黄秋葵再生体系的建立及毛状根的诱导

[目的]建立黄秋葵的再生体系并诱导其毛状根.[方法]以黄秋葵无菌苗的叶片和茎段为外植体,建立黄秋葵的体细胞再生体系,并利用发根农杆菌A4侵染黄秋葵叶片,诱导毛状根.[结果]愈伤组织的最佳诱导培养基为MS＋ 1.0 mg/L 6-BA ＋0.5 mg/L NAA时;最佳体细胞胚发生培养基为MS ＋0.5 mg/L NAA;毛状根最佳诱导条件为叶片预培养48h,侵染时间6min.[结论]该研究为成功构建黄秋葵遗传转化体系和研究黄秋葵中的次生代谢产物奠定了基础.     

黄秋葵再生体系的建立及毛状根的诱导

[目的]建立黄秋葵的再生体系并诱导其毛状根。[方法]以黄秋葵无菌苗的叶片和茎段为外植体,建立黄秋葵的体细胞再生体系,并利用发根农杆菌A4侵染黄秋葵叶片,诱导毛状根。[结果]愈伤组织的最佳诱导培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA时;最佳体细胞胚发生培养基为MS+0.5 mg/L NAA;毛状根最佳诱导条件为叶片预培养48 h,侵染时间6 min。[结论]该研究为成功构建黄秋葵遗传转化体系和研究黄秋葵中的次生代谢产物奠定了基础。     

老瓜头离体根与毛状根的诱导培养

以老瓜头茎段为外植体筛选诱导离体根再生的最适培养基,以老瓜头茎段和叶片为外植体筛选发根农杆菌介导的毛状根诱导产生的最适条件,为老瓜头毛状根的大量培养及有效成分利用提供前期的试验参考.结果表明,添加NAA的MS培养基诱导老瓜头离体根再生的效果明显,带腋芽茎段的生根率可达到100%,不带腋芽的茎段生根率为67.5%;含有IBA的培养基上,带腋芽的茎段生根率低,只有3.9%,不带腋芽的茎段无根生出.以发根农杆菌A4菌株介导的老瓜头毛状根诱导过程中,用D600 nm=0.8的菌液侵染叶片15 min,诱导率及诱导密度最高,分别为100%和4.6;用D600 nm=0.8的菌液侵染茎段(不带腋芽)15 min时,诱导率最高达46.7%.老瓜头茎段在添加NAA的MS培养基上容易生根;最适转化条件为发根农杆菌A4菌液浓度D600 nm=0.8,侵染15 min,800 mg/L头孢噻肟钠除菌;叶片是遗传转化最适外植体.     

发根农杆菌介导的花生遗传转化体系的建立

[目的]为花生的转基因研究和白芦藜醇的生物技术生产奠定基础。[方法]利用发根农杆菌R1601分别侵染花生的子叶、叶片和茎段,诱导毛状根;利用PCR技术检测毛状根。[结果]叶片和茎段在发根农杆菌R1601侵染后产生毛状根,但叶片诱导率较高,其诱导率达65.6%,更适合作为转化外植体。毛状根除菌后,能在MS培养基上自主生长。PCR扩增表明,T-DNA序列整合进花生的基因组中。[结论]建立了发根农杆菌介导的花生遗传转化体系。     

花生上胚轴为外植体的植株再生及转化研究

以8 d龄花生无菌苗的上胚轴为外植体,进行植株再生和农杆菌介导遗传转化研究.结果表明,上胚轴能高效诱导花生植株再生,外植体在MS 3 mg/L TDZ 6 mg/L 6-BA 1.5 mg/L NAA培养基上能高效诱导不定芽分化,10 d时诱芽率达100%;不定芽接种到MS盐 B5维生素 3mg/L TDZ 0.01%酵母粉培养基中15 d诱导出大量丛生芽;MS 0.5 mg/L NAA培养基较适合诱导丛生芽生根,25 d时生根率达82%.筛选确定35 mg/L潮霉素浓度为转化筛选压,以含AtRD29Ap::GUS融合基因的根癌农杆菌侵染8 d龄上胚轴10 min,共培养3 d,经上述再生体系,以潮霉素筛选获得1株拟转化再生植株.     

