蛋白酶体在精子获能和受精中的作用

26S蛋白酶体是一个多亚基蛋白酶,在人、鼠、猪、牛、海鞘和棘皮动物受精研究中,表明它是一种特异性的靶蛋白。在研究哺乳和非哺乳动物物种受精过程中发现蛋白酶体的位置,蛋白酶体和精子移动有关,蛋白酶体与透明带(zona pellucida,ZP)结合促进顶体胞吐,精子泛素化和蛋白水解酶抑制剂有助于阻碍精子多精入卵,蛋白酶水解被抑制改变精子获能进程,精子表面结合腺苷三磷酸(adenosine triphosphate,ATP)的消耗阻碍猪和棘皮动物受精,蛋白酶体水解抑制剂阻碍精子穿过ZP,但是不改变哺乳动物精子和卵子结合的效率,不改变和精子有关的去泛素化活性和体外受精(in vitro fertilization,IVF)时单精受精和多精受精的平衡。总的来说26S蛋白酶体与人和动物受精的诸多事件有关,为精子和卵子结合机制的研究提供理论依据。     

Izumo1和Juno在哺乳动物受精过程中的研究进展

受精是哺乳动物一个精确而且高度协调的生理过程。精子与卵子的融合是其中最关键的一步。两个高度分化的单倍体生殖细胞,精子和卵子,通过融合形成一个全新的受精卵,并发育为胚胎。Izumo1和Juno是目前发现的第一个精子和卵子质膜上的配体-受体蛋白对,它们的相互作用是精卵识别所必须的。本文综述了这两种重要蛋白的发现及它们在精卵融合过程中的相互作用,同时阐述了哺乳动物受精过程的最新研究进展。     

精子受精抗原-1(FA-1) mRNA在绵羊睾丸和附睾中的表达

本研究通过RT-PCR检测了该基因在绵羊睾丸和附睾中的表达情况。首先,提取绵羊睾丸组织、附睾头、体、尾部组织总RNA,以此为模板,反转录合成cDNA,自行设计引物,PCR扩增出462 bp的目的DNA。然后,将目的片断克隆入T载体,通过菌液PCR和重组质粒酶切,鉴定重组质粒中的目的DNA。再经序列分析鉴定目的片断。同时,以β-actin为内参照物,进行RT-PCR半定量分析,比较精子受精抗原(FA-1)在睾丸、附睾头、体、尾组织中的表达量。结果表明,FA-1在绵羊睾丸和附睾中均表达。     

钙振荡在哺乳动物卵母细胞受精过程中的作用

哺乳动物的精子和卵母细胞由减数分裂产生,其遗传物质减半,功能高度特化。精卵结合后,染色体数恢复,获得发育的全能性,重启有丝分裂,开始个体的生长。受精时,精子引起卵母细胞内的钙离子（Ca²⁺）以一定的频率波动,称为钙振荡。Ca²⁺周期性的变化,驱动下游蛋白的活动,完成卵母细胞的激活。作者主要介绍了受精时钙振荡启动的机制,以及其持续时间、振幅、频率对哺乳动物卵母细胞正常受精的影响;同时,讨论了Ca²⁺在卵母细胞内外运输的通道和钙振荡发生和维持的机制;分析了钙振荡对卵母细胞的细胞周期恢复和母源mRNA翻译的调控作用和机制。目前,关于卵母细胞激活事件信号通路的研究已经取得了很大的进展,但每个单独事件所涉及的分子机制尚未完全确定。本综述探讨了哺乳动物受精时卵母细胞内钙信号研究的现状和未来研究的方向,为保障人类生殖健康和提高畜牧繁殖效率提供参考。     

小鼠卵母细胞质内注射精子(ICSI)受精产仔

1 前言 动物显微操作协助受精技术的早期探索始于本世纪60年代,主要用于研究受精的早期事件,如同种和异种配子间膜的融合,卵质的活化以及雌、雄原核的形成等。 在哺乳动物方面,最早的工作是由Uehara和Yanagimachi(1976)完成的。他们将人和仓鼠的精子注入仓鼠的卵母细胞以确定是否能发育形成原核(Iritani,1991;Ng等,1993)。在人,早在1988年将精子注入卵胞质(ISCI)就已见到原核形成(Lanzendiorf等,1988),但直到这一报道后6年才出生ICSI婴     

