重要关系。     

M蛋白携带TC标签的重组新城疫病毒的构建及生物学特性鉴定

基质蛋白(M)是新城疫病毒(NDV)重要的结构蛋白。为监测NDV感染后M蛋白在细胞中的动态分布,本研究利用反向遗传操作技术,在NDV La Sota株全长c DNA中M基因编码区的C端插入由18个核苷酸编码的TC (Tetracysteine)标签,转染细胞经筛选获得携带TC标签的重组病毒La Sota-M-CTC。生长曲线测定结果显示,La Sota-M-CTC能够在鸡胚中有效复制,其生长曲线与亲本病毒La Sota相似。通过接种鸡胚测定鸡胚平均死亡时间检测La Sota-M-CTC的毒力。结果显示,La Sota-M-CTC的毒力与La Sota基本一致。此外,TC标签能够在重组病毒中稳定存在。将La Sota-M-CTC感染的细胞用双砷绿色染料FlAsH-EDT2染色后经激光共聚焦检测M蛋白在细胞中的分布。结果显示,在La Sota-M-CTC感染细胞后1 h～2 h时,M蛋白主要分布于细胞质中,而在病毒感染4 h后M蛋白进入细胞核中,并持续存在至病毒感染后的12 h。本研究为监测M蛋白在NDV感染过程中的动态分布以及阐明M蛋白在NDV感染中的作用机制提供了实验依据。     

新城疫病毒SXFP株的分离鉴定及油乳剂灭活苗免疫效果评价

从陕西富平某种鸡场发病鸡群中分离出了1株流行毒株,经HA-HI试验和动物回归试验,确定分离到的为NDV,命名为SXFP株.经过测定,SXFP株鸡胚半数致死量(ELD50)为109.0/0.1 mL;鸡胚最小致死量的平均致死时间(MDT)为52.3h;对1日龄SPF雏鸡脑内致病指数(ICPI)为1.92,提示SXFP株为强毒力株.血清交叉反应试验显示,SXFP株和La Sota株存在小的抗原性差异.用SXFP株油乳剂灭活苗对SXFP株和La Sota株的保护率分别为90%和100%,明显优于La Sota株油乳剂灭活苗的60%和70%.提示SXFP株制备的疫苗对流行毒株和经典毒株均能很好地保护.     

一株鸡新城疫病毒的分离鉴定及其油乳剂灭活苗免疫效果评价

从河南某种鸡场发病鸡群中分离出1株毒株,经HA、HI和动物回归试验,确定分离的病毒为NDV,命名为HNYD株。经过测定,HNYD株鸡胚半数致死量（ELD50）为10^90/0．1mL;鸡胚最小致死量的平均致死时间（MDT）为53．8h;对1日龄SPF雏鸡脑内致病指数（ICPI）为1．86,提示HNYD株为强毒力株。血清交叉反应试验显示HNYD株和La Sota株存在一定的抗原性差异。用HNYD株油乳剂灭活苗对HNYD株和La Sota株的保护率分别为90％和100％,明显优于La Sota株油乳剂灭活苗,提示HNYD株制备的疫苗对流行毒株和经典毒株的攻击均能很好的保护。     

鸡新城疫病毒的分离鉴定与交叉免疫保护试验

为了评价疫苗免疫保护效果,进而筛选出最佳的免疫方案,将分离到的鸡新城疫病毒(Newcas-tle disease virus,NDV)流行毒株制备成灭活疫苗进行交叉免疫保护试验研究。把采集到的疑似发生新城疫的病鸡肺、气管环等组织经处理后接种10日龄SPF鸡胚进行病毒的分离和增殖,并用血清学和分子生物学方法进行毒株的鉴定;用分离到的NDV/Chicken/TC/1/2011毒株制成油乳剂灭活苗,与La Sota疫苗以不同的疫苗组合免疫SPF鸡,进行交叉免疫保护试验。结果显示,共分离到9株新城疫病毒,其F蛋白裂解位点的氨基酸均为112 R-R-Q-K-R-F117,表现为强毒株的分子特征,与致病指数结果一致。分离株灭活苗组和分离株灭活苗+La Sota弱毒苗对试验鸡的免疫保护力最高,其次是La Sota灭活苗+La Sota弱毒苗和LaSota灭活苗,La Sota弱毒苗对试验鸡的免疫保护力最低。NDV分离株与疫苗株La Sota存在明显抗原性差异,这将对新城疫疫苗的发展和疾病控制策略制定至关重要。     

