复方苦芩多糖对细小病毒病犬外周血IL-4及IFN-γ表达的影响

为了探讨复方苦芩总多糖(KQPC)对细小病毒病犬的免疫功能的影响,将KQPC制成针剂,犬细小病毒攻毒;将健康犬随机分成空白组、阳性组、攻毒组、复方苦芩组及3种浓度的KQPC组;给药7 d后攻毒,ELISA法检测外周血IL-4、IFN-γ含量,分离外周血淋巴细胞提取总RNA,RT-PCR法测定IL-4、IFN-γ表达水平。结果与攻毒组相比,复方苦芩、KQPC均能降低IL-4含量及其mRNA表达,提高IFN-γ含量及其mRNA表达(P<0.01)。表明KQPC能调节细小病毒病犬免疫功能,可能是复方苦芩的主要作用成分之一。     

猪瘟疫苗免疫失败母猪T淋巴细胞亚群及细胞因子研究

检测猪瘟疫苗免疫失败母猪血液中的CD4+、CD8+T细胞及IL-4、IFN-γ细胞因子,探讨猪瘟疫苗免疫失败的机制。随机采集规模化猪场猪瘟疫苗免疫后的母猪血液样品,用ELISA检测猪瘟抗体水平,挑选出猪瘟抗体阴性的母猪,以猪瘟抗体阳性母猪作为对照,采用ELISA、流式细胞术等方法检测分析血液中T淋巴细胞亚群及IFN-γ和IL-4。结果表明,母猪猪瘟疫苗免疫后,该场的猪瘟抗体阳性率刚能达到标准,仍有26%的猪群免疫失败。猪瘟抗体阴性组中CD4+T细胞百分数显著低于猪瘟抗体阳性组,CD3+、CD8+细胞百分数、CD4+/CD8+以及IL-4、IFN-γ浓度在阴性和阳性组中各指标差异不显著,证实母猪CD4+细胞百分数较低可能是导致猪瘟疫苗免疫失败的原因之一,为改善猪瘟疫苗免疫效果提供指导思路。     

黄芪多糖对PCV2阳性猪外周血免疫细胞及相关细胞因子的影响

检测外周血T淋巴细胞、嗜中性粒细胞、CD4+、CD8+细胞百分数及IL-2、IL-4和IFN-γ含量的变化,研究黄芪多糖(APS)对PCV2阳性猪免疫功能的调节作用。结果显示,APS能显著增加外周血T淋巴细胞、NBT阳性细胞、CD4+T细胞百分数及IL-2、IL-4、IFN-γ含量,显著降低CD8+T细胞百分数,推测APS通过上调CD4+细胞百分数、CD4+/CD8+及Th1反应恢复正常免疫机能。     

复方苦芩有效成分对犬细小病毒病病犬小肠组织细胞凋亡及基因表达的影响

为探讨复方苦芩3种有效活性成分对人工感染肠炎型犬细小病毒病(canine parvovirus disease,CPVD)病犬小肠组织的保护作用,将50只试验犬随机分为复方苦芩总多糖组、复方苦芩总生物碱组、复方苦芩总黄酮组、空白对照组和模型组。其中,试验药物组均按1.5 mL/kg肌肉注射复方苦芩3种有效成分,2次/d,连续用药7 d后灌服2 mL(5×10~5 PFU/mL)的病毒液进行人工复制病理模型,空白组肌注射生理盐水,模型组只攻毒不给药。接种病毒后经检测为阳性后3天在无菌条件下取各组犬只小肠组织,用TUNEL法检测各组小肠组织细胞的凋亡率,同时采用荧光定量PCR对各试验组小肠组织Bax和Bcl-2 mRNA转录进行相对定量检测,并运用Western blot方法检测Bcl-2和Bax蛋白表达量。结果显示,通过组织切片观察,复方苦芩3种有效活性成分可防止病毒对犬小肠细胞形态的病理作用,可降低细胞凋亡率,并且3种有效成分对小肠组织可增高小肠组织Bcl-2/Bax基因和蛋白表达量,从而减少因病毒所引起的细胞凋亡;结果表明,复方苦芩3种有效成分对CPVD病犬小肠组织均有一定的保护作用,其中复方苦芩总生物碱对CPVD病犬小肠组织细胞凋亡的预防效果最显著。     

