割手密(S.spontanuem L.)SSR-PCR反应体系的优化

以广西割手密(S.spontanuem L.)79-9为材料,利用SDS法提取基因组DNA,采用正交试验设计优化建立了一套适用于割手密的SSR-PCR反应体系,即在25μL反应体系中包含10×PCR Buffer(Mg2+free)、模板DNA30 ng、Mg2+2.5 mmol/L、dNTP 0.24 μmol/L、引物0.6μmol/L、Taq DNA聚合酶1.5 U.运用该体系对其它4份割手密进行了检验,扩增带型清晰,证明该体系稳定可靠.     

悬铃木AFLP分子标记技术体系的建立

采用改进的CTAB方法,从悬铃木叶片中提取基因组DNA,所得DNA样品的A260/A280值为1.7～1.9,琼脂糖凝胶电泳主带清晰、DNA纯度高、较少降解、不含酶反应抑制剂,可被MseⅠ和PstⅠ两种限制性内切酶完全酶切,从20对引物中筛选出6对带型分布均匀、多态性高且分辨能力强的引物,分别为: M74P50,M89P57,M74P26,M36P16,M80P66,M23P66.通过酶切连接、预扩增、选择性扩增、银染等试验过程,成功建立了悬铃木AP反应体系,得到了清晰的指纹图谱,试验结果重复性好.     

小麦锈菌AFLP分子标记技术体系的建立

以小麦条锈菌、杆锈菌、叶锈菌的夏孢子为材料,通过DNA提取、酶切、PCR扩增、凝胶电泳等系列程序摸索和优化,建立了锈菌的AFLP分子标记体系如下:40μl酶切体系中采用了EcoRI、TrulI各5U,37℃3h,65℃3h双酶切4μl100ng/μl的DNA;然后加入10μl连接混合液22℃连接3h,16℃10h;连接产物5μl,10μMEcoRI、10μMTru1I预扩引物各1.5μl,PCR反应液25μl,ddH2O17μl进行预扩;预扩产物稀释20倍后取5μl,50ng/μlEcoRI、Tru1I选扩引物各1μl,PCR反应液10μl,ddH2O3μl体系进行选择性扩增,为小麦锈病和其他真菌性病害的分子标记克隆及抗病育种的辅助选择提供了有力工具。     

木霉AFLP分子标记技术体系的建立

以摇床培养的木霉菌丝为材料,采用液氮研磨等方法提取到高质量的基因组DNA,能够用于AFLP实验分析,探索和优化酶切-连接反应、预扩增和选择性扩增反应过程中的关键因素,建立了适合木霉AFLP的最佳试验体系和反应条件。利用该技术体系对不同时期保存的菌株及融合子进行AFLP指纹分析,发现不同时期保存的同一菌株指纹相同,融合子指纹兼有亲本菌株的特性。通过对木霉AFLP条件的探索和研究,建立了木霉基因组AFLP反应体系,得到的扩增多态性条带完全能够用于木霉遗传稳定性和多样性分析。     

割手密硫酸 解糖化的研究

割手密是生物质产量较高的纤维素类植物,作为能源植物受到国内外的普遍关注。利用纤维素类材料生产燃料乙醇的过程中,秸秆的水解糖化是关键步骤。以割手密为试验材料进行单因素和正交试验研究浓硫酸和稀硫酸的浓度、试验时间、试验温度、液固比对割手密糖化处理的影响,筛选出浓硫酸和稀硫酸处理的最佳条件,将两段硫酸处理的最佳反应条件结合,即浓硫酸水解,液固比42∶1、浓硫酸浓度70%、水浴时间20min、水浴温度55℃;稀硫酸水解,液固比115∶1、浓硫酸浓度5.5%、水解时间155min、水解温度100℃。在此工艺中,还原糖得率为48.78%。该两段水解糖化法条件温和、操作简单,不需要高压,成本低廉,还原糖得率高,为割手密的进一步有效利用奠定了基础。     