表达牛乳铁蛋白肽的重组鸡源乳酸杆菌抗IBDV感染的研究

为探究表达牛乳铁蛋白肽的重组鸡源乳酸杆菌pPG-XLFEC/M11对雏鸡抵抗传染性法氏囊病病毒(IBDV)感染的作用,本研究利用IBDVCEF94株感染DF-1细胞,通过CCK-8法检测病毒感染后的细胞活性,利用qRT-PCR检测病毒载量,结果显示重组乳酸菌表达的牛乳铁蛋白肽可以抑制IBDV在DF-1细胞内的增殖;以重组乳酸菌pPG-XLFEC/M11饲喂雏鸡,利用IBDV强毒UK661株进行攻毒实验,结果显示饲喂重组菌的雏鸡相比于对照组,IBDV的感染对其组织器官的损伤较小,总免疫球蛋白IgG和SIgA含量增加,细胞因子IL-6、IL-8、TNF-琢和IFN-酌以及TLR2的mRNA转录水平均显著升高,且提高了雏鸡的存活率。本实验结果表明,重组鸡源乳酸杆菌表达的牛乳铁蛋白肽可以增强机体的免疫应答水平,对雏鸡具有一定的抗IBDV感染的作用。本研究为表达牛乳铁蛋白肽的重组鸡源乳酸杆菌在生产中的应用以及为禽类疾病的预防奠定基础。     

传染性法氏囊病病毒感染对鸡细胞模式识别受体及抗病毒基因转录的影响

为研究传染性法氏囊病病毒(IBDV)感染对鸡细胞模式识别受体(PRRs)及天然免疫抗病毒基因转录的影响,本实验分别采用IBDV弱毒感染DT40细胞和强毒感染SPF鸡,以荧光定量RT-PCR(q RT-PCR)检测感染细胞和法氏囊组织中PRRs(TLR2、TLR3、TLR4、TLR7、MDA5和LGP2)及天然免疫抗病毒基因(IPS-1、IRF3、PKR、OAS、Mx)的m RNA转录变化。在IBDV感染DT40细胞的2 h到24 h内,ch MDA5、ch TLR3、ch LGP2、IRF3、PKR、OAS、Mx的转录水平显著上升,分别为324、22、61、29、16、225 000和18 700倍。当采用si RNA分别敲除DT40细胞中ch MDA5、ch TLR3和ch LGP2时,IPS-1、IRF3、PKR、OAS和Mx在IBDV感染后的2 h到24 h差异变化不显著。在IBDV感染SPF鸡法氏囊组织细胞中,ch MDA5和ch TLR3的表达显著降低,而ch LGP2表达无显著差异,IRF3、PKR、OAS和Mx的转录水平显著上升。TLR4和TLR7在IBDV的体外和体内感染试验中均未检测到,而IPS-1在IBDV的体外和体内感染试验中均变化不显著。本实验结果表明,ch MDA5、ch TLR3和ch LGP2在识别IBDV的感染中起着关键作用,IBDV感染严重抑制了PRRS ch MDA5和ch TLR3的转录,并且提示其抑制作用在体内与体外可能存在不同的分子机制。     