复方苦芩对犬细小病毒致肠黏膜细胞凋亡及相关基因表达的影响

将犬分为空白对照组、模型组、复方苦芩预防组、复方苦芩治疗组,用犬细小病毒接种建立动物模型,复方苦芩防治犬细小病毒病,然后取样,光学显微镜和电子显微镜观察十二指肠黏膜细胞的病变和细胞凋亡,逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）法检测Bcl-2和Bax基因的mRNA表达。结果显示,与空白对照组比较,模型组犬十二指肠黏膜病变及炎细胞浸润,电镜下可见细胞收缩,核浓缩,深染,线粒体肿胀空化,细胞Bcl-2基因表达下调,Bax基因表达增加。与模型组相比,复方苦芩防治组肠黏膜病变轻,超微结构变化不明显,细胞Bax基因表达下调,Bcl-2基因表达上调。结果表明,复方苦芩可能是通过促进黏膜上皮细胞的增殖与恢复,调节Bcl-2,Bax基因表达,抑制犬细小病毒引起的十二指肠黏膜超微结构改变和细胞凋亡,而对细小病毒病犬的十二指肠组织结构起保护和促进恢复作用。     

禽呼肠病毒感染对SPF鸡外周血T细胞亚型变化和细胞因子转录的影响

为探讨禽呼肠病毒(ARV)对SPF鸡外周血淋巴细胞中CD4+、CD8+T细胞数量变化和细胞因子mRNA转录水平的影响,利用流式细胞术和实时荧光定量PCR方法分别测定了ARV感染后1、7、14、21、28、35d感染组和对照组SPF鸡外周血淋巴细胞中CD4+、CD8+T细胞含量和细胞因子IL-1β、IL-6、IL-17、IL-18、IFN-γ、TNF-α基因mRNA相对转录时相。流式细胞术检测结果表明,SPF鸡感染ARV后7d和14dCD4+、CD8+T细胞比值高于对照组,其中感染7d,CD8+T细胞含量差异显著(P0.05);感染后1、21、28、35d感染组CD4+、CD8+T细胞比值均低于对照组,感染1d后CD4+、CD8+T细胞含量均差异显著(P0.05),说明外周血T细胞亚型变化是ARV感染的重要表现之一。实时荧光定量PCR结果表明,与对照组相比,感染组外周血淋巴细胞中IL-1β、IL-6(除7d外)、IL-18(除14d外)和TNF-α在整个感染过程中表达上调,IL-17和IFN-γ除感染1d外,均表达下调,说明IL-1β、IL-6、IL-17、IL-18、IFN-γ和TNF-α均参与了ARV的感染进程。     

蛋氨酸缺乏对雏鸡盲肠扁桃体T淋巴细胞亚群和细胞因子的影响

为了研究蛋氨酸缺乏对雏鸡盲肠扁桃体T淋巴细胞亚群和细胞因子的影响,试验选取100只1日龄健康Cobb(科宝)雏鸡分为对照组和蛋氨酸缺乏组,分别采食对照日粮和蛋氨酸缺乏日粮,试验期为42 d,分别于14、28和42日龄对雏鸡进行剖检,取盲肠扁桃体样品进行酶联免疫吸附试验(ELISA)和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测T淋巴细胞亚群和细胞因子。结果表明:与对照组相比,蛋氨酸缺乏组中盲肠扁桃体CD3+、CD3++CD4+、CD3++CD8+以及CD4+/CD8+比例均显著或极显著降低(P0.05或P0.01)。细胞因子白介素2(IL-2)、IL-6、IL-10、IL-17、IFN-γ、TNF-α(LITAF)的含量及mRNA表达水平也呈现不同程度的下降(P0.05或P0.01)。说明蛋氨酸缺乏会导致盲肠扁桃体T淋巴细胞亚群和细胞因子下降,进而影响雏鸡的特异性免疫功能。     

苏木乙酸乙酯提取物对溃疡性结肠炎大鼠T细胞亚群和IL-6的影响

试验旨在观察苏木乙酸乙酯提取物对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)大鼠T细胞亚群和IL-6的影响。将40只Wistar大鼠随机分成正常组、模型组、苏木组、柳氮磺胺吡啶(SASP)组,除正常对照组外,其余各组大鼠用兔黏膜免疫法造模。造模后各组分别以生理盐水、苏木乙酸乙酯提取物、SASP灌胃给药21 d。运用流式细胞术及ELISA法检测外周血T细胞亚群和IL-6的表达。结果显示,模型组CD4+T细胞升高、CD4+/CD8+升高、IL-6的含量明显增高,与正常组相比,差异显著(P0.05);苏木组、SASP组CD4+T细胞降低、CD4+/CD8+降低、IL-6的含量明显降低,与模型组相比,差异显著(P0.05);苏木组与SASP组相比,差异不显著(P0.05)。试验结果证明,苏木乙酸乙酯提取物通过调整T细胞亚群和降低IL-6含量,发挥对UC大鼠的治疗作用。     

