种子转基因检测实验室污染原因排查和分析应对

污染防控是种子转基因检测实验室结果质量控制的核心,对种子转基因检测实验室的污染产生原因进行了回顾性分析,总结了在种子转基因检测污染防控中获取的经验和教训,对不同类型实验样品污染情况进行了深入分析,并提出了对应的解决方法,为加强种子转基因检测实验污染防控获取真实可靠的结果提供参考。     

应用复合PCR检测水稻种子的转基因成分

根据转基因水稻中常用的花椰菜花叶病毒（CaMV）35S启动子、胭脂碱合成酶（NoS）终止子、β-葡萄糖苷酸酶基因（GUS）、潮霉素磷酸转移酶基因（Hpt）、新霉素磷酸转移酶基因（Nptn）和Bt毒蛋白基因（Bt Cry 1 Ab）的序列，设计合成6对不同的引物，用简单PCR方法检测了水稻种子中的转基因成分，同时建立应用一班PCR反应同时扩增检测两种或多种外源基因的复合PCR方法。通过对水稻样品进行PCR扩增，分析、比较复合PCR的检测结果与简单PCR的扩增结果。发现两者结果完全一致。表明复合PCR方法不但可以提高检测效率、降低检测成本，还可以有效防止假阳性，是一种值得推广的方法。     

转基因玉米LAMP检测体系的建立及应用

以转基因抗虫和耐除草剂玉米Bt11为研究材料,建立Bt11环状等温扩增快速检测技术方法.利用一种具有链置换活性的Bst DNA聚合酶,针对Bt11中玉米基因组与外源基因结合处序列,设计4条特异引物,并对反应温度、时间、灵敏度、结果判断方法等参数进行初步探索.结果显示,LAMP检测方法最适反应温度及反应时间分别为65℃和60 min,其灵敏度为常规定性PCR的20倍.LAMP技术检测转基因玉米品系Bt11具有特异性高、快速、简便等优点,具有广阔的应用前景.     

不同品种鹅种蛋品质的比较分析

为了研究不同品种鹅在相同饲养管理条件下其种蛋品质的异同。随机选取浙东白鹅（65周龄）、四川白鹅（76周龄）、豁眼鹅（66周龄）的种蛋各50枚,分别测定其物理特性和化学特性指标。结果表明：三品种间蛋的比重、蛋黄重、蛋壳比例、粗蛋白、粗灰分及蛋壳中钙磷含量差异不显著(P>0.05)。浙东白鹅的蛋重、蛋壳强度、蛋壳厚度、蛋白高度、哈夫单位、蛋黄颜色、蛋白重、蛋白比例、蛋壳重指标均高于四川白鹅与豁眼鹅（P<0.05或P<0.01）;豁眼鹅的蛋形指数、蛋壳颜色、蛋黄比例、粗脂肪含量均高于浙东白鹅与四川白鹅（P<0.05或P<0.01）;四川白鹅的多数指标介于浙东白鹅与豁眼鹅之间。不同品种鹅蛋品质差异为蛋品质的选择改良提供了很好的素材,并为人们日常生活中合理消费鹅蛋提供理论依据。     

水稻不同组织总DNA对叶绿体标记分析的影响

叶绿体DNA标记是水稻分子生物学分析中的常用方法之一。但是水稻叶绿体DNA的提取过程复杂且耗时,为了简化分析步骤,本试验使用CTAB与SDS方法分别提取栽培水稻籼93-11和粳沈农265的叶、根、种子3种组织总DNA,选择3对叶绿体基因间隔区标记(psbA-trnH、petG-trnP和infA-rpl36)以及2对水稻叶绿体籼粳分类标记(ORF100和ORF29-TrnCGCA)进行PCR扩增。结果显示以它们种子、根为模板的扩增效果与叶片模板的扩增效果相一致,并与预期的结果相符合。最后对60份杂草稻种子总DNA进行叶绿体籼粳分类标记扩增分析,结果表明,杂草稻种子总DNA中扩增出目的片段同样能够进行有效的籼粳分类。这在一定程度上简化了水稻叶绿体标记的分析过程,加快分析速度。     