发根农杆菌介导的怀地黄遗传转化研究

利用发根农杆菌转化怀地黄组培苗子叶、叶柄和茎段,建立了有效的毛状根培养及其植株再生体系。毛状根可直接从受伤的外植体产生,能在无外源激素的1/2MS固体和液体培养基上自主生长,表现出典型的发根特征。毛状根在附加0.2mg/LKT和3.0mg/L6-BA的1/2MS培养基上能100%形成愈伤组织,51.49%分化出芽;分化芽在1/2MS培养基上100%生根,形成具有矮化、节间短和根系发达等特征的转化再生植株且移栽后生长旺盛。rolB基因PCR和冠瘿碱纸电泳检测证明,农杆菌Ri质粒上的T-DNA整合到怀地黄基因组中并表达,获得转基因怀地黄。     

银条不定芽诱导及高效增殖体系的建立

以"二细一粗"银条茎尖、叶片、茎段组织为外植体,研究了不同激素配比对其不定芽诱导与增殖效果的影响。结果表明,银条叶片组织未能再生;茎尖、茎段组织直接诱导较大不定芽的再生率较低,平均每个外植体最多可诱导不定芽5～7个。而通过茎段先诱导出不定芽芽团,再进行芽的伸长这一途径,每个外植体诱导的不定芽数平均可提高到14.3个,且芽团经5次继代后,增殖再生能力无衰退表现,且再生植株生产潜力非常巨大,是一条较优的再生途径。茎段不定芽芽团诱导培养基以添加6-BA5.0mg/L的MS培养基效果较好;增殖培养基以MS+6-BA4.5mg/L+GA31.0mg/L效果较好;不定芽伸长培养基以MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.4mg/L+GA30.5mg/L较好。     

绿萝组织培养和遗传转化条件优化

为优化绿萝离体再生条件，建立更高效的遗传转化体系，分别以绿萝叶片和叶柄为外植体，比较不同植物生长物质对绿萝不定芽诱导和植株离体再生的影响。并通过PCR技术克隆拟南芥AtFALDH基因，利用农杆菌介导法对绿萝愈伤组织进行遗传转化，比较不同转化条件下绿萝愈伤组织抗性不定芽诱导率。结果表明，绿萝叶柄愈伤组织和不定芽诱导效果均优于叶片。绿萝叶片愈伤组织诱导最适培养基为MS+0.5 mg/L TDZ+0.5 mg/L NAA+1.0 mg/L 6-BA+2.0 mg/L 2,4-D，该培养基下诱导率大约为61.5%；叶柄愈伤组织诱导最适培养基为MS+0.5 mg/L TDZ+0.5 mg/L NAA，该培养基下诱导率达到97.8%。绿萝叶片不定芽诱导最适培养基为MS+3.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA，该培养基下诱导率接近100%；叶柄不定芽诱导最适培养基为MS+3.0 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA，该培养基下诱导率约为100%，但叶柄来源的愈伤组织诱导产生的不定芽数量较多，而且生长更旺盛。生根最适培养基为1/2 MS+0.05 mg/L NAA，该培养基下生根...     

银中杨叶片离体再生体系的建立及Gt5GT7基因的遗传转化

以银中杨幼嫩枝条为外植体,探究不同预培养方式、激素配比对其叶片离体再生体系的影响。结果表明,枝条在MS营养液中预培养3d为最优方式;不定芽诱导最佳培养基为MS+TDZ 0.1 mg/L+NAA 0.02 mg/L,叶片可不经历愈伤组织直接形成丛生芽,最适生根培养基为1/2MS+NAA0.05mg/L+IBA0.01mg/L+活性炭0.6 g/L。利用发根农杆菌介导法,建立Gt5GT7基因的银中杨叶片遗传转化体系,叶片GUS染色结果初步证明,Gt5GT7基因成功整合入银中杨叶片,且最适宜侵染的菌液A600值为0.45~0.6。     

