鱼类胃肠道内分泌细胞的研究进展

免疫组织化学技术是近年来迅速发展起来的一门新的边缘学科 ,它具有灵敏度高、特异性强、定位准确和应用广泛等优点 ,能够对胃肠道内分泌细胞进行准确地鉴别和定位[1] 。该技术的应用为鱼类胃肠道内分泌细胞的研究开辟了有效途径 ;同时对鱼类胃肠道内分泌细胞的不断研究也推动了免疫组织化学技术的进一步发展。迄今为止 ,国内外学者对鱼类胃肠道内分泌细胞的鉴别和定位已作了大量工作。1　鱼类胃肠道内分泌细胞的种类对鱼类胃肠道内分泌细胞进行鉴别和定位均使用哺乳动物的抗血清 ,迄今为止还未发现使用专门的鱼类抗血清对鱼类胃肠道内分泌…     

鱼类五种特殊细胞的结构与功能

<正> 众所周知,鱼类是生活在水中的变温脊椎动物,由于它们生活环境的特殊性,使得鱼类具备一些与其他动物不同的细胞,这些细胞是鱼类一些生理活动的基础。 1 茂氏细胞(Mauthner cell) 茂氏细胞是硬骨鱼类延脑内一对大神经元,细胞体有许多突触小体。大多数属于第8对脑神经(听神经),听神经收集外界环境声波振动刺激迅速传到鱼的尾部肌肉产生快速运动,出现惊吓     

草鱼胸腺细胞培养方法的初步研究

草鱼胸腺细胞培养方法主要有机械分散法和消化分离法。胸腺细胞绝大部分是由大、中、小淋巴细胞组成．而淋巴细胞为悬浮细胞．培养悬浮细胞时由于细胞中期分裂相与培养的细胞不易区分，其传代时阃只能凭知胞计数推测其密度来确定是否可以进行细胞传代。在培养草鱼胸腺细胞时．在细胞培养液中加入PHA．观察培养结果可发现能使草鱼胸腺细胞成团生长．增殖旺盛。     

草鱼、青鱼体外培养细胞的属间、亚科间核移植

自King和Briggs 1952年首次报道了细胞核移植在两栖类上获得成功以来,这项卓绝的技术引起国内外学者的极大重视和兴趣,并逐渐应用到两栖类以外的其它动物。在我国,童第周教授等1963年首次应用此项技术于鱼类。他们在金鱼和鳑鮍鱼上的开拓性实验,证明鱼类细胞核同样可以进行核移植。七十年代起,我国在鱼类细胞核移植方面的研究得到迅速发展,并逐渐以理论研究走向实际应用。在鲫、鲤,鲢、草鱼、团头鲂等鱼类上进行研究,得到了几个不同组合的移核鱼或胚胎,其中某些移核杂交鱼是可育的。为了进行鱼类遗传改良研究,作者在草鱼、青鱼、团头鲂上着手进行了细胞核的移植,利用体外长期培养的体细胞作供体,在属间和亚科间鱼类上作移核实验,得到了不同发育期的胚胎。现将此工作作简要报道。     

鲤鱼尾鳍细胞的体外培养及其生长状态的研究

采用组织块培养法，对鲤鱼尾鳍组织进行培养，在28℃温度下，用添加20％胎牛血清的M199培养基进行培养，在此过程中，对培养的细胞进行观察及研究，描述了细胞形态及其它相关细胞生物学特征。     

鳗鲡血液细胞的研究

本文通过鳗鲡血液有形成份Ｗｒｉｇｈｔ染色并进行显微分析，辩识其红血细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱生粒细胞、小淋巴细胞、单核细胞和血栓细胞并加以分析。     

海藻Marine Algae

海藻,顾名思义,是指生活在海洋中的藻类,是含有叶绿素和其他辅助色素的低等自养型植物。植物体为单细胞、单细胞群体或多细胞。多细胞的藻类一般构造也比较简单,无根、茎、叶的分化,不能开花结果。     

中华鳖５种组织细胞的离体培养实验

采用组织块移植培养技术,对来源于中华鳖(Trionyx sinesis)肝脏、脾脏、肾脏、心脏、皮肤及裙边组织细胞进行了原代培养,细胞均可从组织块中迁出并生长成单层细胞.对原代培养的单层细胞用胰酶-EDTA消化后传代培养,初步建立了可连续传代的中华鳖肝脏、脾脏、肾脏、心脏及皮肤组织细胞系;还对细胞的培养条件、冷冻保藏与复苏、染色体数目等进行了研究,初步确定中华鳖细胞培养的条件为32℃,MEME或R1640培养基,血清浓度为20%(V/V).二甲基亚砜(DMSO)冻存保藏后,细胞复苏生长良好,中华鳖细胞染色体数目为2n=66.     

