枣叶片离体再生体系研究进展

枣树高效、稳定离体叶片再生体系的建立是有关枣树细胞工程学和基因工程学研究的基础.枣叶片离体再生困难,再生频率低,这制约了枣树细胞工程学和基因工程学的发展.为建立高效离体叶片再生体系提供参考,对影响枣离体叶片再生植株的主要因素(如外植体、培养基、培养条件等因素)进行了分析,综述了已取得的研究成果,指出了今后研究的重点.     

中红杨离体叶片植株再生体系建立

以中红杨组培苗的叶片为试验材料,研究了基本培养基、植物生长调节物质浓度、外源添加物和光照条件对离体叶片不定芽再生的影响,并获得了完整的再生植株。结果表明:1)最适基本培养基为MS,最佳植物生长调节剂和外源添加物的组合为0.5 mg·L^-1 6-BA+0.2 mg·L^-1 NAA+30 g·L^-1蔗糖;2)暗培养有利于愈伤组织诱导,光照16 h·d^-1有利于不定芽的诱导,不定芽形成率可达83.3%;3)将叶片再生植株转接到MS+0.2 mg·L^-1 6-BA+0.1 mg·L^-1 NAA培养基中壮苗培养,在1/2 MS+0.2 mg·L^-1 IBA+20 g·L^-1蔗糖+6.5 g·L^-1琼脂培养基诱导生根,生根率96.4%,生根苗大田移栽成活率86.8%。     

华富苹果离体叶片再生的主要影响因素研究

以花药培养选育的富士品种"华富"组培苗的叶片为试材,研究了离体叶片诱导再生不定芽过程中不同激素种类与组合、暗处理时间等因素对不定芽再生率的影响。结果表明:试管苗继代培养3～4代,取顶部嫩叶3～4片,剪除叶片边缘,叶片以近轴面接种到最佳诱导再生培养基MS+TDZ 2.0mg/L+IAA 0.75mg/L+蔗糖30g/L,pH值5.8,黑暗培养10～15d后,转入光照培养条件下,再生率达83.3%～86.7%。再生不定芽分化15～20d后转接到增殖培养基MS+BA 0.5mg/L+IBA 0.1mg/L上,当不定芽长度约2cm时再转接到生根培养基1/2MS+IAA 1.0mg/L+蔗糖2%,15d后,生根率可达95.0%以上。     

云南引进葡萄柚品种叶片营养分析

对引种于云南省普文县的9个葡萄柚品种的叶片营养进行了分析,结果表明,(1)葡萄柚叶片中P与K、Mn、Zn呈极显著正相关关系;K与Mg、Mn、Zn显著相关;Ca与Mg、Mn、Fe呈显著或极显著相关;Mg与Mn、Fe分别呈显著、极显著负相关;Mn与Zn呈极显著正相关,N与Mn呈显著负相关。(2)叶片中只有氮、铁含量适宜,磷、钾、锌含量过高,钙、镁、锰含量有不同程度的缺乏。     

长寿花叶片再生体系的研究

以长寿花红色品种“Rako”为试材,研究建立叶片的离体再生体系。结果表明：激素配比影响叶片的再生能力;叶片背面接触培养基比正面接触培养基更有利于分化再生;用新生幼叶作外植体,再生频率为70％以上,瓶苗生根率为95％,移栽成活率为98％。     

灯盏细辛离体叶片再生植株的研究

以灯盏细辛（Erigeron breiscapus）叶片为外植体,研究不同培养基配方对灯盏细辛离体培养过程中愈伤组织、不定芽形成,壮苗培养和离体植株生根等方面的影响。研究结果表明,低浓度的细胞分裂素与生长素配比可诱导灯盏细辛愈伤组织产生,其中MS＋BA1．00mg／L＋NAA0．50mg／L培养基配方,愈伤组织诱导率达到99．22％;不定芽诱导需要较高浓度的细胞分裂素,适宜培养基MS＋KT4．00mg／L＋IBA0．50mg／L的不定芽诱导率为38．51％,诱导系数为0．49;MS＋BA0．50mg／L＋NAA0．50mg／L＋水解酪蛋白1000．00mg／L＋PVP1000．00mg／L＋GA0．50mg／L培养基可促进不定芽分化生长,形成离体植株;离体植株生根需要高浓度生长素,适宜培养基为1／2MS＋BA0．50mg／L＋NAA3．00mg／L＋IBA3．00mg／L＋活性炭0．30％。     