发根农杆菌介导的橡胶树遗传转化体系的建立

[目的]建立新的橡胶树遗传转化体系,为利用基因工程技术研究橡胶树提供基础。[方法]利用发根农杆菌R1601、15834和1.2556 3个株系分别侵染橡胶树热研7-33-97的叶片和茎段,诱导毛状根,并利用PCR技术检测诱导得到的毛状根。[结果]在相同的条件下,仅橡胶树茎段在发根农杆菌R1601侵染后产生毛状根,其诱导率达36.6%;PCR结果表明,T-DNA序列已整合进橡胶树的基因组中。[结论]初步建立了发根农杆菌介导的橡胶树遗传转化体系。     

罗汉果叶片培养及其不定芽形成的细胞学观察

以罗汉果叶片为外植体,探讨了不同基本培养基、不同培养方式、不同植物生长调节剂对不定芽分化的影响,并对不定芽的形成进行了细胞组织学观察。结果表明：基本培养基以改良MS较为适宜,在附加6-BA1．0mg／L＋NAA0．5mg／L＋2,4-D0．5mg／L的固体培养基中,平均每块愈伤组织再生芽高达5．6个。叶片正面接触培养基的培养方式芽分化率达到90．3％。芽苗在1／2MS＋NAA0．2mg／L＋IBA0．5mg／L＋蔗糖20∥L的固体培养基中诱发生根效果最好。硝酸银对不定芽分化具明显效果,分化率达到86．7％。细胞学观察发现,不定芽起源于叶片紧密愈伤组织表层。     

川芎的组织培养技术研究

探索川芎的不同组培条件,优化其诱导和分化培养基。以川芎根、茎段和叶片作外植体进行组织培养,获得了大量的组培苗,建立了相应的植株再生系统。川芎根诱导愈伤组织的最佳培养基为MS+6-BA 0.8 mg/L+NAA 1.2 mg/L;茎段及叶片诱导愈伤组织的最佳培养基均为MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 1.5 mg/L;根愈伤组织分化不定芽的最佳培养基为MS+6-BA 2.2 mg/L+IAA 0.3 mg/L;茎段及叶片愈伤组织分化不定芽的最佳培养基为MS+KT 2.0 mg/L+IAA 0.5 mg/L。根外植体在愈伤组织、分化不定芽和生根方面的诱导率分别为84%、86%和87%;茎段和叶片愈伤组织的诱导率达到92%和96%,其不定芽分化率为98%,生根率为93%。经炼苗后,获得的组培苗的移栽成活率达98%。提出了优化激素搭配的培养基,得到了高效的诱导率、分化率和生根率。     

鲁枣1号组织培养和植株再生体系研究

以鲁枣1号为试材,以正在生长的枣头嫩枝为外植体,进行了芽的诱导和试管苗快繁研究。结果表明,嫩枝茎段上未萌发的主芽在启动培养基(MS+1 mg/L BA+0.2 mg/L IBA+3%蔗糖)上可萌发成新梢,萌发率为54.8%。在相同的启动培养基上,远离培养基的茎段切口处可诱导产生不定芽,不定芽再生率为23.8%。不定芽和主芽新梢在MS+2 mg/L BA+0.4 mg/L IAA+3%蔗糖+6 g/L琼脂培养基上增殖生长良好。试管绿苗在1/4MS+0.5 mg/L IBA+2%蔗糖+6 g/L琼脂培养基上生根率达70%以上。     

芦荟试管微克隆繁育中芽增殖体系的建立

研究了库拉索芦荟茎尖组织、叶盘组织和茎盘组织的离体培养特性,发现芦荟茎尖组织芽增殖效率较低,叶盘组织无再生能力,而茎盘组织是芦荟试管克隆芽增殖系建立的最佳外植体。利用茎盘组织建立微克隆增殖系与茎盘组织在茎段上的位置有关,库拉索短宿茎的中部茎段不定芽形成能力最强。细胞分裂素是诱导库拉索芦荟芽增殖的主要激素,但质量浓度过高,不定芽生长弱,玻璃化现象严重。1.0mg/L6-BA,1.5mg/LKT和0.5mg/LNAA组合的MB培养基(该培养基由MS培养基大量元素、微量元素、铁盐,B5培养基的有机物质构成)是库拉索芦荟试管苗增殖的最佳培养基。     

