玉米ZmcpSRP54基因可变剪接分析

cpSRP54基因在植物叶绿体发育中发挥重要作用。本研究用生物信息学方法对玉米ZmcpSRP54蛋白进行了进化分析,利用RT-PCR方法对玉米ZmcpSRP54基因全长cDNA进行了克隆,进而对其进行可变剪接分析。结果表明,玉米ZmcpSRP54蛋白与其它7个物种的cpSRP54蛋白有很高的相似性。鉴定到玉米ZmcpSRP54基因25个不同转录本,1个为标准剪接转录本,其它24个为可变剪接转录本。24个可变剪接转录本共使用了17种非标准剪接位点,4种可变剪接方式,主要以可变的3′端位点、可变的5′端位点和外显子跳跃3种可变剪接方式为主。预测出18种不同长度的ORF,编码18种不同长度的多肽。11个多肽其保守结构域氨基酸序列发生部分缺失,6个多肽其保守结构域氨基酸序列发生全部缺失,1个编码全新的多肽。这些结果将为玉米ZmcpSRP54基因的功能研究提供重要信息。     

大鼠RVLG选择性剪接变异体的鉴定和分析

[目的]确认大鼠RVLG(rat vasa-Iike gene)的第7、8两个内含子的部分片段在卵巢中可能存在选择性剪接现象,进一步检测大鼠RVLG的第7、8两个内含子在卵巢和睾丸中的选择性剪接形式.[方法]从雌雄各5只Wistar大鼠的卵巢和睾丸组织中提取总RNA,反转录成cDNA后作为模板,用PCR扩增RVLG起始密码后约620-690 bp的编码区cDNA.分别选卵巢和睾丸各7个独立克隆测序,将测序结果与大鼠RVL6基因组DNA比对,分析是否有选择性剪接.[结果]大鼠卵巢和睾丸组织中各7个RVLG cDNA 编码区5'端620-690 bp的片段测序结果均存在45 bp和15 bp两处选择性剪接.在7个卵巢RVLG cDNA独立克隆中,有5个仅存45 bp而缺少15 bp,两个仅存15 bp而缺少45 bp;7个睾丸RVLG cDNA独立克隆中,4个仅存在45 bp而缺少15 bp,两个既含有15bp又含有45 bp,一个既没有45 bp也没有15 bp.经与大鼠RVLG基因组DNA序列比对后确认45 bp位于其第7内含子5'端的两个GT之间,15 bp位于第8内含子3'端的两个AG之间,剪掉或保留这两段均符合典型的GT-AG内含子剪接原则,属选择性剪接.[结论]大鼠RVLG的第7、8两个内含子在卵巢和睾丸中均存在多种选择性剪接形式,体内的标准剪接方式应该是第7外显子3'端保留45 bp,第9外显子不保留来自第8内含子的15 bp.     

应用多重RT-PCR检测烟草上的TMV和CMV

根据烟草花叶病毒(TMV)复制酶蛋白和黄瓜花叶病毒(CMV)的外壳蛋白基因序列设计、合成引物,以感病组织和健康组织总RNA为模板,进行多重PCR反应。可以扩增出1.44 kb带和735 bp带,与预期结果完全一致。而健康对照则无任何扩增条带出现。对2005年从广东采集的18份检测样品进行检测,检测出TMV、CMV复合侵染的样本占总样品的44.44%。     

水稻Os-miR390前体基因的克隆、载体构建及转化

【目的】microRNA是一类长度为21~23 nt的非编码小分子RNA,对动植物的正常发育具有非常重要的调节作用。水稻Os-miR390的功能可能与生长素应答相关,拟采用转基因方法研究其生物学功能。【方法】根据水稻Os-miR390的前体RNA结构特点合理设计引物,从水稻基因组中克隆出其前体DNA片段,将其构建在玉米UbiI启动子驱动的表达载体中,并转入水稻。【结果】利用PCR成功地从水稻基因组中扩增出了Os-miR390前体基因,并将其构建在UbiI水稻组成型启动子下。经农杆菌介导,将其成功转入水稻愈伤,获得抗性幼苗,经过PCR检测,得到阳性转基因植株。【结论】T0代转基因植株表现叶片黄化的特征,待T1至T2代性状稳定后结合研究靶基因可深入研究其功能。     

半定量RT-PCR法检测SPRN基因在小鼠各组织中的mRNA表达

[目的]研究SPRN基因在不同组织中的表达水平和机制。[方法]选择3种不同品系的小鼠为试验材料,利用半定量RT-PCR方法,测定不同品系小鼠各组织中SPRN基因的mRNA表达水平,并对其循环次数进行研究。[结果]SPRN基因主要在脑组织中表达,在肺脏和胃中表达量较低,而在淋巴结和脾脏中仅有微量的表达;半定量RT-PCR体系的最佳扩增循环数为23。[结论]成功地建立了检测SPRN基因mRNA表达的半定量RT-PCR方法,该方法具有简便、快速、准确和精密度高等优点。     

