新疆栽培与野生一枝蒿粗多糖对口蹄疫疫苗免疫小鼠的佐剂活性比较

基于总物质量和多糖含量比较栽培/野生一枝蒿粗多糖（cultivated/wild Artemisia rupestris L.crude polysaccharides,CARCP/WARCP）作为口蹄疫灭活疫苗（foot-and-mouth disease inactivated vaccine,FMDV）佐剂对小鼠抗体水平及T细胞亚群的影响,探究CARCP/WARCP的佐剂活性和安全性。CARCP/WARCP配伍FMDV肌肉途径免疫ICR小鼠,检测免疫后小鼠血清中FMDV特异性抗体及分型,脾中T细胞亚群比例,血清中IgE水平,观察临床症状和注射部位反应以及小鼠体重。结果显示,总物质量一致时,CARCP1/WARCP1均能极显著提高FMDV特异性IgG、IgG_2a反应（P<0.01）,极显著促进脾T细胞CD3⁺CD4⁺、CD4⁺CD44⁺、CD8⁺CD44⁺CD62L⁺百分比（P<0.05）,显著提高IgG₁、IgG_2a/IgG₁比值,显著促进CD3⁺CD8⁺、CD8⁺CD44⁺、CD8⁺CD44⁺CD62L^-比例（P<0.05）,且除28 d IgG和IgG₁指标外,CARCP1的佐剂活性显著高于WARCP1（P<0.05）。多糖含量一致时,与FMDV相比,CARCP2/WARCP2均极显著增强了28 d IgG水平、IgG_2a/IgG₁比值（P<0.01）,显著提高了21 d IgG、28 d IgG_2a及CD4⁺CD44⁺（P<0.05）,且CARCP2/WARCP2之间差异不显著（P>0.05）。CARCP/WARCP没有引起小鼠脱毛等临床症状,也没有产生肉芽肿、肿胀等注射部位不良反应;CARCP/WARCP免疫后各组小鼠体重之间差异不显著（P>0.05）;各组小鼠血清均没有检测到IgE抗体（P>0.05）;这些结果表明CARCP/WARCP有一定的安全性。综上,当总物质量一致时,CARCP/WARCP均能增强FMDV免疫小鼠体液和细胞免疫反应,且CARCP的佐剂活性优于WARCP;多糖含量一致时,CARCP/WARCP作为FMDV佐剂的免疫增强效果相当,是安全佐剂候选物。     

栽培一枝蒿粗多糖佐剂增强口蹄疫疫苗的皮下免疫效果

旨在评价新疆栽培一枝蒿粗多糖(cultivated A rtemisia rupestris L.crude polysaccharides,CARCP)对口蹄疫灭活疫苗(foot and mouth disease vaccine,FMDV)的免疫佐剂活性,确定多糖佐剂的有效性.选用不同剂量的CARCP与FMDV配伍...     

黄芪多糖佐剂对猪瘟疫苗免疫效果的影响

本试验旨在探讨以黄芪多糖(astragalan,AG)为佐剂对仔猪猪瘟疫苗诱导猪瘟抗体的影响。将20日龄仔猪40头随机分成4组(n=10),即生理盐水(normal sodium,NS)组、猪瘟疫苗(swine plague vaccine,SPV)组、黄芪多糖注射液(astragalan injection,AGI)组以及黄芪多糖注射液和猪瘟疫苗(astragalan injection and swine plague vaccine,AGI-SPV)组。各组于前腔静脉采血5 mL(用于检测)后,分别于仔猪出生第20、85天连续3 d颈部肌肉注射NS 3 mL×3 d,SPV 1 mL×1 d+NS 3 mL×2 d,AGI 10 mg/kg×3 d,(AGI 10 mg/kg+SPV 1 mL)×1 d+AGI 10 mg/kg×2 d。分别采血检测20(给药前)、35、100 d血清IgG、IgM、IgA、γ-球蛋白、猪瘟抗体(SP-Ab)等。100 d血清测定结果显示,AGI组和AGI-SPV组的γ-球蛋白、IgG、IgM和IgA水平显著高于NS组和SPV组(P＜0.05),SPV组和AGI -SPV组猪瘟抗体阻断率分别显著高于35 d和20 d,且AGI-SPV组高于SPV组(P＜0.05)。 AG作为免疫佐剂能提高猪瘟疫苗对仔猪的免疫力,其作用机制与增加免疫球蛋白和促进猪瘟抗体形成有关。     