绵羊冻融精子透明质酸酶活性变化的研究

为了检测冷冻对绵羊精子顶体透明质酸酶活性的影响,试验采用改良后的明胶膜片法对冷冻保存前后小尾寒羊精子顶体透明质酸酶活性变化进行研究。结果表明:冷冻保存后精子顶体透明质酸酶阳性反应率[(43.00±2.45)%]和平均成环直径[(32.86±0.32)μm]与冷冻前精子顶体透明质酸酶阳性反应率[(67.00±4.79)%]和平均成环直径[(55.05±0.47)μm]相比极显著降低和减少(P0.01),且冷冻前后精子活率与透明质酸酶活性均呈极显著正相关(P0.01),表明冷冻保存对绵羊精子顶体透明质酸酶活性造成显著损伤。说明透明质酸酶的活性可以在一定程度上预测精子活率和受精能力,可作为绵羊精液品质评价的新指标。     

小鼠精子冷冻及冻融精子体外受精研究

为了探索一种高效的小鼠精子冷冻方法,试验利用棉籽糖和脱脂奶粉作为冷冻保护剂进行精子冷冻保存,然后再通过精子复苏、体外受精试验,比较冷冻保存复苏后的精子与新鲜精液中精子在受精卵率、2-细胞率、囊胚率方面的差异。结果表明:本方法冻存的精子受精率为70.3%,2-细胞率为58.3%,囊胚率为41.7%,与新鲜精液相比差异不显著(P0.05)。说明本方法适用于小鼠精子冻存。     

用精子微注射技术研究获得的对哺乳动物受精过程的新认识

精子微注射技术就是借助显微操作仪,将精子或精子成分直接注入卵母细胞的细胞质或卵周隙中去,使卵子受精。它是体外受精的一种新的操作技术,可将体外受精研究和胚胎的显微操作技术相结合,因而,比常规体外受精研究更有发展前途。首先,它避免了正常受精过程中精子穿透卵子胶膜、卵丘细胞一透明质酸基质和透明带,进而和卵浆膜融合的过程,因而可以对精卵互作的某些特征进行探讨。比如可用以研究受精的准确时间、     

酪氨酸磷酸化在精子获能过程中的作用

在精子细胞发生顶体反应并使卵母细胞受精之前,获能是一个重要的生理先决条件。获能是精子在雌性生殖道中进一步成熟的复杂现象,其赋予精子以增强活性的能力,使精子能够与卵母细胞透明带(ZP)相互作用,进行顶体反应并与卵母细胞质膜融合,进而完成受精过程。然而精子获能的分子机制十分复杂,目前还未完全明确,但获能后的精子会有诸多结构及生化方面的变化,如蛋白酪氨酸磷酸化、精子膜胆固醇外流、活性氧的产生及精子膜超极化。蛋白质通过磷酸化或去磷酸化调节精子获能和顶体反应等一些重要的现象,这是精子到达、结合、穿透和融合卵母细胞所必需的过程。因此蛋白磷酸化是获能的一个非常重要的过程,尤其是在酪氨酸残基处的磷酸化是获能过程中发生的最重要的事件之一,且酪氨酸磷酸化可能是细胞中信号转导途径的主要甚至是唯一的指标。作者主要针对蛋白磷酸化、精子中酪氨酸磷酸化的发现、作用和定位,以及影响获能过程中酪氨酸磷酸化的几个因素进行阐述。     

酪氨酸磷酸化在精子获能过程中的作用

在精子细胞发生顶体反应并使卵母细胞受精之前,获能是一个重要的生理先决条件。获能是精子在雌性生殖道中进一步成熟的复杂现象,其赋予精子以增强活性的能力,使精子能够与卵母细胞透明带（ZP）相互作用,进行顶体反应并与卵母细胞质膜融合,进而完成受精过程。然而精子获能的分子机制十分复杂,目前还未完全明确,但获能后的精子会有诸多结构及生化方面的变化,如蛋白酪氨酸磷酸化、精子膜胆固醇外流、活性氧的产生及精子膜超极化。蛋白质通过磷酸化或去磷酸化调节精子获能和顶体反应等一些重要的现象,这是精子到达、结合、穿透和融合卵母细胞所必需的过程。因此蛋白磷酸化是获能的一个非常重要的过程,尤其是在酪氨酸残基处的磷酸化是获能过程中发生的最重要的事件之一,且酪氨酸磷酸化可能是细胞中信号转导途径的主要甚至是唯一的指标。作者主要针对蛋白磷酸化、精子中酪氨酸磷酸化的发现、作用和定位,以及影响获能过程中酪氨酸磷酸化的几个因素进行阐述。     

MEKK1在B6-Co小鼠胚胎发育过程中的表达

为了检测MEKK1在B6-Co小鼠胚胎眼睑发育关键时期的表达,探讨其在该突变系小鼠EOB(出生时眼睛睁开)表型形成过程中的作用,试验剖取E16.5和E18.5小鼠,剪取整个头部,用4%多聚甲醛固定脱水,制作冰冻切片,通过免疫荧光技术检测MEKK1在小鼠胚胎眼睑部位的表达;剪取胎鼠皮肤,提取蛋白,以GAPDH为内参,通过Western-blot检测MEKK1在B6-Co小鼠胚胎中的表达情况。结果表明:与B6小鼠相比较,MEKK1在B6-Co小鼠胚胎眼睑发育关键时期的表达差异不显著;但游离C端在E16.5小鼠的表达明显要高于E18.5的表达,差异显著。说明MEKK1对促进小鼠眼睑融合起到了重要作用。     