棉花GhCAD6基因表达载体构建及GUS基因的瞬时表达

[目的]以GUS基因为报告基因,构建GhCAD6基因的瞬时表达载体.[方法]采用PCR方法和基因枪法.[结果]用PCR法,以pGEM-T-CAD6质粒为模板,获得GhCAD6基因目的片段.然后将其克隆到瞬时表达载体pRTL2-GUS/NIa中,获得由CaMV35S启动子调控目的基因的pGUS-CAD6融合表达载体,使目的基因能够和GUS基因同时表达.采用基因枪法将pGUS-CAD6转化到洋葱表皮细胞中,暗培养24 h,经GUS组织化学染色,检测到多个洋葱细胞呈现蓝色.[结论]构建的瞬时表达载体可在植物细胞中高效表达,为进一步研究棉花GhCAD6基因的功能奠定了实验基础.     

棉花GhCCR4基因表达载体构建及GUS基因的瞬时表达

研究以GUS基因为报告基因,构建CCR4基因的瞬时表达载体,首先酶切带有CCR4基因的 pGEM-T-CCR4载体,获得CCR4基因目的片段,然后将其克隆到瞬时表达载体pGUS/NIa中,获得由CaMV35S启动子调控目的基因的pGUS-CCR4融合表达载体,使目的基因能够和GUS基因同时表达.采用基因枪法将pGUS-CCR4转化到洋葱表皮细胞中,暗培养24 h,经GUS组织化学染色,检测到多个洋葱细胞呈现蓝色,表明构建的瞬时表达载体可在植物细胞中高效表达.为进一步在棉花中研究GhCCR4基因的功能奠定了实验基础.     

TMV和CMV病毒外壳蛋白基因双靶向的RNA干涉载体构建

依据RNA干扰机制构建多病毒基因靶向的RNA干涉双元载体系统,为培育抗病毒复合侵染的番茄品种提供遗传转化载体。以烟草病毒病(TMV)、黄瓜花叶病毒(CMV)病毒外壳蛋白基因作为RNA干扰靶标基因,针对病毒株系间外壳蛋白基因同源区域设计靶序列引物,经RT-PCR获得两段靶标基因的DNA靶序列。借助T载体将两段靶序列连接成一条DNA序列。酶切后正向、反向锚定连接到p UCCRNAi中间载体的克隆位点,形成靶序列在载体中的双向重复结构;重复结构酶切后插入含超强启动子的p C2300-35s-OCS表达载体,重组的表达载体质粒电击转化到只含辅助质粒的根癌农杆菌中,完成RNAi双元载体系统的构建。     

番茄乙烯形成酶基因的克隆及其反义基因的表达载体构建

从成熟的番茄果实中提取总ＲＮＡ,进行ＲＴ－ＰＣＲ扩增合成乙烯形成酶ｃＤＮＡ,并将其克隆至载体Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ的ＥｃｏＲＶ位点,经限制酶谱分析,构建亚克隆进行全序列测定和序列分析。将所克隆基因以反义基因的形式定向重组到载体ｐＳＰＲＯＫ上,同时将带有完整启动子和终止子的标记基因ＢＡＲ基因引入ｐＳＰＲＯＫ中,最终获得表达乙烯形成酶反义基因和ＢＡＲ基因的植物表达载体ｐＢＡＲ－ＥＦＥ。     

微小隐孢子虫miR-2980真核表达载体的构建及初步鉴定

[目的]构建微小隐孢子虫的miR-2980真核表达载体,并进行鉴定。[方法]从微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)基因组DNA扩增cp-miR-2980前体,克隆到pMD18-T载体上,经测序鉴定正确后亚克隆到pVAXⅠ载体上,转染HCT-8细胞,提取细胞总RNA,RT-PCR检测cp-miR-2980的表达。[结果]成功构建了cp-miR-2980真核表达载体pVAX-miR2980,RT-PCR检测证实其能在真核细胞HCT-8中表达。[结论]构建的真核表达载体pVAX-miR2980能在HCT-8细胞中成功表达cp-miR-2980,为后续研究cp-miR-2980的功能奠定了基础。     

烟草花叶病综合防治研究

 经1994～1995年的调查研究及试验,制定了一套防治烟草花叶病的综合防治方案.即:用不带有烟草花叶病毒的土壤育苗,在袋苗期喷施防治植物病毒病的药剂3次,大田期再喷施2次.应用这一方案于666.7hm²烟田进行示范,获得病株率不超过10%,病指不超过5的优良效果.对照区的病株率达60%左右,病指30左右.表明防治效果十分显着.     

