马立克病毒糖蛋白D基因转入感染细胞DNA的研究

用ＥｃｏＲⅠ，ＰｓｔⅠ内切酶将已分离和克隆的马立克氏病病毒糖蛋白Ｄ基因从重组ｐＭｇＤ１８质粒中切出，克隆进反转录病毒质粒载体的连接质粒载体ｐＵＣＣｌａ１１２Ｎ的相同位点。用ＣｌａⅠ再将ｇＤ重组ｐＵＣＣｌａ１１２Ｎ中的ｇＤ基因切出，用ＣｌａⅠＲＣＡＳ载体切开，将ｇＤ基因构建于ＲＣＡＳ的ＣｌａⅠ位点。     

马立克病病毒囊膜糖蛋白E基因的克隆及序列分析

用聚合酶链式反应（PCR）技术，从中国广西分离的马立克氏病病毒（MDV）N株和G2株基因组DNA中，扩增出MDV糖蛋白E（gE）抗原基因片段的1500bp编码序列，将PCR扩增产物在KpnⅠ和HindⅢ位点克隆进pUC18质粒载体中，以Dig标记的gE PCR产物作为探针做斑点杂交及酶切分析选到含MDV gE基因的目的重组质粒pMNE、pMG2E。通过酶切位点分析显示，两毒株的gE基因内部酶切位点与MDV－GA国际标准强毒株的酶切位点基本一致。对重组pMNE、pMG2E质粒进行部分序列测定，并用DNA Star软件分析，结果表明：插入序列与发表的GA株gE基因序列具有高度同源性，gE基因为高度保守基因。     

表达马立克氏病病毒gI基因重组鸡痘病毒的免疫原性

以鸡痘病毒为载体，构建含马立克氏病病毒（MDV）gI基因的重组鸡痘病毒（rFPV)，并在鸡胚成纤维细胞（CEF）中表达gI基因，用重组FPV（命名为rFPV-MDV648gI）感染CEF，结果显示：rFPV-MDV648gI能在CEF中稳定复制。进一步用rFPV-MDV648gI接种无特定病原（SPF）鸡皮下组织，结果表明：鸡对rFPV-MDV648gI具有抗体反应性。     

马立克氏病病毒gE基因在大肠杆菌中的融合表达

以马立克氏病病毒(MDV)特超强毒648株基因组DNA为模板,通过聚合酶链式反应(PCR)方法扩增出gE基因。将其插入到表达性质粒pGEX-6p-1中谷胱甘肽转移酶(GST)基因的下游,转化大肠杆菌,经筛选、鉴定获得重组质粒,测序结果证明重组质粒的阅读框架不变,将其命名为pG648E。经SDS-PAGE电泳及Westernblotting分析,在82ku有GST-gE的蛋白带,重组质粒在大肠杆菌BL21中以融合蛋白的形式表达。结果表明:MDVgE基因原核表达成功。     

马立克氏病病毒P79抗原基因在大肠杆菌中的表达特性分析

马立克氏病病毒（ＭＤＶ）的７９ｋｄ蛋白质是该属３个血清型所共有的抗原。用能表达该蛋白质片段的重组噬菌体Ｌａｍｂｄａ ｇｔ１１克隆ＧＢ－２在宿主菌大肠杆菌株中表达该蛋白，免疫转印试验中的确产生了能为对７９ｋｄ蛋白质的单克隆抗体Ｔ８１所识别的表达产物。表达过程中，不论加入或不加蛋白分解酶抑制剂，在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ蛋白电泳及Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ中均未显示分子量大于β－半乳糖苷酶的融合蛋白的存在，而是     

基因探针技术检测血清1型马立克氏病病毒的研究

选用马立克氏病病毒（ＭＤＶ）ＧＡ株ＢａｍＨＩ基因文库中ＬＤＮＡ片段，制成ＤＩＧ－标记的ＭＤＶ核酸探针，分别对Ｉ型ＭＤＶ强毒株（ＢＪ－１株）和弱毒株（Ｍｄ１１／７５ｃ株）感染材料的核酸进行ｄｏｔ ｂｌｏｔ杂交检测，结果显示均有阳性呈色反应；而对ＭＤＶ血清２型（ＳＢ－１株）、３型（Ｆｃ１２６株）及禽网状内皮组织增殖病病毒（ＲＥＶ）和淋巴细胞性白血病病毒（ＬＬＶ）感染细胞的核酸，作上述同样检测，则均未见     

亲和层析法提纯鸡马立克病毒gB基因重组产物

应用针对鸡马立克病毒（ＭＤＶ）糖蛋白Ｂ（ｇＢ）抗原单克隆抗体ＩＡＮ８６制备亲和层析柱，从感染重组杆状病毒（ｇＢ－ＡｃＮＰＶ）的昆虫细胞中提纯鸡ＭＤＶｇＢ基因重组产物，获得较好效果。提纯的蛋白质在ＳＤＳ－ｐＡＧＥ中出现的５条条带中有４条在免疫印迹试验中出现，其分子量为１００，６０，４９，４０ｋｄ占蛋白总量的５４．７％。试验证明用单克隆抗体亲和层析法提纯ＭＤＶｇＢ基因重组产物是一个行之有效的方法。     