甘蔗割手密无性系抗旱性鉴定

以割手密不同无性系为参试材料,研究水分胁迫对割手密伸长期的抗旱性影响,测定苗期植株的叶面积,正常水分和水分胁迫下植株叶片的脯氨酸、可溶性糖、丙二醛含量,质膜透性、含水量、束缚水含量、失水速率、根系活力、根 /冠比,计算各生理生化指标的耐旱系数。结果表明,不同无性系间各指标的耐旱系数不同,利用模糊隶属函数对割手密抗旱性进行评价表明割手密不同无性系间的抗旱性不同。相关分析表明割手密不同无性系间的抗旱性与植株叶面积呈显著负相关 (r=-0. 474,P<0.05)。     

割手密RAPD指纹图谱分析

 选用6个随机引物,对采自我国不同纬度、不同海拔高度、具有不同染色体数目和形态特征的32份割手密无性系作了多态性分析.并对各无性系的指纹图谱进行了聚类和相似性分析.结果表明,割手密野生种具有丰富的RAPD多态性,供试的32份割手密无性系可划分为9个类群.     

番茄AFLP技术体系的优化与建立

以番茄为材料,通过对扩增长度多态性(AFLP)反应体系中的几个关键参数进行优化,建立了适合于番茄的AFLP分子标记体系。结果表明,用于反应的DNA采用CTAB法提取较好,酶切的基因组DNA以100 ng为宜,酶切-连接采用一步法,37℃条件下进行,反应时间为10 h,预扩增产物的稀释倍数以30倍为宜,采用优化好的体系,29对引物组合在两份供试材料均可扩增出稳定清晰的带纹60～100条。本研究为番茄的分子标记克隆及抗病育种的辅助选择提供了有力工具。     

福建割手密与竹蔗的酯酶同工酶研究

分析了49份福建割手密和2份竹蔗样品，结果表明福建割手密的变异类型丰富，共呈现8条的酯酶同工酶带，它们组成19个酶谱类型。6A是它们的共同酶带，4A，10A为基本酶带。具有（4，6，10）A组成的酶谱是其基本类型。认为福建割手密有相似的起源或进化过程，并具有类型的多样性。酶谱的出现与其地域分布及海拔位置有关。福建竹蔗均呈现3条酶带并组成（2，4，6）A酶谱。     

辣椒AFLP技术体系的建立与优化

以辣椒细胞质雄性不育系21A及其相应的保持系21B为材料,通过对影响辣椒AFLP技术体系的若干关键因素,如提取DNA的方法、酶切与连接、预扩增和选择性扩增以及电泳和染色条件等的研究,建立了经优化的适合于辣椒的AFLP分子标记技术体系。采用该体系,对辣椒进行AFLP分析,能够得到清晰稳定的分子标记图谱,为今后利用AFLP技术进行辣椒细胞质雄性不育基因的定位奠定了技术基础。     

电解质渗漏法测定割手密抗寒性的研究

用电解质渗漏法对云南割手密50个无性系进行了抗寒性测定,结果表明,割手密的电解质渗漏率:(1)随原生长地点海拔的上升而下降,相关系数r=-0.669,p<0.01;(2)随原生长地点纬度增高而降低,相关系数r=-0.551,p<0.01;在相近的纬度范围内,决定电解质渗漏率高低的因子是海拔;在相近的海拔范围内,决定电解质渗漏率高低的因子是纬度。     

割手密耐铝毒基因型筛选及其筛选指标的研究

[目的]通过水培试验,研究了采自华南地区20份割手密种质对铝胁迫的响应。[方法]比较各材料的相对耐铝值及其和综合耐铝系数的相关性分析。[结果]确定了相对根长、相对地上干物质和相对地下干物质,可作为割手密耐酸铝的的重要筛选指标。[结论]根据筛选体系,计算各材料的综合耐铝系数,筛选出A13、A20、A23等耐铝毒的割手密基因型和A31、A24、A50等对铝胁迫敏感的割手密基因型。     