解冻-输精间隔1小时对公牛精子受精力的影响

关于公牛精子解冻的研究工作,主要着重于精子的某些特性,特别是精子的活力、顶体完整性、耐热性和受精力。评价这些特性就有可能对必须实行的操作程序形成一个数值概念(如解冻水浴的温度和精液在水浴内浸没的时间)。常规输精的方法是,精液一经解冻立即为母牛人工输精。如果对已经解冻的精液不立即使用,而放置一段时间后再使用,精子的受精力会怎样呢?在这方面,已有若干用升温到     

禽类受精过程中的精卵互作

受精是有性生殖动物繁育下一代必不可少的过程。在过去数十年中,我们对哺乳动物精卵互作分子机制的理解已取得重要进展。然而,由于禽类的卵子较大和模拟发生在正常受精过程中的生理性多精受精过程有一定困难,我们在禽类精卵互作方面积累的知识并未达到类似于在哺乳动物上积累的水平。本文将总结目前人们对禽类受精过程中精卵互作机制的理解,尤其着重总结精卵结合、精子的顶体反应以及卵周膜通道形成所必需的真精子蛋白酶;解释卵周膜中透明带(Zona Pellucida,ZP)蛋白(ZP1和ZP3)在精卵结合、顶体反应诱导以及精子蛋白酶消化作用下的精子渗透作用。我们期望:对鸟类受精过程的更深刻理解,能够为家禽行业中包括生产转基因或克隆禽类在内的众多应用开发强有力工具开辟新的途径。     

小鼠GV期卵母细胞体外成熟及受精研究

本试验对不同培养液以及添加不同浓度的生殖激素对6～8周龄雌鼠GV期卵母细胞成熟培养效果以及肝素钠对其成熟后体外受精效果的影响进行了研究。结果表明:以TYH为基础培养液的培养方式更适合于体外成熟培养;培养液中单独添加LH或同时添加LH和FSH对昆明小鼠卵母细胞体外成熟有促进作用,但只添加FSH对卵母细胞的成熟促进作用不明显;在小鼠受精液中肝素浓度应控制在10μg/mL为宜。     

微电脑显微技术在精子运动功能测定中的应用

近年来微电脑显微技术随着电子技术的高速发展其功能迅速加强并不断完善 ,自动化程度、视频采集和分辩率的不断提高使操作更简便 ,这为检测和科研提供了一种客观的、定量的测定精子运动功能的有效手段。整套装置包括能安排摄像机的相差显微镜 ,高分辨率三枪彩色摄像机 ,高分辨彩色显示器 ,显微镜与摄像机专用接口 ;微电脑 (ＰⅡ ) ,其配置略高于普通电脑 ,硬盘要大 ,3Ｄ显示卡 ,视频信号采集卡是显微技术的关键设备 ,其性能的优劣直接影响图形采集的质量 ,此卡提供了令人满意的 3Ｄ加速与高品质的视频捕捉和视频播放能力 ,它还提供了ＲＣＡ…     

Hsp90AB1在狂犬病病毒复制过程中的功能初探

为了探究宿主蛋白Hsp90AB1在狂犬病病毒(Rabies virus,RABV)复制过程中的功能,以RABV疫苗毒株HEP-Flury感染鼠神经瘤母细胞N2a为模型,分析Hsp90AB1对RABV复制的影响。采用RNA干扰的方式,发现Hsp90AB1基因敲降后可影响病毒基因的转录及其表达,而未影响病毒的反基因组水平以及病毒感染力,表明Hsp90AB1在转录或蛋白表达水平上影响RABV的复制。由此初步发现Hsp90AB1在RABV复制过程中的作用方式,为继续深入研究Hsp90AB1在RABV感染过程中的作用机制提供了基础数据。     

敖汉苜蓿授粉受精及胚胎发育过程的研究

对敖汉苜蓿的授粉受精、花粉萌发以及胚胎发育过程进行了研究.结果表明,敖汉苜蓿在人工授粉10min后花粉粒的内壁穿过外壁的萌发孔向外突出,20min时形成花粉管,1h后花粉管触及柱头,而后沿花柱道伸长.24～27h到达子房开始受精;经过受精作用胚细胞开始分裂分化,到第22d便形成了具有胚根、胚轴、胚芽和子叶的完整胚.胚的整个形成过程可分为三个阶段:球状胚形成期、子叶形成期、胚各部分发育成熟期.