食品中两种沙门氏菌检测方法的比较

目前,我国现行有效的食品安全国家标准中针对食品中沙门氏菌的检测主要是传统的微生物学检测法,该方法操作繁杂,检测周期较长,已难以满足国内外对食品安全检测的要求。通过使用微生物学检测法和PCR法共同检测样品中沙门氏菌,比较两种方法在检测时间和检测结果准确性上的差别。试验结果说明,两种方法都能准确检测出含沙门氏菌的阳性样本,其中PCR法具有检测时间更短、特异性更强、灵敏度更高、操作更简单、成本更低的优势,可用于快速、准确地检测食品中沙门氏菌。     

免疫球蛋白G(IgG)三种提取方法比较

比较3种提取猪血清中免疫球蛋白IgG方法的提取效果。分别用辛酸沉淀法,硫酸铵分步沉淀法,辛酸-硫酸铵沉淀法粗提猪血清免疫球蛋白IgG,并通过SDS-PAGE凝胶电泳、AlphaEaseFC凝胶成像分析软件、Bradford蛋白浓度测定法等比较3种方法的提取纯度和得率,同时比较3种方法的时效性和经济性。辛酸沉淀法提取IgG所用时间最短,只需1h,得率较高但纯度不高;硫酸铵盐析法提取的IgG纯度较高、得率也高,但时间较长;辛酸-硫酸铵分步沉淀法所得IgG纯度很高,但所用时间较长,得率也较低。3种提取方法各有特点,可根据不同的实验条件和目的选择不同的提取方法。     

猪流感病毒M基因核酸探针的制备与应用

以地高辛(DIG)标记猪流感病毒(SIV)M基因的保守片段制成核酸探针,与H1及H3亚型的猪流感病毒(SIV)的cDNA、猪呼吸与繁殖综合征病毒(PRRSV)的cDNA、猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)的DNA、猪瘟病毒(CSFV)cDNA、猪伪狂犬病(PRV)的DNA进行斑点杂交,以检测探针的特异性,结果该探针仅与H1及H3亚型的猪流感病毒(SIV)的cDNA杂交呈阳性,与其余病毒杂交呈阴性;敏感性试验显示,探针最低能检出约5 pg的H3亚型的SIV RT-PCR产物.应用该探针对35份疑似SI临床病料进行检测,结果检出9份阳性,与RT-PCR检测结果一致.本研究结果表明,建立的DIG标记的核酸探针特异性强,敏感性高,适合于对SI的诊断和流行病学调查.     

玉米转基因成分三重实时荧光PCR筛选检测

本研究开发建立了三重实时荧光PCR反应体系对玉米及其加工制品的转基因成分进行高通量快速检测。以玉米单拷贝内源基因adh1(编码乙醇脱氢酶的基因)、启动子(35S promoter from cauliflower mosaic virus, p-35S)和t-NOS终止子(terminator of nopaline synthase gene from Agrobacterium tumefaciens, t-NOS)等常用转基因元件为靶标基因,以转基因玉米MON863、NK603、MON810、Bt11,非转基因玉米粉2019054以及转基因大豆粉,棉花籽和小麦粉等非玉米农作物样本共8份测试样品进行方法特异性分析,对10个玉米品系种子样本和41份玉米食品样品进行方法适用性分析和日常样本筛查检测,用标准曲线法验证方法的检测低限和重复性。结果表明该体系能在转基因阳性样本DNA为模板的一个反应管中同时检出3个靶标基因,在非转基因的玉米样本中仅检出内源基因,检测结果符合标示值;adh1、p-35S和t-NOS三种靶标基因扩增效率分别为96.84%、94.92%和93.80%,线性相关系数分...     

梨园不同蜜蜂的传粉行为比较

为筛选出梨树最佳授粉蜂种,对9 个蜜蜂品种（系）在‘砀山酥梨’园的传粉行为进行了比较。试验从出巢温度、首次携粉回巢温度、梨花粉的采集能力、所采花粉中梨花粉所占比例等方面开展研究。结果发现中华蜜蜂出巢温度8.2℃,显著低于西方蜜蜂,西方蜜蜂在9.2~10℃之间出巢飞行。‘喀阡黑环系’携粉回巢温度为11℃,在所有蜂种中最低;所有蜂种均可在11~13.9℃携粉回巢。‘喀阡黑环系’、卡尼鄂拉2 个蜂种1 h 花粉采集重量分别为7.3、8.1 g,且梨花粉采集重量及比例均高于其他蜂种。‘喀阡黑环 系’、卡尼鄂拉2个蜂种能够适应低温环境采集,且对梨花粉采集能力强,是梨树授粉的优良蜂种。     