不同佐剂对口蹄疫病毒样颗粒疫苗免疫效果的评价

口蹄疫(foot-and-mouth disease, FMD)是一种高度传染性疾病,严重影响着畜牧业的发展。近年来,病毒样颗粒(virus-like particles, VLPs)疫苗因具有安全、高效等优点,成为当前FMD疫苗研究热点。为解决FMDV VLPs疫苗免疫原性弱的问题,本研究选取CpG、GM-CSF和FliB佐剂,与ISA206联合后分别与FMDV VLPs配伍,免疫豚鼠后通过检测豚鼠特异性抗体、中和抗体、脾淋巴细胞增殖能力及FMDV的攻毒保护率,探究其对FMDV VLPs疫苗的免疫增强效果。结果表明,CpG与ISA206联合作为佐剂可有效地刺激机体产生更高水平的特异性抗体和中和抗体,同时能够提高动物的攻毒保护率,从而增强了FMDV VLPs疫苗的免疫效力,研究结果为FMDV VLPs疫苗及其他蛋白质类疫苗最优佐剂的选择提供了依据。     

新疆野生一枝蒿粗多糖对流感疫苗小鼠免疫增强效果的分析

用新疆野生一枝蒿粗多糖(wild Artemisia rupestris L.crude polysaccharides,WARCP)通过肌肉注射免疫小鼠,研究其作为流感病毒疫苗(influenza virus vaccine,IVV)的佐剂效果和节约流感疫苗抗原用量的作用。WARCP与不同剂量(0.05、0.1、0.5μg)的IVV配伍,肌肉注射免疫小鼠,观察小鼠的生长状态,通过ELISA法检测血清中抗体IgG及IgG1、IgG2a的水平;MTT法检测脾淋巴细胞的增殖;流式细胞术检测细胞因子CD4~+ IL-4和CD8~+ IFN-γ以及CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞的表达水平。结果表明WARCP对小鼠的生长状态没有显著的影响(P0.05);WARCP能够显著提高不同剂量IVV特异性IgG及其IgG_1、IgG_(2a)的抗体水平(P0.05);增强淋巴细胞的增殖(P0.05);显著提高IL-4和IFN-γ的分泌水平(P0.05);降低Treg细胞的表达水平(P0.05);尤其可以提高低剂量IVV的体液和细胞免疫反应,至少减少抗原用量91%。因此,WARCP作为IVV的佐剂通过降低Treg细胞的水平,显著增强了IVV的免疫效果,尤其是Th1型的免疫反应,能够很好地节约抗原用量,具有良好的安全性。     

IFN-γ真核质粒对口蹄疫病毒生长激素环多肽免疫小鼠的佐剂效应

随着合成抗原和重组抗原的日渐增多,发展合适的佐剂以确保疫苗的最大活性及对接种者的保护作用成为科研工作者的重要任务.目前,细胞因子作为疫苗佐剂已成为免疫佐剂研究的热点和新方向.     

牛IL-2重组质粒对口蹄疫病毒G-H环多肽免疫小鼠的佐剂效应

本试验目的是研究牛IL-2重组质粒对口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)G-H环多肽免疫小鼠的佐剂效应.作者构建了含有信号肽序列的牛IL-2真核表达质粒pcDNA3.1-pBoIL-2,并体外鉴定其表达,同时原核表达并纯化了Asial型FMDV G-H环多肽.采用不同组合的pcDNA3.1-pBoIL-2、FMDV G-H环多肽分组免疫小鼠,并设阴、阳性对照,通过间接ELISA试验、微量血清中和试验、淋巴细胞增殖试验和实时定量PCR试验对各免疫组小鼠体液和细胞免疫水平进行综合评价.结果表明,与G-H+pcDNA3.1免疫组比较,G-H+pcD-NA3.1-pBoIL-2免疫组特异性抗体水平、中和抗体滴度、淋巴细胞增殖水平和细胞因子相对表达水平显著提高(P<0.05).结果提示,牛IL-2真核表达质粒可以显著提高G-H环多肽的免疫效果.     