沙棘优良抗旱品种离体再生体系的建立和优化

本文在沙棘杂交育种工作和抗旱性综合评价研究的基础上,获得了优良抗旱品种雄性植株无性系,并较系统地研究了该无性系通过器官发生途径实现离体培养,建立和优化再生体系所需的条件。结果表明:春季采集生长旺盛的健康新梢,建立无菌培养体系效果最好,试管苗再生可以通过两条途径实现:1)采用培养基WPM+BA0.5mg/L+2,4-D0.5mg/L可以诱导无菌叶片和茎段切口处产生愈伤组织,采用培养基WPM+BA0.4～0.6+IBA0.02～0.03,可以诱导茎段来源的愈伤组织再分化形成大量绿色不定芽点;经继代培养后,不定芽最终可以生长成为具有一定高度和粗度的健壮新梢;在生根培养基1/2WPM+IBA0.5mg/L+NAA0.5mg/L上培养20d后,生根率可以达到100%。2)不定芽也可以直接从茎段或叶片的切口处发生,采用最佳的培养基(WPM+TDZ0.01～0.02mg/L+IBA0.01～0.02mg/L)和适宜的试材类型(从无根组培苗上剪取的茎段和从有根组培苗上剪取的叶盘),不定芽发生率可以达到100%,平均每个茎段上产生的不定芽数为4.45个,叶片上产生3.25个;不定芽再经过增殖、伸长、壮苗(培养基为WPM+BA0.2mg/L+IBA0.05mg/L)后,在生根培养基1/2WPM+IBA0.5mg/L+NAA0.5mg/L上培养20d后亦可100%生根。     

佛甲草的组培快繁技术研究

[目的]通过组织培养技术建立佛甲草快繁体系,为更好满足市场需要、实现其生态景观效益提供材料。[方法]以佛甲草茎段为外植体,研究不同浓度配比的激素对组培过程中不定芽诱导、丛生芽增殖及生根的影响,筛选出各阶段最适培养基。[结果]佛甲草不定芽诱导最适培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+活性炭1.6 g/L;丛生芽增殖最适培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA0.2 mg/L+活性炭1.6 g/L;最佳生根培养基为1/2MS+NAA 0.2 mg/L。[结论]以茎段为途径建立佛甲草快繁体系,能够高效稳定地获得组培苗。     

高山红景天叶片愈伤组织诱导与植株再生

以高山红景天叶片作为外植体,研究了影响愈伤组织诱导、芽增殖、生根的主要因素。结果表明:高山红景天叶片切块诱导愈伤组织的最佳培养基为MS 6-BA 2mg/L NAA0.5mg/L,诱导率达88.33%;高山红景天叶片切块经诱导可产生3种色泽的愈伤组织,其中只有绿色愈伤组织诱芽容易,绿色愈伤组织在附加1mg/L6-BA 0.1mg/LNAA的MS培养基中有利于芽的分化和增殖,培养7周左右,平均每个外植体分化形成的再生小植株数达到21.33个;增殖苗转入1/2MS培养基中生根率高达100%。     

丹参的组织培养及植株再生

丹参为中国重要中草药,临床上广泛用来治疗心血管疾病。研究丹参的组织培养和植株再生。结果表明,在幼茎、幼叶、花蕾等3种外植体中,幼茎为最佳外植体;6-BA,NAA或2,4-D不同激素组合中,以MS＋6-BA0．5mg／L＋2,4-DO．5mg／L为最佳的愈伤组织诱导培养基,MS＋6-BA1．0mg／L＋NAA0．5mg／L为最佳的芽诱导培养基;IAA,IBA和NAA3种激素中,以1／2MS＋IBA0．5mg／L为最佳的丹参试管苗生根培养基。     

驱蚊香草快速繁殖研究

以驱蚊香草的茎尖和带叶腋茎段为外植体,研究探索MS附加不同激素组合对茎尖的萌发、不定芽增殖、生根的影响.结果表明:利用茎尖作为外植体进行起始培养获得无菌苗,KT8.0+IBA1.0组合为最佳;以无菌苗的带叶腋茎段为外植体进一步诱导形成愈伤组织,并分化不定芽,6-BA3.0-4.0+NAA2.0组合的不定芽增殖倍数(10倍)远远高于腋芽直接形成丛生芽的增殖倍数(2.1倍);使用IBA2-5 mg/L诱导生根,生根率达95;～100;.建立了驱蚊香草再生体系.