苦楝SSR-PCR反应体系优化及引物筛选

[目的]借鉴以往楝属文献报道的SSR引物,筛选高度多态性、稳定性高、重复性好的苦楝SSR引物,为苦楝遗传图谱构建、QTL定位和分子标记辅助选择育种等研究领域应用奠定基础.[方法]本研究采用单因素法和正交试验设计进行SSR-PCR反应体系优化,并利用该体系以8个不同种源的苦楝基因组DNA为模板,从135对候选SSR引物中进行引物筛选.[结果]苦楝SSR-PCR最优反应体系为:1.0 μL 50 ng·μL^-1模板DNA,1.2 μL 100 μmol·L^-1引物,1.0 μL 10 mmol·L^-1 dNTPs,0.8 μL 25 mmol·L^-1 Mg²⁺,0.15 μL 5 U·μL^-1 Taq酶,1.5 μL 10×Buffer,补ddH₂O至15 μL;最终筛选出15对具有高度多态性、稳定性高、重复性好的SSR引物.[结论]本研究成功优化了苦楝SSR-PCR反应体系,并成功筛选出15对适用于苦楝的SSR引物.     

火炬松SSR-PCR反应体系的建立及引物筛选

以火炬松(Pinus teada)幼嫩针叶为材料,采用单因素试验设计分析各组分对SSR-PCR扩增结果的影响,并进一步应用正交试验设计,从DNA模板、引物、d NTPs、Mg2+和Taq酶5个因素3个水平对SSR扩增效果进行研究,确定火炬松SSR-PCR的最佳反应体系。结果表明:各因素不同水平浓度对SSR-PCR反应结果均有影响,火炬松SSR-PCR优化后的反应体系为:DNA模板80 ng、引物0.3μmol/L、dNTPs 0.20 mmol/L、Mg~(2+)2.0 mmol/L、Taq酶1.00 U、1×PCR Buffer,总体积25μL。运用该体系从60对引物中筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的SSR引物8对,并用不同火炬松家系进行了检验,证明该体系稳定可靠。     

国槐SRAP-PCR反应体系优化及引物筛选

为建立国槐(Sophora japonica)最佳SRAP-PCR反应体系,采用正交试验设计L16(45)对影响PCR体系的5个因素(模板浓度、引物浓度、Mg2+浓度、Taq聚合酶和d NTP用量)4个水平进行了优化,确定了国槐的最优SRAP-PCR反应体系:Taq聚合酶1.5 U,d NTPs 0.30 mmol/L,模板DNA 90 ng,Mg2+2.0 mmol/L,引物0.3μmol/L,dd H2O补至20μL。各因素对PCR反应的影响从大到小依次为:Taq聚合酶d NTPs模板DNAMg2+引物。基于最佳SRAP体系,采用4个品种对120对引物进行筛选,共获得12对多态性好的引物组合。随机抽取两对引物基于毛细管电泳技术对此体系进行稳定性检验,扩增条带清晰、稳定、多态性高。该体系的建立以及筛选的引物组合为为进一步利用SRAP技术对国槐的遗传多样性、品种鉴定等方面的研究奠定基础。     

杉木SSR-PCR体系优化

SSR-PCR反应体系优化是杉木SSR标记研究的基础.利用正交L16 (45)设计实验对杉木SSR-PCR反应体系的Mg2+、dNTPs、引物、Taq酶和DNA浓度5个因素的4个水平进行优化试验.并在正交直观分析和方差分析的基础上,分别对Mg2+、dNTPs进行单因素确定.获得的最佳反应体系为:在20 μL反应体系中,Mg2浓度为1.0mmol/L,引物浓度为0.25 μμmol/L,dNTPs浓度为0.15 mmol/L,Taq酶为0.05 U/μL,DNA为30 ng,10×PCR Buffer 2μL,不足部分用双蒸水补齐至20μL.在最佳反应体系的基础上,采用单因素实验确定了引物的最佳退火范围为63～53℃.利用此反应体系对10个F1代杉木材料及其亲本,进行4对SSR标记进行PCR扩增并电泳检测,其结果清晰、稳定.说明此体系适合进一步的杉木SSR研究工作.     