含白术多糖油乳剂对口蹄疫疫苗免疫的增强作用

从中药白术中提取多糖成分(RAMPS),分别将不同浓度RAMPS水溶液注射小鼠,检测小鼠血清IFN-γ及脾指数、胸腺指数,从中筛选出最适浓度。将灭活口蹄疫(FMD)病毒抗原分别混入RAMPS水溶液、含或者不含RAMPS的植物油乳化剂,皮下注射免疫小鼠后检测血清FMD特异性抗体。结果表明,3种物质均可使小鼠血清抗体水平升高,以含RAMPS的植物油乳化剂促进抗体升高作用最为显著。RAMPS偏向于促进IgG2a的升高,而植物油则偏向于促进IgG1的升高。两者结合后大幅度促进了IgG1和IgG2a水平的升高。血清IFN-γ检测结果表明,只有RAMPS和含RAMPS的植物油乳化剂可促进IFN-γ显著升高,而植物油则不能。考虑到含RAMPS植物油乳化剂对FMD疫苗具有显著免疫增强作用,它作为一种兽用疫苗佐剂值得深入研究。     

口服黄芪多糖增强肠道黏膜免疫及其对口蹄疫疫苗免疫的影响

将40只小鼠随机分为2组,一组小鼠灌服黄芪多糖水溶液,另一组灌服生理盐水为对照组,给药后每周从各组随机取5只小鼠,分离脾淋巴细胞进行淋巴细胞增殖试验,并观察十二指肠黏膜上皮内淋巴细胞(IELs)以及上皮固有层的IgA+细胞数;将24只小鼠随机分为4组,各小鼠分2次,间隔2周注射口蹄疫(FMD)疫苗,其中1~3组的小鼠在疫苗免疫前灌服不同剂量的黄芪多糖,第4组小鼠灌服生理盐水作为对照。二免后1~5周,每周采血,检测血清IgG及其亚类。结果表明,小鼠口服黄芪多糖能显著促进小鼠淋巴细胞对刀豆蛋白A(ConA)和脂多糖(LPS)的刺激反应,并增加十二指肠IELs和固有层IgA+细胞数量;口服黄芪多糖后接种FMD疫苗,能够显著增强血清FMD特异性IgG及其亚类水平。     

新疆野生荒漠肉苁蓉醇提物调节小鼠DCs成熟对Th1/Th2的免疫增强作用

旨在探讨新疆野生荒漠肉苁蓉醇提物(ethanol extracts of wild Cistanche deserticola,EEWCD)调节Th1/Th2免疫反应的特点及初步的作用机制.采用卵清白蛋白(ovalbumin,OVA)为抗原,研究EEWCD对小鼠体液免疫,细胞免疫,细胞因子分泌,树突状细胞(dendri...     

川牛膝多糖对口蹄疫疫苗受免小鼠树突状细胞成熟的影响

用提取的川牛膝多糖(RCPS)和O型口蹄疫灭活疫苗协同免疫ICR小鼠,研究了其对免疫小鼠体内树突状细胞成熟的影响,进而探讨了RCPS增强口蹄疫疫苗免疫应答的机制。试验鼠在二免后2周处死,无菌取脾,制备脾细胞悬液,通过流式细胞术测定了共刺激信号分子(CD40,CD80,CD86)的表达水平,同时应用实时定量PCR检测了MHCⅠ、MHCⅡ类分子,CXC型趋化因子受体4(CXCR4)和CC趋化因子受体7(CCR7)mRNA表达水平。结果显示,与对照组相比在二免后14d,RCPS明显增强了共刺激信号分子CD40,CD80,CD86的表达水平,同时提高了MHCⅠ,MHCⅡ,CXCR4和CCR7mRNA表达水平。综上所述,RCPS配合FMD疫苗免疫小鼠,可显著促进树突状细胞的成熟和迁移。     