漂盘培养液中TMV含量对烟草花叶病发病情况的影响

[目的]为提高烟叶产量和品质提供参考。[方法]以普通烟K326和心叶烟为材料,用12．7、1．27、0．127、0．0127μg/ml烟草花叶病毒（TMV）液对K326进行漂盘培养,培养5、10、15、20、25d后随机取各处理K326叶片得叶片提取液,用各处理提取液接种8叶期心叶烟叶片,调查K326的发病情况及心叶烟的枯斑数。[结果]12．7ug／mlTMV处理K326表现出发病症状,其他处理未表现明显发病症状;随着培养液中TMV浓度的升高,各处理烟叶提取液接种心叶烟产生的枯斑数逐渐增多,且枯斑数随病毒接种时间的延长迅速增加;12．7、1．27μg/mlTMV处理K326叶片提取液接种20d后心叶烟枯斑数最多,0．127、0．0127μg／mlTMV处理K326叶片提取液接种25d后心叶烟枯斑数最多。[结论]烟草花叶病的发病率和病情指数与培养液中TMV的浓度有关。     

真核生物pre-mRNA剪接的研究进展

Pre-mRNA剪接,即把内含子去除并把外显子序列连接成为成熟的mRNA,是基因表达与调控的重要环节之一。本文在概述真核基因mRNA剪接反应机制的基础上,主要讨论pre-mRNA的剪接机器,剪接体如何催化pre-mRNA剪接反应和pre-mRNA选择性剪接等方面的研究进展。     

茄子上烟草花叶病毒的分离与鉴定

１９９１年在沈阳地区茄子花叶病病株上分离到ＳＹ—ＩＳ分离物．对该分离物进行生物学鉴定、血清学检测及多聚酶链反应（ＰＣＲ）测定，确定引起沈阳地区茄子花叶病的毒原种类为烟草花叶病毒（Ｔｏｂａｃｃｏｍｏｓａｉｃｖｉｒｕｓ，ＴＭＶ）的一个株系．此为国内茄子花叶病新的毒原种类。     

烟草普通花叶病毒在烟草品种Ambalema的不同叶龄叶片中的分布

 对TMV高抗的烟草品种Ambalema,经接种TMV后,从植株各叶龄叶片上均测出TMV,证明其抗性不属于抗扩展的抗性。     

2013年万州烟区烟草普通花叶病发生概况及原因分析

立足万州烟区2013年烟草花叶病发生流行的概况和新特点,从花叶病的发病规律出发,结合育苗环节和大田生产环节的各项管理措施,多途径、多角度重点阐述了花叶病的可能发生原因,为今后制定切实有效的花叶病的预防措施,促进万州烟叶产业的健康循环可持续发展和特色烟叶开发提供了理论依据。     

一个新的植物转化用质粒pBG1100的构建和检验

在一个10kb双元载体pMOG402的多克隆酶切位点插入一个3.2kb的CaMV35S启动子/GUS编码区/NOS终止区融合基因,得到了一个13.2kb的新植物转化载体pBG1100.pBG1100经三亲交配法或电激法转入农杆菌菌系EHA105,再用农杆菌介导法转化番茄。转基因番茄组成型的强表达GUS基因,在GUS活性测定时表现出强荧光反应。该质粒可用于：1）建立植物转化系统（如检验新的转化方法或测试新的可转化植物种类）;2）用某一基因的启动子取代CaMV35S启动子,可研究该基因在植物体内的表达;3）将目的基因的编码区取代GUS区,可将目的基因转入植物并使其强表达。     

丙酰紫草素对病毒的钝化作用

烟草花叶病毒与丙酰紫草素结合而失活，用萃取法除去化合物后可使病毒粒子恢复侵染力，并且其沉降系数及光谱特性并不改变。     

中草药剂对烟草普通花叶病毒病的防治效果

研究了几种中草药 (九、反、木 )及 0 .1 %硫酸锌对烟草花叶病毒病的防治效果。结果表明 :中草药九、反、木和 0 .1 %ZnSO4对烟草营养生长、光合性能及根系活力具有积极作用 ,还可以提高脂氧合酶的活性 ,使烟株的花叶病毒病发病率和病情指数下降。其中九、木两处理的效果较好     

烟草抗TMV育种研究进展

增强TMV抗性是烟草抗病育种的重要目标。简要介绍了烟草TMV的发病症状及防治方法,综述了烟草抗TMV的主要抗源、烟草抗TMV育种进展及生物技术在抗TMV育种中的应用,并就今后如何有效开展烟草抗TMV育种提出了建议。