两个非洲菊品种叶片的离体培养

采用ＭＳ培养基为基本培养基,添加不同浓度及配比的ＮＡＡ和ＢＡ,对两个非洲菊品种“奥林匹克”和“紫鹅绒”的叶片进行离体培养,诱导愈伤组织。结果表明,ＭＳ＋０５ｍｇ／ＬＢＡ＋１５ｍｇ／ＬＮＡＡ培养基诱导效果最好,但不同品种之间存在培养效应差异,其中“奥林匹克”品种较“紫鹅绒”品种诱导速度快。     

花烛的离体培养及再生体系的建立

对花烛进行离体培养和再生体系的研究。以MS作为基本培养基,离体培养花烛的叶柄,结果表明,诱导愈伤组织6-BA4mg/L时诱导效率最高,诱导丛生芽时KT与6-BA的搭配优于2,4-D与NAA的组合。组培苗在MS减半并附加0.5mg/L NAA的培养基上诱导生根最适宜,生根率达100%。     

墨西哥落羽杉离体培养及再生体系的建立

以墨西哥落羽杉的幼苗为起始外植体,研究其离体培养及再生体系的建立.结果表明:幼苗在DCR BA0.5 mg·L-1 IBA 0.2 mg·L-1培养基上诱导分化效果最好,分化频率80%以上,平均每个外植体产芽2～5个;诱导的丛生芽转入DCR Gln 500 mg·L-1培养基中伸长效果最佳;生根培养基为3/4DCR 0.05?,生根率在75%以上.     

影响聊红槐离体叶片再生因子的研究

蔗糖浓度对聊红槐试管苗的增殖倍数的影响较小,但影响试管苗的生长形态,在WPM培养基中蔗糖浓度由原来20 g·L-1增加到60 g·L-1时,叶片由皱褶变为正常,颜色变为深绿.经过以下培养程序可以建立叶片再生体:将聊红槐增殖分化苗接种于WPM(附加6-BA 2.0mg·L-1 NAA0.05 mg·L-1 蔗糖20～60 g·L-1琼脂7.0 g·L-1)上,继代培养20 d,获得分化型试管苗;剪取叶片投入1 mg·L-1Vc无菌水浸泡1～3 min,接入WPM(附加6-BA 2.0 mg·L-1 NAA 0.1 mg·L-1 蔗糖40 g·L-1 琼脂7.0g·L-1)上,光照培养30-40 d,获得剪切口组织脱分化;环境控制(光照时间12 h,暗培养12 h,光强2000 lx,温度25℃;黑暗温度15℃,pH值5.8)下培养20～30 d,诱导出绿色愈伤组织;转接WPM培养基(附加6-BA 4.0 mg·L-1 NAA 0.05 mg·L-1 GA 2 mg·L-1 蔗糖60 g·L-1 琼脂7.0 g·L-1)上,培养后由绿色愈伤组织萌发出不定芽,再生不定芽率为89%.     

群众杨组培体系的研究

以群众杨(Populus popularis 35-44)为材料建立组织培养再生系统。研究表明，外植体取材部位对不定芽的分化率有非常明显的影响，叶片的再生能力较弱，而幼茎的再生能力很强，叶柄的再生能力介于叶片及幼茎之间。因此，无菌苗幼茎是快繁和基因转化的理想外植体。在组培体系建立过程中发现再生不定芽中存在生长优于对照的个体，是否为体细胞无性系变异有待进一步研究。     

地被石竹组织培养再生体系的研究

为建立地被石竹组织培养再生技术体系,以地被石竹的叶片和茎段为外植体,MS为基本培养基,对影响再生的生长调节物质进行了研究。结果表明,茎段比叶片易诱导不定芽;叶片在6-BA 2.0 mg/L上不定芽的再生频率较高;茎段在MS 6-BA 5.0mg/L、MS 6-BA 5.0mg/L IBA 0.1mg/L和MS 6-BA 5.0mg/L IAA0.1mg/L上再生频率较高,分别达75.6%6、5.0%和68.5%。     

柠檬的茎尖培养和植株再生

试验以柠檬的嫩茎尖作外植体，通过组培育苗，培养出完整的柠檬瓶苗并移栽成活。最佳培养基分别为：改良ＭＳ＋６－ＢＡａ＋ＩＢＡｃ诱导茎尖；改良ＭＳ＋６－ＢＡｃ＋ＩＢＡａ培养不定芽增殖；改良ＭＳ＋ＩＢＡｃ＋ＡＢＴａ诱导生根。初次培养采用全暗条件；诱导、增殖阶段适宜温度２５±５℃；生根阶段适宜温度２０±５℃；培养基ｐＨ值均约５．８。结果表明：一个茎尖年繁殖系数为３１２个，移栽成活率达９０％以上。     

Plant regeneration by somatic embryogenesis in Eucalyptus spp.: current status and future perspectives