枸杞多糖和茯苓多糖对免疫抑制小鼠免疫增强及对肠道黏膜的免疫调节作用

研究比较枸杞多糖和茯苓多糖对免疫抑制小鼠的系统免疫功能的影响及2种多糖对肠道黏膜免疫系统的调节作用,通过腹腔注射环磷酰胺建立小鼠免疫抑制模型,观察小鼠脾脏器官指数变化、腹腔巨噬细胞吞噬功能、流式细胞术检测小鼠脾脏T细胞亚群CD4+/CD8+比例及肠派氏结CD3+、CD19+细胞比例、ELISA检测血清及小肠组织中IL-12、IL-4、IFN-γ细胞因子水平变化评价2种多糖对免疫抑制小鼠免疫功能及肠道黏膜的影响。结果显示,2种多糖可提高免疫抑制小鼠脾脏指数,增强腹腔巨噬细胞吞噬功能,影响免疫抑制小鼠CD4+/CD8+细胞亚群比例及肠派氏结T、B淋巴细胞比例和细胞因子水平。结果表明,枸杞和茯苓多糖均对免疫抑制小鼠具有免疫增强作用,茯苓多糖的免疫调节效应显著优于枸杞多糖,且2种多糖均对肠道黏膜免疫系统具有调节作用。     

糖萜素对小鼠细胞和体液免疫功能的影响

以NIH小鼠为对象,探讨糖萜素对小鼠特异性免疫功能的影响。结果显示:糖萜素饲养组小鼠T细胞增殖作用显著大于对照组(P<0.05);血清IFN-γ和IL-2水平显著高于对照组(P<0.05);脾细胞培养上清IFN-γ水平较对照组显著升高(P<0.05)。此外,糖萜素饲养组小鼠产生的抗体效价及CD4+、CD8+T细胞亚群百分比显著高于对照组(P<0.05)。本研究表明糖萜素能促进小鼠细胞和体液免疫功能。     

两种转移因子对犬外周血T细胞亚群的影响

按标准方法分别提取制备了猪和犬的转移因子，选择杂种牧羊犬为试验犬，用流式细胞术检测了试验犬注射猪、犬转移因子前和注射后不同时间T细胞亚群的变化情况。结果表明，同种、异种转移因子均可提高试验犬外周血淋巴细胞数量；CD4/CD8比值变化分析结果证明，外周血增加的淋巴细胞主要为CD4+ T细胞；试验犬注射同种、异种转移因子后20 d内，CD4+ T细胞持续增加；同种转移因子促进试验犬外周血CD4+ T细胞上升的作用强于异种转移因子。     

干扰素α对小鼠Tfh细胞分化的调控作用

通过体外试验观察干扰素-α(IFN-α)对滤泡辅助性T细胞(Tfh)分化及功能的影响。无菌分离小鼠脾细胞,磁珠分选CD4^+T细胞,加入抗CD3单克隆抗体、抗CD28单克隆抗体,重组IL-21、IL-6进行刺激,同时加入重组IFN-α(设不加IFN-α的阴性对照)进行培养,分别在培养后的1、3、5d,流式细胞术检测Tfh细胞(CD4^+CXCR5^+)和CD4^+CXCR5^+PD-1^+细胞的比例;ELISA检测细胞上清中Tfh细胞功能性细胞因子IL-4、IL-21的水平;real-time PCR检测培养3d后Tfh细胞相关转录因子STAT1、Bcl-6以及细胞因子IL-21mRNA的表达水平。结果表明,与阴性组相比,IFN-α能明显促进Tfh细胞的分化及Tfh细胞中PD-1的表达(P<0.05),能提高Tfh细胞功能性细胞因子IL-4、IL-21的分泌水平(P<0.05);IFN-α能正向调控Tfh细胞相关转录因子STAT1、Bcl-6以及细胞因子IL-21mRNA的表达水平(P<0.05)。说明IFN-α可通过正向调控STAT1、Bcl-6的表达,促进Tfh细胞的分化和细胞因子的分泌。     