新城疫病毒感染鸡胚成纤维细胞中免疫相关细胞因子表达的检测

分别采用新城疫强毒株F48E9与新城疫弱毒株La Sota感染10日龄鸡胚制作的鸡胚成纤维细胞,感染后24 h提取鸡胚成纤维细胞的总RNA,通过RT-PCR技术结合凝胶成像系统扫描检测21种免疫相关细胞因子在鸡胚成纤维细胞中的表达量.实验结果表明,在鸡胚成纤维细胞中,无论是否感染新城疫病毒,IL-2、IL-3、IL-4、IL-21不能检测到其相应条带.通过统计学分析,IFN-β、IFN-γ、IL-9、IL-12-P35、IL-12-P40在病毒感染组与对照组间呈现出显著的差异,而强毒感染组与弱毒感染组的比较中,仅IFNγ、IL-9表现出显著差异.     

抗新城疫病毒糖蛋白单克隆抗体的研制及在免疫组化中的应用

应用纯化的新城疫病毒(NDV)La Sota野毒株免疫Balb/c小鼠,最后一次免疫后3 d取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经间接ELISA筛选到3株分泌抗NDV单克隆抗体的杂交瘤细胞株,对各株单克隆抗体免疫球蛋白亚类及ELISA效价进行测定.结合单克隆抗体反应结果,鉴定出抗NDV NP蛋白的单克隆抗体,利用该单克隆抗体s3e1做免疫组化试验,用rLa Sota(重组La Sota第2代毒株)免疫2日龄雏鸡,接种后第5天检测到肝脏的部分肝细胞呈阳性反应.     

Transmission of swine pathogens: different means, different needs

There seems to be two main types of pathogens that cause diseases in swine: those that are mainly introduced through direct pig contacts, and those that are often, and in some situations mainly introduced by indirect transmission means. In this review, the mange mite (Sarcoptes scabiei), toxigenic Pasteurella multocida and Brachyspira hyodysenteriae will be used as examples of the first type, and foot and mouth disease virus, Mycoplasma hyopneumoniae and porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) virus as examples of the second. It is now clear from various epidemiological studies as well as experimental and field data that aerosol transmission of some swine pathogens plays an important role in their epidemiology. As previous biosecurity programs did not take this factor into consideration, it can at least partially explain why many of these programs suffered frequent failures and why air filtration is now becoming increasingly popular in North America. Identifying and quantifying transmission means should be a priority for every important infectious disease for which it has not been done.     

不同紫花苜蓿品种在不同生育期营养品质特性的比较

采用随机区组设计,以20个紫花苜蓿品种作为研究对象,对头茬草在现蕾期、初花期、盛花期取样,分别测定了各生育期的粗蛋白、酸性洗涤纤维、中性洗涤纤维、粗脂肪、粗灰分含量。结果表明:同一紫花苜蓿材料的营养成分含量在不同生育期差异显著(P0.05),在现蕾期、初花期、盛花期等不同生育期,粗蛋白含量最高的品种分别为:北极星(22.06%),哥萨克(18.81%),陇东苜蓿(16.41%);酸性洗涤纤维含量最低的品种分别为:甘农1号(22.18%),陇中苜蓿(31.16%),苜蓿王(36.97%);各生育期中性洗涤纤维含量最低的品种分别为:甘农7号(27.59%),苜蓿王(38.10%),苜蓿王(44.35%);粗灰分含量最低的品种分别为:陇东苜蓿(9.40%),皇后(9.00%),甘农8号(6.02%);粗脂肪含量最高的品种分别为:中苜1号(2.91%),哥萨克(2.78%),甘农7号(3.04%)。粗蛋白含量和粗灰分含量随着生育期的推进明显下降;中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维含量随着生育期的推进呈明显上升趋势;粗脂肪含量随着生育期的推进出现小幅上升。苜蓿王各营养指标在不同的生育期表现最好,在武威地区的黄羊镇有较高的推广利用价值。     

饲料厂中的虫害

饲料加工厂的内部会孳生虫害,因为饲料厂内存在着促使虫害发生的条件.在冬季,饲料加工厂可为害虫提供暖和的环境、食物(尤其是生的和加工过的谷物)和水.这些仓储害虫可对饲料的安全性和质量带来多重危害.饲料厂要有效地执行"危害分析与关键控制点方案(HACCP)",那么虫害管理是一个必不可少的先决条件.鉴别出厂内害虫种类和数量,是制订虫害管理方案的首要步骤.     