红椿SSR-PCR体系建立和多态性引物筛选

[目的]本研究旨在建立红椿SSR-PCR最佳反应体系,并筛选适于红椿SSR分析的高多态性引物。[方法]通过L16(45)正交试验设计,确立红椿SSR-PCR最佳反应体系;利用优化后的体系对来自楝科植物的135对SSR引物,在6个不同的红椿居群中进行扩增,筛出能有效扩增的引物并进一步筛选出适于红椿的高多态性引物。[结果](1)10μL基于荧光d UTP的SSR-PCR体系中包含:10×buffer 1.0μL,Taq酶(5 U·μL-1)0.1μL,Mg Cl2(25mmol·L-1)0.8μL,d NTP(200 mmol·L-1)0.025μL,荧光d UTP(1 nmol·μL-1)0.01μL,引物(10 mmol·L-1)0.8μL,DNA模板45 ng剩余用dd H2O补足;(2)筛选出29对能有效扩增的引物,复选后获得了12对适于红椿SSR分析的高多态性引物。[结论]建立了SSR-PCR最佳反应体系并筛选出高多态性引物,为红椿的分子标记等遗传学研究提供了基础。     

润楠ISSR-PCR优化反应体系建立及引物筛选

以润楠基因组总DNA为材料,利用单因素试验设计方法,对影响ISSR-PCR扩增的模板DNA、Mg2+、dNTPs、引物、Tag DNA聚合酶以及去离子甲酰胺等试验因子进行了优化试验,筛选出16条有效引物并确定了它们的退火温度,并检测了体系的重复性。优化后的反应体系为:20μL PCR反应体积中,10×PCR Buffer 2μL,2.0mmol/L Mg2+1.6μL,0.2 mmol/L dNTPs 2μL,0.4 mmol/L引物0.8μL,0.5U Taq DNA聚合酶0.1μL,40 ng DNA模板1.0μL,1.5%去离子甲酰胺0.3μL,ddH2O 12.2μL。扩增程序为:94℃预变性5 min,94℃变性30 s,据不同引物的退火温度复性45 s,72℃延伸90 s,反应37个循环,最后在72℃延伸7 min。润楠ISSR-PCR反应体系的建立为利用ISSR分子标记技术研究润楠的遗传多样性奠定了良好的基础。     

光皮树ISSR-PCR扩增条件和反应体系优化

以光皮树基因组DNA为材料,采用单因素实验,测试了退火温度、模板用量、dNTP浓度、Taq酶用量、Primer浓度、Buffer用量和Mg^2＋浓度等因素对ISSR-PCR的影响。优化的反应体系和条件：总体系为25μL,引物0．2μmol／L、模板20ng、Mg^2＋ 2．5mmol／L、Taq酶0．5U、dNTP为0.1mmol／L和Buffer为2.5μL。扩增程序：94℃预变性5min,1个循环;94℃变性50s,52℃退火1min,72℃延伸1．5min,40个循环;72℃后延伸10min,1个循环。该体系的建立为今后利用ISSR进一步研究光皮树遗传连锁图谱构建、遗传多样性、种质资源鉴定和基因定位奠定了技术基础。     

野杏SSR-PCR反应体系优化

为建立稳定可靠的野杏SSR-PCR反应体系,以3个野杏无性系170号、240号、263号和1个西伯利亚杏无性系508号为试验材料,采用L16(45)正交试验设计对影响野杏SSR-PCR反应的5个因素在4个水平上进行优化。结果表明:各因素对反应体系的影响由大到小依次为DNA模板浓度、引物、dNTP、Mg2+、Taq聚合酶。野杏SSR-PCR最佳反应体系(总体积20μL):dNTPs 0.45 mmol/L、Mg2+2 mmol/L、Taq酶1.125 U、引物0.125μmol/L、DNA模板20 ng。选用引物X128和60个野杏样木对该体系进行稳定性验证,扩增产物集中在100～200 bp,稳定度高,多态性良好,该体系可应用于野杏分子标记辅助育种等方面的研究中。     

乌桕SRAP-PCR体系优化与引物筛选

乌桕是我国重要木本油料树种,目前有关乌桕SRAP-PCR相关研究罕有报道.笔者以乌桕优树总基因组DNA为模板,建立了乌桕的SRAP最佳反应体系:20μLPCR反应体积系中,2μL10×PCR buffer、0.2mmol/L dNTPs、0.25mmol/L引物、1.5U Taq聚合酶和40ng模板DNA.并从100个...     