烟草核酸数据库管理系统的实现

针对课题在构建烟草cDNA文库的过程中,需要处理大量DNA序列的测序结果和进行相关的序列分析和管理,根据实验的具体要求,采用微软公司新一代的计算机编程语言.NET研究开发相应的管理分析软件,开发出烟草核酸数据库管理系统,软件能完成直接读取相应的测序报告文件,并将结果储存于数据库当中,并且具有远程自动比对功能,对结果进行分析。通过使用该软件系统,完成了对近1千条序列的直接管理和辅助分析,发现了烟草核酸新序列,设计探针以进行分子生物学有关研究,提高了整个实验过程的效率。     

动物核酸疫苗研究近况

核酸疫苗已显示出强大的优越性和生命力,其发展前景巨大。随着研究的不断深入,核酸疫苗的作用机制也在不断地被阐明。外源目的基因的选择、载体的选择、接种组织的预处理等都是影响着核酸疫苗在体内表达的主要因素。由于核酸疫苗具有常规疫苗所没有的优点,但同时核酸疫苗也存在一些尚未解决的问题。随着人们对核酸疫苗的不断改进,相信核酸疫苗无论是在疾病预防还是基因治疗中,将起着更加重要的作用     

养殖与野生大刺鳅不同生长阶段肌肉脂肪酸组成的比较研究

为比较人工养殖大刺鳅与野生大刺鳅肌肉脂肪酸组成的差异,采用气相色谱分析法对养殖和野生大刺鳅幼鱼、鱼种、成鱼肌肉脂肪酸组成及其相对含量进行了检测与分析。结果表明,养殖和野生大刺鳅肌肉中共检出24种脂肪酸,其中不饱和脂肪酸含量较均最高,平均含量分别达到(65.63±1.88)%和(59.03±2.11)%,特别是含有丰富的C18:2、二十二碳六烯酸、二十碳五烯酸和 ,花生四烯酸等多不饱和脂肪酸;ΣUFA/ΣSFA比值从幼鱼到成鱼阶段显上升趋势,且养殖大刺鳅(2.45±0.21)高于野生大刺鳅(1.98±0.15);养殖大刺鳅成鱼阶段的P/S比值达到1.0,超过一般的淡水鱼类。综合分析表明,养殖大刺鳅肌肉品质在脂肪酸组成及均衡性略优于野生大刺鳅,但差异不明显。     

不同倍性苹果花芽发育过程中花芽核酸含量的变化

本实验以苹果二倍体品种富士(Malus pumila cv. Fuji，2n)、三倍体品种乔纳金(Malus pumila cv. Jonagold，3n)和四倍体品种小金海棠(Malus xiaojinensis Cheng et Jiang，4n)为试材，对不同倍性苹果花芽分化过程花芽中核酸的含量进行了比较。结果表明：多倍体与二倍体花芽中DNA、RNA和总核酸含量及DNA/RNA值的动态变化趋势基本相同；同一分化期，多倍体花芽中DNA、RNA和总核酸的含量比二倍体明显增加；但对花芽中RNA/DNA值的研究表明，与二倍体相比，三倍体花芽的RNA/DNA值增高，但增高幅度不大，四倍体花芽的RNA/DNA值却明显降低。     

3个不同品种百香果转录组分析

以黄果、满天星和紫果3个不同品种百香果果皮和果肉为材料,采用2代Illumina高通量测序技术进行转录组测序,获得黄果果皮47 875 830条、果肉44 325 678条,满天星果皮47 019 772条、果肉45 472 434条,紫果果皮48 789 846条、果肉49 372 968条Clean reads片段,包含黄果果皮7 181 374 500 nt、果肉6 648 851 700 nt,满天星果皮7 052 965 800 nt、果肉6 820 865 100 nt,紫果果皮7 318 476 900 nt、果肉7 405 945 200 nt核苷酸序列信息;经拼接组装,分别获得平均长度为1 487 nt的黄果34 968条Unigene片段,平均长度1 361 nt的满天星41 896条Unigene片段和平均长度1 329 nt的紫果41 701条Unigene片段。GO富集分析表明,在生物过程、细胞组分和分子功能3大类别上,黄果、满天星和紫果间均分布有差异基因。KEGG富集分析表明,黄果与满天星在细胞胞吞作用过程中存在较大差异,黄果与紫果在玉米素生物合成和糖酵解途径中差异基因富集显著,满天星与紫果在缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸生物合成中存在较大差异。     

