农抗SH—62产生菌原生质体再生菌株的筛选和再生菌株R-4发酵规律的初步研究

本文报道了农抗SH—62产生菌原生质体再生菌株的筛选和再生菌株R—4的发酵规律。试验表明,通过摇瓶的初筛和复筛,从活性比出发菌株要强的202株再生菌株中,找出R—4、R—66和R—72三株活性最强而又稳定的再生菌株。在再生菌株R—4的发酵试验中,选出了该菌株的最佳发酵培养基为1号培养基,并证明这个菌株对溶氧量并不敏感,在偏碱条件下有利于生长和产素,发酵周期为72小时等最适发酵条件。     

利用基因组发掘技术指导链霉菌SH-62中活性天然产物的分离及鉴定

通过生物信息学分析,利用基因组发掘技术发现链霉菌SH-62基因组中至少含有37个次级代谢产物的生物合成基因簇,除了有4个基因簇分别与已知的肠道菌素、潮霉素A、尼日利亚菌素和格尔德霉素的生物合成基因簇具有高度同源性以外,其他基因簇的功能鲜见报道。在不同发酵培养基上培养链霉菌SH-62,利用高分辨率的LC-MS对发酵产物进行分析,发现链霉菌SH-62确实能够产生肠道菌素、潮霉素A和尼日利亚菌素,从而证明了基因组发掘策略确实能够指导代谢产物的分离及鉴定。     

链霉菌SH-62中肠菌素生物合成基因簇的克隆及异源表达

通过生物信息学分析,在链霉菌SH-62的基因组中发现一个Ⅱ型聚酮合酶基因簇(ents),与已报道的来源于Streptomyces maritimus的肠菌素生物合成基因簇具有高度的相似性。通过构建和筛选链霉菌SH-62的基因组细菌人工染色体(BAC)文库,克隆得到完整的ents基因簇。将ents基因簇导入白色链霉菌中进行异源表达,HPLC和LC-MS分析结果表明该基因簇负责肠菌素的生物合成,从而证实了ents基因簇的生物学功能。     

番茄灰霉病菌拮抗菌D2-4发酵条件的研究

对拮抗番茄灰霉病菌的 D2 - 4菌株培养基成分和发酵条件进行研究。结果表明 ,在 2 8℃ ,180 r· min- 1 振荡培养条件下 ,最佳发酵时间为 96 h左右 ,培养 2 0～ 2 4 h的种子液以 7%的接种量转接有利于提高抑菌活性 ,装液量为6 0 m L· 2 5 0 m L- 1 三角瓶 ,均匀设计试验得出 ,最佳培养基配方为 (10 0 m L发酵培养基中含 ) :黄豆饼粉 1.10 g、葡萄糖 2 .71g、蔗糖 1.0 0 g、Na Cl0 .10 g、酵母膏 0 .10 g、p H6 .6 1。     

农抗万隆霉素产生菌发酵培养的碳源和氮源研究

农抗万隆霉素的产生菌为新链霉菌菌株。选用可溶性淀粉、玉米淀粉、糊精、大米粉、玉米粉、葡萄糖、麦芽糖、蔗糖等8种碳源作为万隆霉素产生菌发酵培养的碳源进行研究,结果表明,比较适合于农抗万隆霉素生长的碳源为葡萄糖、可溶性淀粉、麦芽糖、大米粉等,而比较适合于生产活性物质的碳源为大米粉和糊精。选用玉米浆、花生饼粉、蛋白胨、酵母膏、牛肉膏等动植物和微生物来源的氮源作为研究氮源的对象,试验结果表明,较适合于农抗万隆霉素产生菌生产和生长的氮源为玉米浆和酵母膏。     

链霉菌XW5的发酵条件研究

对链霉菌XW5的液体发酵条件进行了单因素研究,通过正交试验设计对该菌株的培养基进行了筛选,同时对发酵代谢进行调节控制。结果表明,该菌株产素的最适发酵条件为:2%淀粉,1.5%黄豆饼粉,0.05%K2HPO40.05%MgSO40.4%CaCO3。NH42SO4对发酵液的效价有较明显的促进作用。     

抗生素产生菌GX-29的发酵研究

采用单因素试验和正交试验,对GX-29菌摇瓶发酵产抗生素的培养条件进行研究,结果表明,最佳发酵条件为种子培养时间48h,接种量9％,发酵培养基初始pH7．5,摇瓶装液量70mL／250mL,温度28℃,摇床转速160r／min,发酵时间5d。在此条件下,GX-29菌发酵液的杀虫半致死时间仅为13．8min。     