寄生虫免疫中的免疫细胞和细胞因子

从目前研究来看,寄生虫免疫着重由免疫效应细胞和细胞因子承但[1].参与的免疫效应细胞有T细胞、巨噬细胞、嗜酸性粒细胞、肥大细胞和杯状细胞,其中,T细胞作用最突出.它的2个亚群CD8+、CD4+分别发挥了不同的作用:CD8+发挥细胞毒性作用,直接杀伤驻虫细胞;CD4+分泌淋巴因子参加反应.针对不同的寄生虫感染,CD4+分化为TH1或TH2细胞.TH1细胞分泌IFN-γ、TNF-a、IL-2,以这类淋巴因子为主导的免疫途径称TH1途径.它以IFN-γ的作用为中心,主要作用寄生于细胞内的虫体,如球虫.     

蜂胶对小鼠T细胞亚群及主要相关细胞因子分泌的影响

为阐明蜂胶对小鼠特异性细胞免疫应答的影响特点,选择1、2、4 mg/ 3个剂量分别经腹腔注射给6周龄Balb/c小鼠,在0、7、10、15 d采血样,采用流式细胞术、ELISA分别测定小鼠外周血CD4+T细胞、CD8+T细胞数量、血清中IFN-γ、IL-4含量.结果显示,与注射蜂胶前相比,各不同剂量的蜂胶均能够使CD4...     

复方苦芩总多糖体外抗犬细小病毒作用机理研究

为探讨复方苦芩总多糖体外抗犬细小病毒(CPV)感染F81细胞作用机制,以F81细胞为宿主细胞,复方苦芩和黄芪多糖作药物对照,从复方苦芩总多糖对CPV的直接灭活作用、阻滞作用、抑制吸附、穿入及其复制5个方面探讨复方苦芩总多糖抗CPV活性机理.结果显示,复方苦芩总多糖在CPV病毒复制过程中均有一定的抑制作用,其中直接灭活作用效果优于复方苦芩组,P＜0.05,复制试验效果优于复方苦芩组,P＜0.05,与阳性药物组差异不显著,P＞0.05.从而表明复方苦芩总多糖体外抗CPV感染F81细胞效果明显,且主要通过直接灭活CPV和抑制其复制而发挥作用.     

E型产气荚膜梭菌的外毒素致病性及其类毒素疫苗免疫效果

检测E型产气荚膜梭菌外毒素对小鼠的半数致死量(LD_(50))以及肠道和肝脏的病理变化。结果显示,E型产气荚膜梭菌外毒素对小鼠的LD_(50)为56.8mg/L,并可对小鼠的肠道、肝脏造成严重的损害。同时本试验制备了针对该毒素的氢氧化铝胶类毒素疫苗,并肌肉接种小鼠21d后,采用血常规检查、流式细胞术和间接ELISA方法检测了小鼠外周血的白细胞、淋巴细胞数目、淋巴细胞比例、T淋巴细胞亚群比例与抗体滴度。结果显示,试验组的白细胞数目显著高于对照组白细胞数目(P0.05),另外淋巴细胞数目、淋巴细胞比例、T淋巴细胞亚群的CD3~+细胞百分数、CD4~+细胞百分数、CD8~+细胞百分数、CD4~+/CD8~+细胞在试验组和对照组之间无显著差异(P0.05)。然而,除CD8~+细胞外,试验组淋巴细胞数目、淋巴细胞比例、CD3~+细胞百分数、CD4~+细胞百分数、CD4~+/CD8~+细胞的均值皆高于对照组,且抗体滴度为1∶(1 510±129)。在免疫接种21d后,进行小鼠的攻毒试验,结果表明,该疫苗可以较好的保护试验组小鼠(n=5)。为深入认识E型产气荚膜梭菌外毒素的致病机制并探究预防该菌外毒素所导致的幼畜疾病提供了依据。     