苹果性状标记AFLP技术体系的建立和优化

以“舞姿”苹果与平邑甜茶的杂交后代个体为试材,结合工作实践及当前最新研究进展,对AFLP分析过程中模板DNA的制备、基因组DNA的酶切与连接、酶切连接产物的预扩增与选择性扩增、扩增产物的变性、聚丙烯酰胺凝胶电泳等过程中易出现的问题及其解决方法作了对比研究,建立了一套适合于标记苹果农艺性状的AFLP分子标记体系。该体系在应用于苹果的AFLP研究时,能够得到清晰的遗传标记图谱,试验结果重复性好,稳定可靠。     

长豇豆AFLP技术体系的构建与优化

通过对影响长豇豆AFLP分析技术体系的若干关键因素,如DNA的提取方法、酶切与连接时间、预扩增和选择性扩增以及电泳和染色条件等的研究,建立一套经优化的长豇豆AFLP分析技术体系。应用该体系进行长豇豆AFLP分析,能够得到清晰的分子标记图谱,且结果稳定,重复性好。     

隐性核不育芝麻AFLP反应体系的优化

以芝麻细胞核雄性不育系95ms-5为材料,对AFLP反应体系中的酶切连接、预扩增和选择性扩增中的关键性因素进行了优化。结果表明,在模板DNA质量浓度为200ng/μL、37℃酶切连接6h的情况下,预扩增中最佳Mg2+浓度为1.0mmol/L,dNTP最佳浓度为0.3mmol/L,Taq酶量以0.5U为宜,预扩增引物终浓度为0.4mmol/L;选择性扩增中,预扩增产物稀释10倍后,以Mg2+0.8mmol/L、dNTP 0.2mmol/L、Taq酶1.0U、选扩引物0.6mmol/L为宜。     

割手密(Saccharum spontaneum L.)幼叶的组织培养

 研究了从割手密幼叶诱导愈伤组织的条件,试验表明,培养基以MS附加2,4-D1～4mg/L为佳,所接种的幼叶以4cm以内为适宜的区段.不同材料在诱导愈伤组织和分化成苗方面都表现出明显的差异,说明云南的割手密在生理和遗传上存在着丰富的种内变异.     

国内外割手密种质资源的研究进展

割手密是甘蔗栽培品种的重要原始亲本之一,在甘蔗杂交育种方面具有重要的利用价值,近年来也作为潜力能源植物进行研究。该研究综述了割手密在形态学、解剖学、细胞学、蛋白质和分子等方面的最新研究进展,并且分析了目前研究中存在的突出问题,展望了今后割手密资源的研究方向。     

电解质渗漏法测定割手密抗寒性的研究

 用电解质渗漏法对云南割手密50个无性系进行了抗寒性测定,结果表明,割手密的电解质渗漏率:(1)随原生长地点海拔的上升而下降,相关系数r=-0.669,p<0.01;(2)随原生长地点纬度增高而降低,相关系数r=-0.551,p<0.01;在相近的纬度范围内,决定电解质渗漏率高低的因子是海拔;在相近的海拔范围内,决定电解质渗漏率高低的因子是纬度。     

南瓜AFLP反应体系的建立与优化

以印度南瓜矮生等基因系yd为材料,从叶片中提取基因组DNA,对酶切、连接、预扩、选扩反应体系及银染方法进行优化研究,建立高效稳定的南瓜AFLP反应体系,即反应体系为DNA模板量500 ng、37C酶节5 h、连接3 h、预扩产物稀释50倍及Mg2+1.5 mmoL/L、dNTP 0.19 mmoL/L的效果最好.     

割手密初级核心种质取样策略研究

以国家甘蔗种质资源圃中596份割手密为研究对象,根据21个质量性状和6个数量性状,从分组原则、组内取样比例、组内取样方法3个层次探讨构建割手密初级核心种质的最佳取样策略,共形成50种取样策略;同时设10个总体取样量梯度,确定最佳的总体取样量.分组原则以采集地、海拔、茎径、纬度、生态区域、总体聚类进行分组及不分组的大随机...