放线菌Z139发酵条件的研究

为了进一步提高放线菌Z139菌株发酵液抑菌活性物质的产量,以放线菌Z139发酵液抑菌活性为主要指标,研究了发酵培养基中不同碳源、氮源、C/N、无机盐等营养因子,以及接种量、装液量、初始pH、发酵时间等非营养因子对Z139菌株发酵液生物活性的影响。对烟草赤星病菌和苹果腐烂病菌的抑菌测定结果表明,发酵培养基最佳碳源为玉米粉,氮源为蛋白胨,适宜C/N为4.13∶1,添加无机盐的种类为硫酸镁和氯化钠时,放线菌Z139发酵液抑菌活性较高。正交试验结果表明,发酵培养基各组分的最佳配比(质量分数)为:玉米粉1.0%,蛋白胨1.0%,硫酸镁0.06%,氯化钠0.1%。Z139菌株发酵的优化条件为:初始pH6.0~7.0,发酵时间72 h(发酵液pH 8.5),接种量体积分数6%,装液量240 mL/L。     

抗菌素430产生菌发酵条件研究

从云南元阳土壤中分离得到链霉菌菌株TJ430,其代谢产生的蒽环类抗生素具有广谱抗真菌、细菌活性。通过研究该菌株摇瓶发酵条件,明确其摇瓶发酵培养基配方为：葡萄糖1.8%、蛋白胨0.5%、豆粕0.3%、酵母膏0.1%、碳酸钙0.025%;最优发酵条件为：250 mL摇瓶装液量25 mL,接种量9.0%,培养温度28°C,初始pH 8.5,转速200 rpm,培养时间96 h。     

农抗5102产生菌原生质体融合育种的研究——Ⅱ影响原生质体融合的因素

用农抗5102产生菌的两株不同营养缺陷型突变体WNF-2-1-90和WNF-2-1一135所进行的原生质体融合条件试验。结果表明,1000、4000和6000三种分子量的PEG,各以30%、40%和50%的浓度加入两株突变体的混合原生质体悬液,其融合率达1.8-4.1%,比不加PEG的提高2-7倍;较佳的PEG浓度,则因其分子量不同而异,1000PEG的诱导效果随加入浓度升高而增大,余二者则相反。混合原生质体悬液在4℃和28℃中放置4小时后,其融合率几乎和加PEG的相近。融合前立即用UV照射混合原生质体悬液,其融合率比未照射的提高2倍以上。比较直接选择法和间接选择法检出融合子,表明间接法比直接法检出的要高1倍以上。     

产脂肪酶菌株的筛选及脂肪酶发酵条件的研究

从富含油脂的土壤中分离得到酶活力较高的1株菌,酶学性质研究显示该酶有很好的应用前景。     

拮抗木霉菌株T21发酵条件的研究

研究了拮抗木霉菌株T2 1的发酵条件 ,旨在用于木霉生防制剂的工业化生产。结果表明 :最适T2 1菌丝生长的发酵培养基为①、②和⑥号培养基 ;碳、氮源分别为蔗糖和蛋白胨时 ,T2 1的生物量最高。以⑥号培养基为发酵培养基 ,在装瓶量 5 0ml、接种量 6%、初始pH值 5～ 7、温度 2 5℃、摇床转速 180r/min的条件下 ,培养 3～ 4d时 ,发酵液中的T2 1生物量最高。     

农用抗生素产生菌A2C菌株发酵液的抗菌谱及稳定性测定研究

对农用抗生素产生菌A2C菌株发酵液进行抗菌活性室内测定,结果表明:该菌株发酵液对供试的18种植物病原真菌、3种病原细菌均有一定的抑制活性,其中对小麦赤霉病菌、番茄早疫病菌、葡萄白腐病菌、桃腐烂病菌和柳腐烂病菌的抑制率达到100%,对玉米小斑病菌、苹果轮纹病菌、小麦根腐病菌、苹果褐腐病菌和烟草赤星病菌的抑制率均达到90%以上,抑制率达到80%以上的病原菌占供试病原菌总数的77.8%.A2C菌株发酵液稳定性试验表明,该发酵液对光和热稳定,在灯光和日光处理24 h或在60℃和80℃水浴里处理60 min,其抑菌活性几乎不变,但对酸碱稳定性差.菌株传代试验结果表明, 该菌株连续传代10次(2 d/代),其发酵液的活性没有明显下降.     