PRRSV特异性肽对CSFV、PRRSV疫苗免疫猪后T淋巴细胞亚群的影响

用猪瘟疫苗和高致病性猪繁殖与呼吸综合征弱毒疫苗对猪进行免疫,在免疫后的14d和28d采集外周血液,分析特异性抗体表达量和外周血T淋巴细胞表型的变化,并用猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)特异性肽对淋巴细胞进行刺激。结果显示,在PRRSV免疫后14d,机体PRRSV抗体水平较低,其中CSFV低抗组中CD4+细胞百分数明显降低,CD4+/CD8+细胞的比值也明显降低;用PRRSV特异性肽刺激淋巴细胞24h后,CSFV低抗组与高抗组中CD3+、CD8+细胞的百分数都明显升高,CD4+细胞的百分数及CD4+/CD8+细胞的比值都明显降低。在PRRSV免疫后28d,CSFV抗体和PRRSV抗体的产生都比较高,CD3+细胞、CD4+T淋巴细胞百分数及CD4+/CD8+细胞的比值也明显升高,用肽刺激以后,CSFV高抗组中的CD3+细胞百分数降低,CSFV低抗组中的细胞百分数升高,CD4+/CD8+细胞的比值在所有组中均下降。结果表明,PRRSV特异性肽在PRRSV免疫早期可以使CD3+细胞的百分数升高,CD4+/CD8+细胞的比值降低,其详细的机理还有待进一步的探究。     

中药对柔嫩艾美尔球虫感染鸡外周血T细胞亚群的影响

为研究中药对柔嫩艾美尔球虫感染鸡免疫水平的影响,本实验采用流式细胞技术检测柔嫩艾美尔球虫感染鸡外周血CD4+T细胞亚群,以及CD8+T细胞亚群数目的动态变化。结果表明,接种球虫后,感染给中药组鸡CD4+、CD8+T细胞亚群数目及百分比(CD4+T/CD8+T)均高于感染不给药组,9d时,感染给中药组最高,分别为9.77和7.53,与感染不给药组差异显著(p0.05)。感染球虫组CD4+T/CD8+T比值均低于不感染组,感染给中药组在接种后第6d和第9d均高于感染不给药组。感染给中药组、不感染给中药组和不感染不给药组CD4+T/CD8+T平均值均在2-1之间,分别为1.11、1.33和1.25,而感染不给药组仅为0.93。     

中国美利奴羊不同MHC-DRB1/DQB1单倍型个体感染细粒棘球绦虫的免疫应答分析

为探讨中国美利奴羊(新疆军垦型)不同单倍型个体感染细粒棘球绦虫的免疫应答变化。将8只抗性单倍型绵羊设为抗性组,8只非抗性单倍型绵羊设为对照组,在相同的饲养条件下进行人工感染攻虫。分别在攻虫前7d(-7d)、攻虫当天(0d)、攻虫后第7、21、30、60天用流式细胞仪分析外周血中CD4+T、CD8+T、B淋巴细胞亚群的变化,同时用ELISA方法定量分析血清中IgG、IgM、IgE、IFN-γ水平并进行粒细胞计数。结果表明,抗性组绵羊的发病率显著低于对照组(P=0.019);CD4+T细胞2组之间差异不显著(P0.05),CD8+T细胞在攻虫后第7天抗性组显著高于对照组(P0.05);IgG水平在攻虫后第7天2组均显著高于攻虫前7d(P0.05)。攻虫后第30天抗性组IgM和IFN-γ水平均显著高于对照组(P0.05)。抗性组的白细胞、淋巴细胞分别在攻虫后第7和21天显著高于对照组(P0.05),嗜中性粒细胞和总蛋白在攻虫后第21天抗性组极显著低于对照组(P0.01)。结果显示,抗性单倍型绵羊对细粒棘球绦虫的抵抗力显著高于非抗性绵羊;抗性组绵羊体内的CD8+T细胞、IgM、IFN-γ和白细胞、淋巴细胞水平在攻虫后不同时期显著高于非抗性组绵羊。     

金银花复方制剂对新城疫病毒感染雏鸡外周血液免疫学变化的影响

为研究金银花复方制剂对新城疫病毒(NDV)感染雏鸡外周血液免疫学变化的影响,采用免疫荧光试验、流式细胞术、间接ELISA法和放射免疫法对NDV感染雏鸡、金银花复方制剂治疗雏鸡的外周血液淋巴细胞数量、免疫球蛋白及细胞因子含量进行检测。结果显示,雏鸡感染NDV后,其外周血液CD4+、CD8+T淋巴细胞和B淋巴细胞数量及IgG、IgM、白细胞介素(IL-2)含量均较未感染雏鸡明显降低,γ-干扰素(IFN-γ)含量较未感染雏鸡明显升高,提示NDV感染能够引起雏鸡外周血液免疫功能紊乱;金银花复方制剂能够显著提高感染雏鸡外周血液CD4+T淋巴细胞和B淋巴细胞数量及IgG、IgM、IL-2含量,降低IFN-γ含量,表明该复方制剂能够改善NDV感染雏鸡外周血液的免疫功能。