富硒女贞子粗多糖对小鼠免疫功能的影响

从富硒女贞子及女贞子中提取粗多糖,探讨其对小鼠免疫功能的影响。将90只小鼠随机均分为3组:对照组、富硒女贞子粗多糖组、普通女贞子粗多糖组。对照组灌服生理盐水,试验组小鼠灌服粗多糖液,灌服2次,每次连续5 d。2次灌胃的第3天注射卵清蛋白,二免后测定胸腺脾脏指数;MTT法检测脾淋巴细胞增殖水平;ELISA试剂盒检测血清中IL-2、IL-4、IFN-γ生成水平及相应抗体生成水平。结果显示:与对照组相比,试验组脾脏和胸腺指数明显升高,脾淋巴细胞增殖作用显著提高;IL-2、IL-4、IFN-γ生成水平明显提高,其中IFN-γ与对照组存在显著差异;而对特异性卵清抗体生成影响不大。这表明富硒女贞子粗多糖较普通女贞子粗多糖能更好地促进机体非特异性免疫及细胞免疫,从而增强机体免疫功能,在特异性体液免疫的作用方面则没有表现出明显的规律性,还需进一步研究。     

猪口蹄疫疫苗免疫剂量对免疫效果影响

饲养中注射猪口蹄疫疫苗是预防猪口蹄疫发生的有效办法.但在实际工作中发现一个问题,就是按疫苗使用说明书的使用剂量对猪进行免疫,经实验室免疫抗体监测,群体抗体保护率达不到70%(按国家、省规定猪口蹄疫免疫抗体正向血凝试验抗体达≥25以上为合格),即经过免疫的生猪仍然有少数猪不能抵抗自然感染,有发病的可能.为了找出影响免疫效果的因素,笔者于2008年4月至9月,做3次试验,从免疫剂量方面着手,欲了解疫苗剂量对免疫效果的影响程度,现报告如下.     

荒漠肉苁蓉种子生产对水肥耦合效应的响应

为探究补施水肥对荒漠肉苁蓉(Cistanche deserticola)生长和种子产量的影响变化规律,以不同时间的灌水(W)及施肥(F)作为试验因子,利用混合水平正交设计原理进行田间试验。结果表明：水肥耦合影响肉苁蓉的花序长度及种子粒径,对蒴果数、地上生物量、种子产量均没有影响。灌水影响肉苁蓉的地上生物量、种子产量及种子粒径,施肥影响种子粒径,灌水施肥的时间对肉苁蓉花序长度、地上生物量、蒴果数、种子产量及种子粒径影响均不明显。综合各因素分析,5月向每株梭梭灌水5 L并施用200 g磷酸二铵(N∶P∶K为18∶46∶0)复合肥最适合肉苁蓉生长且种子产量最佳。     

巴戟天多糖对口蹄疫疫苗免疫增强作用研究

为了研究巴戟天多糖对口蹄疫疫苗的免疫增强作用,试验将50只(4～7周龄)昆明小白鼠(体重18～22 g)随机分为5组,分别为空白(Naive)组、多糖(MOPS)组、疫苗(FMDV)组、疫苗+多糖(FMDV+MOPS)组、疫苗+铝佐剂(FMDV+alum)组,每组10只,Naive组小鼠注射生理盐水200μL,MOPS组小鼠注射巴戟天多糖溶液(2.5μg/μL)200μL,FMDV组小鼠注射猪口蹄疫O型灭活疫苗200μL,(FMDV+MOPS)组小鼠注射猪口蹄疫O型灭活疫苗200μL与巴戟天多糖200μL,(FMDV+alum)组小鼠注射猪口蹄疫O型灭活疫苗200μL与铝佐剂(1μg/μL)200μL,14 d之后进行二免。二免后第14天对小鼠进行眼眶采血,分离血清;无菌取脾脏,进行脾单细胞体外培养,收集上清液;采用小鼠间接ELISA试剂盒检测血清中特异性抗体IgG和血清中细胞因子IFN-γ、IL-4的含量。结果表明:与Naive组比,(FMDV+MOPS)组的IgG、IFN-γ和IL-4含量极显著升高(P0.01);(FMDV+alum)组的IgG、IFN-γ含量均极显著升高(P0.01),IL-4含量显著升高(P0.05);FMDV组的IgG、IFN-γ含量均显著升高(P0.05),IL-4含量差异不显著(P0.05);MOPS组的IgG、IFN-γ及IL-4含量差异不显著(P0.05)。说明MOPS作为口蹄疫疫苗免疫增强剂,可明显提高小鼠特异性抗体IgG和细胞因子IFN-γ、IL-4的含量,增强对小鼠的免疫应答。     