不同发酵剂对不同配比精料发酵的研究

本试验采取奶牛体外精料发酵,通过不同发酵剂在不同温度下对不同配比精料及玉米面发酵的研究,筛选出了简便、可行、成本低、能提高饲料乙酸的好方法,为生产实践提供了理论依据。试验综合评价以自然酵母发酵最好,3号料发酵效果最佳。     

施氮对紫花苜蓿生长特性的影响

通过随机区组试验,研究了不施氮(N0)、施氮51.75kg/hm2(N1)和103.5kg/hm2(N2)3个氮水平对"甘农3号"紫花苜蓿生长第1年及第2年产量和再生性能的影响。结果表明:"甘农3号"紫花苜蓿生长第2年产量显著高于第1年,在N2处理下两年干草产量均最高,第1年为14 717kg/hm2,第2年为31 092kg/hm2;从株高和再生速度看,两年均以处理N2下紫花苜蓿的再生性能最强,并且第2年的明显优于第1年。综上,试验区"甘农3号"紫花苜蓿在N2处理下再生性能最好,株高和产量达最高,且两年均能进行4次刈割。     

不同体况绵羊同期发情处理试验研究

通过两年三批次不同体况绵羊不同药物同期发情处理试验,分别对CIDR栓＋PG、CIDR栓＋PMSG、PG三种处理的发情率和发情时间进行比较分析,试验表明绵羊营养状况对不同药物同期发情处理均有较大影响,在营养较好条件下三种处理均可取得较好的同期发情效果,营养不良三种处理同期发情效果均变差,在相同条件下以CIDR栓为主的处理较PG处理发情率较高,且发情快而集中。综合考虑发情率和处理成本,在处理羊营养状况中等以上PG处理具有成本低操作简单的明显优势。     

不同季节对爱犬的护理侧重

<正>气候能通过直接或间接的作用而影响犬的生长、繁殖和精神等。直接作用是影响犬的体温调节机能,出现热应激或冷应激;间接作用是通过植物性饲料的生长、化学组成、季节性供应以及各种季节性疾病的发生和传播,     

不同方式处理稻草和不同日粮组成育肥黄牛的饲养效果

试验用15头贵州当地黄牛，进行了3种不同方式处理稻草日粮的交叉饲养试验。通过90d试验，结果表明：日粮2育肥效果明显优于日粮l和日粮3，黄牛的平均日增重分别为l033，798，5938，P＜0．01；饲料(干质量)报酬分别为4．54：1，7．08：1和6．03：1。从而认为，用发酵稻草与适当的精料补充料配合育肥黄牛可以得到良好的生产效果。     

不同生长时期沙打旺不同部位及其植株的化感作用研究

研究了营养生长期、花果期、成熟期沙打旺(3年生)不同部位及其植株的化感作用.结果显示,1)不同生长时期沙打旺各个部位(如根、茎、叶)及其植株的水提液(1:60 g/mL,下同)均对受体萝卜的幼苗生长显示化感活性.表明沙打旺释放化感物质可能有多种途径(如地上部淋溶、根系分泌等).2)各个生长时期沙打旺的不同部位及其植株的水提液通常对受体植物的幼苗生长显示化感抑制作用,而且以叶的抑制作用最为显著.表明叶片是整个生长周期内集中表现沙打旺化感作用的特定部位.3)沙打旺的单一部位(地下部除外)及其完整植株的水提液在花果期的化感作用较成熟期强烈,而成熟期的化感作用强度又较营养生长期为高.表明花果期可能是沙打旺表达化感作用的关键时期.本研究对农业生产实践中沙打旺草地的管理与应用具有积极意义.