3种提取剂对不同类型土壤重金属的提取效果

为了研究不同提取剂对不同类型土壤重金属的提取效果,选用3种提取剂(DTPA、HCl、EDTA)提取2种母质（红壤、紫色土）发育的稻田土壤（黄泥田、紫泥田）重金属Zn、Pb、Cd和Cu的含量,比较它们的提取效果。结果表明,提取剂的提取量和提取率大小有明显差异。DTPA提取Zn、Pb、Cd、Cu的含量均值分别为135.88、167.20、5.09、17.63 mg/kg;HCl提取Zn、Pb、Cd、Cu的含量均值分别为244.79、299.97、7.74、28.75 mg/kg;EDTA提取Zn、Pb、Cd、Cu的含量均值分别为220.31、490.33、7.22、35.46 mg/kg。3种提取剂对重金属Zn、Cd提取量大小为HCl>EDTA>DTPA,对Pb、Cu提取量大小为EDTA>HCl>DTPA。从元素的提取率看,除黄泥田DTPA提取为Cd>Cu>Pb>Zn外,一般均为Cd>Pb> Cu>Zn。就不同土壤类型而言,黄泥田重金属提取率大小均为EDTA>HCl>DTPA;紫泥田Zn、Cd提取率大小为HCl>EDTA>DTPA,而Pb、Cu为EDTA>HCl>DTPA。黄泥田、紫泥田提取Pb、Cu的提取率均为EDTA>HCl>DTPA。因此不同类型土壤应该使用不同的提取剂,暗示适当提取剂的提取量可以预测糙米中重金属的累积量。     

高产核酸酶菌株的分离、筛选与诱变育种

为获得具有自主知识产权,满足生产需求的高产核酸酶P1的菌株。以2%RNA作为唯一碳、氮源的筛选培养基,从桔园土壤中初步筛选出65株具有产生核酸酶P1的菌株。结果表明：以其中酶活较高的YC34号菌株为出发菌株,该菌株的初始酶活性为127.3 U/mL,通过紫外诱变、微波诱变、LiCl诱变3种方式依次进行复合诱变处理后,获得酶活最高的突变株YC34-1,其粗发酵液的酶活达到360.7 U/mL,较原始出发菌株酶活增长了183.3%,具有良好的应用开发潜力。经初步形态学鉴定该菌株可归属为青霉属柑桔青霉(Penicillium citrinum)。     

不同类型烟草叶片挥发物比较分析

为探究不同类型烟草叶片挥发物成分成分差异,[方法]利用顶空动态吸附法收集烟草挥发物,采用气相色谱质谱联用技术对其组分及含量进行分析。[结果]结果表明,不同类型烟草叶片挥发物组分和含量存在差异,豫烟11共检测到51种挥发物,8306共检测到50种挥发物,云烟87共检测到48种挥发物,粤烟98共检测到44种挥发物,K326共检测到43种挥发物,晒黄烟共检测到34种挥发物,香料烟共检测到25种挥发物。其中,烤烟鉴定出17种特有化合物。晒黄烟鉴定出6种特有化合物。香料烟鉴定出4种特有化合物。[结论]这些化合物的发现与不同类型烟草间的香味风格特征的形成密切相关。     

河南省三大粮食作物生产比较优势分析

河南省是中国粮食生产大省,在国家粮食安全中占有重要地位。为探讨河南省国家粮食核心区建设时期小麦、玉米、水稻三大粮食作物在省内的优势产区,以比较优势理论为基础,应用综合比较优势指数法,收集河南省18个地市三大粮食作物的生产数据,测算并系统分析了三大粮食作物河南省相对于中国平均水平及河南省内18地市相对于河南省平均水平的效率优势指数、规模优势指数和综合优势指数。结果表明,河南省三大粮食作物生产全省存在比较优势差异,共有水稻优势产区3个,小麦优势产区 9个,玉米优势产区13个。     

不同均质方法对乳品体系影响因子的比较研究

在乳制品加工中,目前应用的主要均质方法有高压均质、超声波均质、高剪切均质,这3种均质方法各有其特点。对3种均质方法在乳品加工中的应用进行了比较研究,以为乳制品加工业提供理论依据。