牙鲆的淋巴细胞表面抗原

关于鱼类淋巴细胞的异质性的研究开始于20世纪70年代,80年代以后才利用抗IgM单克隆抗体证明硬骨鱼具有T/B样淋巴细胞[1-5]。鱼类的T淋巴细胞具有和哺乳动物T细胞相似的功能,如:对同种移植产生的排斥反应和细胞增殖反应。虽然鱼类的T样淋巴细胞还没有象哺乳动物那样建立起以表面多肽的单克隆抗体进行分离鉴定的CD系统,但在硬骨鱼中已发现了编码TCR分子和MHC分子的基因,随着DNA测序技术的迅速发展,美国、法国和日本等国家的几个实验室[6-10]在20世纪90年代开展了鱼类TCR基因多样性和组织相容性抗原(MHC)在脊椎动物系统发育中进化关…     

家畜睾丸三种主要细胞的研究现状

睾丸最重要的功能在于分泌激素和产生精子,因此睾丸的机能直接影响公畜的繁殖性能,从而影响畜牧生产和经济效益。睾丸内3种主要的细胞决定了睾丸的组织结构和机能。本文旨在介绍目前国内外对睾丸3种主要细胞机能的研究现状,为公畜特别是种用公畜繁殖性能测评等畜牧生产实践提供一定的参考依据。     

草鱼mst2在免疫应答中的作用机制

为了初步阐明草鱼哺乳动物STE20样蛋白激酶2基因(mammalian sterile 20-like kinase 2, mst2)在机体免疫中的作用机制,实验采用RNA-Seq技术对干扰mst2后经脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)应激的草鱼肾细胞系(Ctenopharyngodon idella kidney cell lines,CIK)进行了转录组测序与验证分析。测序原始数据经De novo拼接与组装后共获得22 374个独立功能基因(unigenes),其中已知功能基因为21 199个,预测的新基因为1 175个。干扰mst2后经LPS应激的unigenes表达差异分析表明,对照组与实验组之间共存在38个差异基因(differentially expressed genes,DEGs),其中上调基因16个,下调基因22个。利用实时荧光定量PCR技术(quantitative real-time PCR, qRT-PCR)对38个DEGs的RNASeq结果进行验证,结果显示,qRT-PCR和RNA-Seq分析一致,说明RNA-Seq分析结果可靠。采用RNA干扰技术干扰mst2后经LPS处理,CIK细胞转录组中DEGs参与免疫代谢的途径主要有MAPK信号通路、内吞作用途径、自噬途径和细胞因子受体相互作用途径。凋亡相关基因检测结果显示,干扰mst2并经LPS处理后,促凋亡基因(fas、bad1、bad2、caspase-3、caspase-8和caspase-9)转录水平上调,抗凋亡基因(bcl2)转录水平下调,证明干扰mst2后经LPS处理会诱发细胞发生凋亡。综上所述,mst2可通过调控凋亡相关过程参与机体免疫反应。本研究结果初步阐明了草鱼mst2参与机体免疫应答的分子机理,可为草鱼细菌性疾病防控提供一定的基础理论参考。     

草鱼呼肠孤病毒诱导ＦＨＭ细胞发生凋亡的研究

为探究草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus,GCRV)能否引起细胞凋亡,采用GCRV分别感染草鱼肾细胞(Ctenopharyngodon idellus kidney cell,CIK)和胖头鲤细胞(Fathead minnow cell,FHM),在不同时间观察细胞病变效应.结果表明,GCRV能感染这2种细胞并引起细胞病变,且CIK细胞对GCRV更为敏感;GCRV感染可以导致CIK细胞的快速融合并裂解,而FHM细胞感染后则很少有细胞融合;利用DAPI、Annexin V-FITC染色和末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP原位切口末端标记[terminal deoxynucleotidyl transferase(TdT) dUTP nick end labeling,TUNEL]技术进一步证实GCRV能够诱导FHM细胞发生凋亡,但不诱导CIK细胞发生凋亡.本研究发现GCRV可以诱导FHM细胞发生凋亡,并推测GCRV在感染不同类型的细胞时,可以通过不同机制促使细胞死亡,从而为进一步研究GCRV的致病机制提供线索.     

鱼类非特异性细胞毒性细胞（NCC）的研究进展

自然杀伤细胞(NK)进化上的前体细胞在鱼类中被称作非特异性细胞毒性细胞(NCC),主要来源于血液和淋巴器官,是防御细菌、病毒、寄生性原生动物等入侵的第一道防线,在非特异性免疫中起重要作用,还具有体外杀伤肿瘤细胞的功能。近年来免疫荧光显微镜技术表明NCAMP-1和NCCRP-1两种受体蛋白均表达于NCC膜上,并且这种免疫细胞从鱼类到哺乳动物上的进化是保守的,这些膜蛋白在鱼类炎症反应期可能通过颗粒胞吐途径参与抗菌的先天性免疫。本文就NCC的分离鉴定、形态结构、功能受体作用机制等方面的研究成果作一综述,旨在为深入研究NCC在鱼类先天性防御中的作用提供依据。     