湿地松、加勒比松SRAP反应体系的优化及引物筛选

采用正交设计L9(34)对影响湿地松、加勒比松SRAP反应体系的DNA浓度、dNTPs浓度、引物用量、Taq DNA聚合酶浓度4个因素进行了优化试验,结果表明:扩增反应体系5优于其他体系,即25μL体系中含有DNA 40 ng、dNTPs 1mmol/L、引物10 μmol/L、DNA聚合酶1.0U.在此基础上,通过单...     

兴安落叶松SSR反应体系的建立与优化

采用L16(4^5)正交试验设计,对影响兴安落叶松SSR-PCR反应体系的主要因素(模板DNA、d NTPs、Mg^2+、Taq聚合酶浓度及引物浓度)进行了试验分析,其结果表明:兴安落叶松SSR-PCR体积为20μL的最佳反应体系是模板DNA用量50 ng、正反向引物浓度均为5μmol·L^-1、d NTPs浓度为2.5 mmol·L^-1、Mg^2+的浓度为2.5 mmol·L^-1、Taq聚合酶用量为1.0 U、最佳退火温度为60℃。试验所建立的反应体系可进一步用于兴安落叶松SSR遗传图谱构建、多样性分析、良种选育等方面的研究中。     

柳树SSR反应体系的建立与优化

以簸箕柳(Salix suchowensis Cheng)295-2、绵毛柳(Salix erioclada)716为试材,利用正交设计直观分析法和单因子试验优化柳树SSR-PCR反应体系,通过研究,确定柳树10 μLSSR反应体系为:DNA模板20 ng左右;Taq聚合酶:0.5 U;Mg2+:2.5 mmol/L;dNTP:0.1 mmol/L;引物(R&F):0.3 μmol/L.PCR反应程序为:94 ℃ 2 min;94 ℃ 45 s,(Tm-5)℃ 15 s,72 ℃ 45 s,35循环;72 ℃延伸8 min;4 ℃保温.利用优化的反应体系和程序,对杂种109(簸箕柳295-2×绵毛柳716)的90个单株和柳树的其他几个种进行PCR 反应,验证了其可行性.     

光皮树果实生长发育及其脂肪酸积累研究

对光皮树果实大小、鲜干重、含水率、含油率及脂肪酸组成进行了研究,结果表明：光皮树果实在整个发育过程呈现“S”曲线变化,果实含油率最大可达到34．23％。果实发育初期含水率最高,而在果实发育后期主要是干物质的积累,含水率较低。在光皮树果实油中,硬脂酸含量最低,维持在2％左右,油酸亚油酸含量最高,不饱和脂肪酸含量在70％以上。整个发育过程,棕榈酸的含量一直降低,导致饱和脂肪酸的含量变化也是递减的。     

15个光皮树无性系早实丰产试验

15个光皮树无性系对比试验在湖南省龙山县可立坡林场和湖南省林业科学院试验林场进行。通过对15个无性系的生物性状和经济性状进行遗传测定、方差分析、主成分析和综合评分。结果表明：无性系早实性和丰产性受环境与遗传的作用存在着明显的差异;无性系主要性状遗传特性表现突出,尤其单株果穗数遗传力高达75．82％,单株鲜果产量遗传增益高达5．54％,无性系综合评分由高到低排序：G-15〉G-13〉G-5〉G—11〉G-14〉G-2〉G-1〉G-3〉G-10〉G-9〉G-12〉G-6〉G-8G-7〉G-4。     

光皮树果实专用型螺旋冷榨机的压榨性能研究

开展了能源植物光皮树果实压榨制油工艺研究,对比了自制硬果核油料专用小型螺旋冷榨机（XLK-2010型）与德国进口的螺旋冷榨机（KOMETCA-59-G型）的压榨效果。重点考察了在出饼孔分别为5mm和6mm的条件下,不同榨机榨轴转速对光皮树果实的生产效率、饼粕残油率和出饼温度的影响。结果表明：在相同条件下,自制的小型螺旋冷榨机与进口设备相比,压榨效率相当,但饼粕残油率和出饼温度略低,设备制造成本大大降低。该研究初步建立了光皮树果实压榨制油工艺参数,为大型专用型冷榨机的研制提供了理论支撑。     

不同密度、海拔及母岩对光皮树生长的影响

以光皮树为试验材料,探讨了不同造林密度、海拔及母岩对光皮树生长的影响。结果表明：光皮树的最佳栽培密度为2．5m×3．0m,适生海拔为900m以下,且在板页岩及石灰岩发育的土壤上生长最好。