苏云金杆菌WG-001菌株发酵条件研究

[目的]优化苏云金杆菌(Bt)工程菌株WG-001的发酵条件。[方法]以产芽胞量为测定指标,通过单因素与正交试验对Bt WG-001菌株发酵液的初始pH、培养温度、装液量及Mg2+添加量4个因素进行了优化。[结果]4个因素对发酵菌数影响大小次序为初始pH>温度>装液量>Mg2+浓度;Bt WG-001菌株最佳发酵条件为温度35℃、装液量50 ml、初始pH 7和MgSO4添加量0.5%,在该条件下Bt发酵液中产芽胞量达51.40×107个/ml。[结论]为Bt WG-001的中试和工业发酵生产提供了理论依据。     

番茄叶霉病菌拮抗链霉菌BPS2发酵条件的研究

对番茄叶霉病菌拮抗链霉菌BPS2(StreptomycestumenensisBPS2)菌株的最适培养基成分和发酵条件进行研究。结果表明,F培养基最适合该菌株的发酵培养。通过正交设计试验得出,F培养基最佳碳氮浓度组合为蔗糖1.0%,玉米粉2.0%,蛋白胨0.3%,豆饼粉3.0%,硫酸铵0.5%;发酵参数在培养温度为28℃,180r/min振荡培养条件下,发酵时间60h,装液量250ml三角瓶装70ml,培养基初始pH值为6,种子液菌龄为22h,种子液以6%的接种量转接时发酵液活性最强。     

生防菌菌株A的摇瓶培养条件及发酵工艺

[目的]优化生防菌菌株A的培养条件与液体发酵工艺。[方法]采用均匀试验设计方法、回归分析方法和分批补料发酵工艺,研究生防菌菌株A的培养条件与液体发酵工艺的优化。[结果]结果表明,适合菌株A摇瓶培养的最佳条件为：培养温度35℃,摇瓶装量12％,接种量3．0％,初始pH值7．2。20L发酵罐分批补料发酵参数为：种子培养基为YDC培养基,培养时间24h,接种量3．0％;发酵培养基：葡萄糖1．0％,酵母膏1．0％,CaCO3 1．0％,pH值7．2;流加培养基：葡萄糖1．5％,酵母膏0．5％,制成混合液一起流加,发酵8h开始流加;发酵周期（34±2）h,在以上发酵条件下,发酵液芽孢浓度达（3．410±0．151）×10^9cfu／ml。[结论]该试验条件下所获得发酵液芽孢数浓度较高,可用于进一步制备生防菌剂。     

多菌株发酵秸秆饲料研究

选择4株供试菌株,通过单因子试验和正交试验确定其最适接种量和培养条件;在固体培养基中共培养,降解秸秆纤维素,产生菌体蛋白来制备秸秆饲料。结果表明,经过4株菌共培养发酵产生的秸秆饲料,其纤维素降低了18.66%,而粗蛋白含量提高了29.30%,粗脂肪提高了0.37%,为开发秸秆饲料提供了一种可行的方法。     

放线菌菌株1a发酵液抗菌谱及抗菌物质稳定性研究

采用琼脂扩散法对放线菌菌株1 a发酵液进行了抗菌谱测定。结果表明,菌株1 a发酵液对9种常见植物病原真菌有很好的抑制作用,其中对人参锈腐菌抑菌活性最强,抑菌圈直径可达22 mm。稳定性测定结果表明菌株1 a发酵液低温贮藏效果好,对热及紫外光照稳定性较强,对极端酸碱环境稳定性较差。     

放线菌Y23菌株发酵液抗菌活性及稳定性测定

从山东临沂、日照等主产烟区烟田采集病株根际土壤,分离到一株有抗菌活性的放线菌Y23,经初步鉴定为链霉菌（streptomyces sp．）。分别采用抑制菌丝生长速率法和琼脂扩散法测定了Y23菌株发酵液对15种病原真菌、3种病原细菌的抗菌活性。结果表明,Y23菌株发酵液对3种供试真菌的菌丝生长抑制率达60％左右,占供试真菌数的20％;琼脂扩散法生测结果表明,Y23菌株发酵液只对布克氏杆菌有抑制作用。对Y23菌株发酵液的稳定性测定结果表明,发酵液低温贮藏效果好,对热、酸碱及紫外光照稳定性较强,对日光稳定性较差。     

戊糖乙醇发酵菌种的选育及菌种特性的研究

[目的]选育能利用木糖产乙醇的菌株。[方法]从自然界中分离、筛选能够发酵戊糖产生乙醇的酵母菌株,并对所得菌株进行发酵性能研究。[结果]选出了1株能利用木糖产乙醇的菌株b-11。其特性研究结果表明,菌株b-11耐乙醇浓度为5%,对数生长期为12～18 h,在50 g/L的木糖发酵培养基中发酵48 h时乙醇浓度达到最高值3.105 9 g/L,木糖利用率达82.52%,糖醇转化率是理论转化率的16.36%。[结论]该研究为利用木质纤维素生产燃料乙醇提供了参考。