口蹄疫疫苗对萨福克羊的免疫效果

用口蹄疫O-亚I型二价灭活苗对萨福克羊进行免疫,免疫后不同阶段采血进行抗体检测,免疫后15 d群体产生抗体合格率O型80%;亚I型83.3%,1个月到2个月O型、亚I型均达到93.3%;3个月有所降低,O型76.6%、亚I型80%;6个月O型43.3%;亚I型46.7%。从个体抗体水平看,O型、亚I型抗体滴度1:256和1:128免疫后1个月为最高,3个月以后降低,到6个月1:128只占13.3%。因此,在口蹄疫苗的免疫中,必须做到每年免疫2次。     

参归复方及其粗多糖对小鼠免疫功能的影响

为探讨自拟参归复方对小鼠免疫调节作用的影响,将70只小鼠随机分成5组,分别给试验组小鼠灌服高低剂量的复方参归水提液及粗多糖,对照组灌服蒸馏水,连续21 d。用药结束后剖杀小鼠,测定各组小鼠的免疫指标变化。结果显示,试验组小鼠血液中淋巴细胞数、红细胞数、血清溶菌酶水平、血清Ig G含量均有不同程度的增加,其中复方水提液高剂量和多糖低剂量组与对照组相比差异显著(P0.05);试验组小鼠的体重、胸腺和脾脏指数与对照组相比差异不显著(P0.05)。因此提示,复方参归水提液及粗多糖均能够增强小鼠的非特异性免疫功能,复方粗多糖的效果优于参归复方水提液。     

葫芦粗多糖对小鼠红细胞及细胞因子免疫功能的影响

为了观察维吾尔药源性多糖[4种分级葫芦粗多糖(LSP)]对正常小鼠红细胞免疫功能及血清中白细胞介素-2(IL-2)和小鼠转化生长因子beta1(TGF-β1)含量的影响,试验采用红细胞花环形成法和ELISA法测定了LSP对正常小鼠红细胞免疫功能和血清中IL-2和TGF-β1含量的影响。结果表明:LPS能剂量依赖性地提高小鼠红细胞C3b受体花环形成率,提高小鼠血清中IL-2水平,同时降低血清中TGF-β1含量。在4种分级LSP中,LSP80%高剂量组和LSP30%高剂量组的免疫作用显著高于空白对照组(P0.05)。说明LSP可通过调节小鼠红细胞免疫功能和细胞因子免疫而发挥对机体的免疫调节作用。     

复合多糖的佐剂效应研究

目的:研究复合多糖佐剂对猪O型口蹄疫(FMDV)灭活抗原的佐剂效应。方法:以对猪O型FMDV灭活抗原具有佐剂效应的黄芪多糖(APS)、人参多糖(GPS)、木蟞子多糖(HPS)、茯苓多糖(LBPS)和云芝多糖(YPS)等五种多糖为佐剂成分,以各多糖的最佳佐剂剂量复合成多糖佐剂配方(CPS),以市售油佐剂为阳性对照,PBS为阴性对照,与FMDV灭活抗原配制成疫苗并免疫猪后,测定比较血清中FMDV灭活抗原诱导特异性抗体水平和不同佐剂诱导分泌IL-2、TNF-α、IFN-γ的变化。结果:CPS佐剂组在一免疫后抗体效价高于阴性对照组,与其他阳性对照组无显著差异,在二免疫后抗体效价高于ISA206油佐剂组,与其他阳性对照无显著差异,且抗体水平显著高于阴性对照组。二免后血清中三种细胞因子含量均高于其他试验组。结论:CPS作为佐剂,能显著提高抗体水平(GMT值),同时促进Th1和Th2型免疫应答,CPS作为新型佐剂具有应用价值。     

CpG-ODN佐剂在猪口蹄疫疫苗免疫增强的应用

本研究将CpG佐剂同高端口蹄疫疫苗混合后免疫生长猪,经过液相阻断法对抗免疫后的体效价进行评估。结果表明,CpG佐剂同高端口蹄疫疫苗同时使用可以提高免疫抗体水平和免疫合格率。