Forest tree improvement programs benefit from the emergence of new biotechnological strategies that complement plant developmental biology and discovery of genes associated with complex multigenic traits. Recently, significant progress has been made in the area of plant regeneration via somatic embryogenesis (SE) for economically important tree species (e.g. pines). These advances have opened up new scenarios for deployment of new high-performance clonally replicated planting stock to forest plantations and may also be a valuable tool for the development of efficient gene transfer techniques. Although high rates of plant propagation from axillary shoot proliferation can be achieved easily in many Eucalyptus species, even higher multiplication rates through SE have been recorded in other tree species. If the clonal propagation of Eucalyptus through SE proves to be an effective propagation method, it has the potential to meet the increasing industrial demands for high-quality uniform materials and to rapidly capture the benefits of breeding programs. Since 2002 a reproducible protocol for SE induction from mature zygotic embryos of E. globulus has been available. However, for SE to be useful in E. globulus improvement programs, the frequency of SE initiation, maturation, germination and acclimatisation needs to be improved and controlled. If this technology could be extended to elite germplasm, it would become an economically feasible tool for large-scale production and delivery of improved planting stock. This is one of the greatest current challenges in Eucalyptus tissue culture. In this review we update the most important aspects of SE in Eucalyptus with particular emphasis on E. globulus. We highlight both genetic control and the influence of different environmental factors in the SE process (e.g. medium composition, antioxidants, light and plant growth regulators), from induction to plant acclimatisation in both primary and secondary SE.     

柚树叶中提取香精油的新方法——微波辐射法的研究

采用微波辐射法提取柚树叶中的香精油,通过正交实验比较,结果表明最佳的提取条件为:50g干树叶浸泡2h,在360W×40%下,用100mL正己烷萃取50s得油率为1.03%。     

枇杷成熟子叶及叶片不定芽再生研究

枇杷(Eriobotrya japonica)是原产我国的特色树种,我国南方主要果树之一,栽培面积已达10万hm2以上,产量已达30万t以上(林顺权等,2004),超过世界总产量的70%(刘国强等,2000),因此有关枇杷的研究主要集中在我国.研究分别采用茎尖(杨永清等,1983;万志刚等,2000)、胚(王家福等,2000)、胚乳(彭晓军等,2002)、原生质体(林顺权等,1994;1996;1997;Lin et al.,1995)等类型,其中茎尖培养较为成功,胚乳培养最高再生率为18.04%(彭晓军等,2002),胚培养多用于种质资源保存(王家福等,2000).枇杷离体再生目前存在外植体类型单一且再生率低下、培养难度较大等问题,国内外可供参考的研究也较少,建立枇杷离体再生体系难度较大,已成为限制枇杷现代生物技术育种的因素之一,现今未见任何有关枇杷基因转化的报导与此是分不开的.因此有必要进一步拓宽外植体类型,进行其再生系统研究.本研究利用成熟种子子叶及种子苗叶片,试图建立其再生体系.作者在枇杷组织培养中做了大量尝试,多数研究毫无进展,本文所报道的试验结果,实现了成熟子叶和叶片(即使是种子苗叶片)再生报告零的突破,为今后枇杷种子诱变育种获得再生植株以及遗传转化工作打下基础.     

重瓣大岩桐叶片离体培养高频植株再生体系的建立

以重瓣大岩桐叶片为外植体进行离体培养再生体系研究.结果表明:以新展开的嫩叶为外植体最好,芽分化率达96.67%;叶片通过脱分化和再分化直接产生不定芽.6-BA和NAA适宜的配比均可促进芽的诱导和增殖,IBA有利于根的生长;MS 6-BA 2.0mg/L NAA 0.2 mg/L培养基最适合芽的诱导,诱导率达96.55%;增殖培养以带芽愈伤团效果较好,在MS 6-BA 2.0mg/L NAA 0.2 mg/L LH 500 mg/L培养基中,增殖系数达18.在1/4MS IBA 0.5mg/L培养基中生根率高达100%.炼苗移栽成活率达92%.     

笃斯越桔离体培养及植株再生体系的建立

以笃斯越桔新生嫩芽为外植体,应用均匀设计法筛选其最适合的基部直接再生芽苗和生根的培养基,结果表明,最适合的基部直接再生芽苗诱导培养基为:DR+2-ip2.75 mg·L-1 +IAA0.10 mg·L-1,诱导率为99%;生根培养基:MS(改良)+IAA 1.00 mg·L-1 +Kt0.30 mg·L-1,生根率达98%;以再生植株的茎节为材料进行快繁的结果表明,在25 d的一个培养周期内增殖倍数平均达40以上,快繁培养基:MS(改良)+IAA 0.50～1.00 mg·L-1 +Kt0.30 mg·L-1+GA3 0.20 mg·L-1.建立了笃斯越桔的植株再生和快繁体系.