文蛤肝细胞超微结构研究

应用透射电镜技术研究了文蛤（Meretrix meretrix)肝脏的细胞组成，结果表明，文蛤肝脏主要由4种细胞构成；分泌细胞（B细胞）、储存细胞（R细胞）、吸收细胞（F细胞）和胚细胞（E细胞），描述了4种细胞的超微结构，根据观察结果和各种细胞的结构特点，指出文蛤肝脏细胞的功能，并探讨了肝脏细胞的分化序列。     

细胞缓冲保养液PTL-G促进手术蚌创口愈合研究

细胞缓冲保养液PTL-G对离体待植的细胞小片具有酸碱平衡的生理作用,能促进外套膜上皮细胞的增殖,加速伤口的愈合。本试验结果表明,PTL-G缓冲保养液处理离体待植的细胞小片,能提高细胞小片移植成活率和加速外套膜插核创口的愈合,与常规保养液相比,具有非常显著的意义。     

不同冻存液对长江鲟鳍条细胞冷冻效果的影响

为了探究不同浓度配比冻存液对长江鲟(Acipenser dabryanus)鳍条细胞(Dabry′s sturgeon fin-derived cells,DSFCs)冷冻效果的影响,选择传代培养处于对数生长期的DSFCs,将第8代DSFCs置于液氮(-196℃)中冻存。根据冻存液中培养基(MEM)、胎牛血清(Fetal bovine serum,FBS)及二甲基亚砜(Dimethyl sulfoxide,DMSO)的配比不同,分为8个实验组:①含不同浓度DMSO配比实验组:5%DMSO+45%MEM+50%FBS,10%DMSO+40%MEM+50%FBS,20%DMSO+30%MEM+50%FBS;②含不同浓度FBS配比实验组:10%DMSO+90%FBS+0%MEM,10%DMSO+70%FBS+20%MEM,10%DMSO+50%FBS+40%MEM,10%DMSO+30%FBS+60%MEM,10%DMSO+10%FBS+80%MEM,对各组分采用形态学观察、CCK-8法、流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期,综合分析不同冻存液组分对DSFCs冻存后活力的影响。结果显示,不同浓度DMSO配比实验组中,DMSO的浓度为20%时,细胞复苏后难以贴壁,存活率下降非常明显,仅为38.3%;而5%和10%DMSO细胞生长状态良好,存活率分别为80.2%和78.7%。不同浓度FBS配比实验组中,90%、30%和10%实验组细胞活力显著高于70%和50%实验组。FBS浓度为30%和10%的冻存组细胞凋亡率显著高于90%的冻存组(8.24%,15.35%vs 3.54%),3组之间相互比较有明显差异(P<0.05);细胞周期结果显示,与FBS浓度为90%的冻存组比较,FBS浓度为30%和10%冻存组G 0/G 1期细胞比例均明显增加(P<0.05),S期和G 2+M期细胞比例均显著降低(P<0.05),FBS浓度30%与10%冻存组比较差异不明显(P>0.05)。研究表明,长江鲟细胞的长期冷冻保存宜采用稍低浓度的DMSO(5%~10%)和高浓度的FBS。     

维生素C对异育银鲫原代肝脏细胞活性及抗敌百虫氧化胁迫的影响

南京农业大学动物科技学院,江苏省水产动物营养重点实验室,江苏南京210095用含不同浓度维生素C(0,50,100,200,400和800 μmol/L)的培养液培养异育银鲫原代肝脏细胞,待细胞融合后,测定细胞活性、细胞内维生素C含量,乳酸脱氢酶(LDH)活性.再将用维生素C培养的肝脏细胞经敌百虫胁迫24 h,测定细胞内总抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽-S-转移酶(GST)和丁酰胆碱酯酶(B-ChE)活性以及细胞内细胞色素P450( CYP450)含量.结果表明,与未添加维生素C组相比,在100 μmol/L的维生素C剂量组,肝脏细胞活性显著高于较其它剂量组(P＜0.05);细胞内维生素C的含量随着培养液中维生素C的增加而增加,且差异显著(P＜0.05);在800 μmol/L维生素C剂量组,细胞LDH活性显著增加(P＜0.05),但是其它剂量组均无显著变化.肝脏细胞经敌百虫胁迫后,在50、100和200μmol/L维生素C剂量组,细胞T-AOC能力,GST活性,B-ChE活性和CYP450含量显著升高(P＜0.05),细胞解毒和抗氧化能力增强;但是当维生素C的剂量为400和800 μmol/L时,细胞T-AOC能力和GST活性降低.综上所述,在体外细胞培养液中添加在50 ～ 200μmol/L剂量范围的维生素C可以促进原代肝脏细胞生长,增强细胞解毒能力,提高细胞的抗氧化水平.