马立克氏病病毒（MDV）B抗原基因的克隆及鉴定

将ＭＤＶＧＡ株ＢａｍＨＩ基因文库中含Ｉ３片段的质粒ｐＡＣＹＣ１８４和Ｋ３片段的质粒ｐＨＣ７９扩增，用碱裂解法抽提质粒后，利用相应的限制性内切酶切出目的基因片段，连接到合适的载体上，构建了完整的ＭＤＶＢ抗原基因克隆载体。通过内切酶分析，地高辛（ＤＩＧ）－探针原位杂交，ＤＮＡ序列预测，确认克隆的Ｂ抗原基因正确。     

马立克病病毒糖蛋白B抗原基因克隆的酶切分析

用狄可辛标记的马立克病病毒(MDV)基因组DNA的BamHⅠ-K_3片断为探针,从建于pUC18质粒中的GA株MDV感染细胞基因组DNA的基因文库中,筛选到MDV糖蛋白B抗原基因克隆,酶切分析表明,GA株MDV的B抗原基因克隆在EcoRⅠ、HindⅢ、SalⅠ及BamHⅠ等酶切位点的分布上与RBIB株MDV的B抗原基因没有区别。     

鸡马立克氏病毒I型毒株的分离和鉴定

从鸡马立克氏病（ＭＤ）疫苗免疫的发病鸡群中采集肝，脾，血液等病科，经鸭胚成纤维细胞（ＤＥＦ）培育盲传数代，分离到１株（ＭＤＶ）暂定名为沪Ｘ株，该病毒在ＤＥＦ培养上出现典型的ＭＤＶ细胞病变，电镜下病毒大小为１００ｎｍ左右，呈椭圆半开圆形，位于细胞核内。细胞培养物经饱和硫酸铵浓缩后，与标准的马立克氏阳性血清出现琼扩沉淀线，病毒按种ＳＰＦ鸡后，鸡群主要表现内脏肿瘤，并回收到ＭＤＶ，表明分离的沪Ｘ株具有致     

异羟基洋地黄毒甙元核酸探针对马立克氏病毒DNA的检测

应用异羟基泣地黄毒甙元标记的ＤＮＡ探针，检测了细胞培养物和鸡羽髓中提取的马立克氏病毒核酸。结果发现，异羟基洋地黄毒甙元标记的马立克氏病毒血清Ⅰ型（ＧＡ株）核酸的ＢａｍＨＩ－Ｌ片段探针，只与马立克氏病毒Ⅰ型核酸发生杂交，而不与Ⅱ型（ＳＢ－１）或Ⅲ型（ＨＶＴ）发生杂交。对３６份鸡羽髓病料提取的病毒核酸的杂交检测与琼扩试验相比较，前阳性率为９４．４％。后仅为８６．１％。由此说明，Ⅰ型病毒的核酸探针可     

马立克病病毒pp38基因的编码序列及译读框

马立克病病毒(MDV)与致肿瘤相关的38kd磷蛋白(pp38)基因的编码序列是一个不含有内含子的由870个碱基对组成的DNA片断。从对MDVpp38-λgtll Lac Z融合基因的定序及已知Lac Z基因的译读框,直接读出了MDVpp38基因的译读框。根据计算,由该译读框推导出的该基因编码的由290个氨基酸组成的初级多肽分子量约为31kd.     

马立克氏病毒Z4株培养特性和免疫原性的研究

将鸡马立克氏病毒（ＭＤＶ）血清２型Ｚ４毒株第１０代（Ｚ４－１０），在对鸡马立克氏病（ＭＤ）高度易感的Ｐ系ＳＰＦ鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）单层上连续传代至第３０代（Ｚ４－３０），Ｚ４毒株空斑形成速度和空斑形态均未发生显著变化，分别以Ｚ４－１１，Ｚ４－２５和Ｚ４－３０细胞结合毒作单介疫苗，将Ｚ４－１１，Ｚ４－２０和Ｚ４－３０细胞结合毒分别与ＦＣ１２６细胞结合毒组成二价疫苗，免疫Ｐ系ＳＰＦ鸡，用ＭＤＶ强毒     

马立克氏病病毒囊膜糖蛋白I原核表达产物单克隆抗体的制备

以重组质粒pGEX-MDgI在大肠杆菌BL21中表达马立克氏病病毒（MDV）特超强毒648A株的囊膜糖蛋白1（gI_完整基因，通过SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳分离相应的蛋白质条带，切下并碾碎后作免疫原免疫小鼠，用以制备针对MDV 648A gI糖蛋白的杂交瘤细胞株，以MDV感染的鸡胚成纤维细胞（CEF）为检测抗原，用间接免疫荧光抗体反应（IFA）筛选到9株杂交瘤细胞株，选其中3株2H7，6F10，2H2制备腹水，其IFA效价均达到1：1500以上，与I型MDV不同现型的毒株CVI988／Rispens,GA,RB1B,Md11株感染的CFF测IFA，均呈现特异性荧光，但反应强度不同，腹水经PBS稀释后与MDV感激的CEF做斑点酶联免疫吸附试验，呈特异性显色，对MDV感染的CEF裂争物做Westernblotting，可检测出1 条特民性条带。