一种简便快速高效的DNA银染方法

以葡萄叶片为试材,对变性聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)中DNA银染及显色方法进行了改良,改良后的方法省略了预处理、固定、用试剂终止显色过程等步骤。使用改进的显带方法得到的PAGE胶图片,DNA带型和背景具有更高的对比度和分辨率;同时操作简单,耗时短,使用试剂少。改良方法使PAGE中DNA银染显色全程时间缩短至15~20 min,且效果较好,可较好的替代常规的银染方法。     

一种新的微卫星PAGE的DNA显带方法

提出了一种新的微卫星聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)显带方法,即微卫星PAGE荧光染料显带法,与琼脂糖凝胶荧光染料显带法和PAGE银染显带法相比,该法具有简单易行、快速高效、分辨率高、背景清晰等特点,是一种成功的DNA显带技术。     

甘蓝型油菜微卫星标记PAGE及银染的高效检测

一方面对甘蓝型油菜微卫星标记（SSR）的小垂直板聚丙烯酰胺变性凝胶电泳体系做了两点优化：①在制胶方面,确定了在不同温度下的最佳催化剂使用量,可保证顺利凝胶和不缩胶,②在保证电泳带型质量的前提下适当提高电泳电压,可缩短电泳时间,提高效率;另一方面对PAGE胶中DNA的银染方法做了简化：省略固定处理,简化为制胶前用乙醇擦净玻璃板、用纯水漂洗胶片后银染及降低染色液的AgNOs浓度,该简化可减少操作步骤,显著提高效率,并可节约药品。     

聚丙烯酰胺电泳条带中微量DNA片段的回收与再扩增方法的改进

【目的】研究聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)条带中微量DNA片段的回收和再扩增.【方法】比较了4种方法溶解聚丙烯酰胺凝胶的效果和回收微量核酸的效率.【结果和结论】Bioteke溶胶/结合液能获得极高的DNA片段回收率,可从仅含1.0~7.5 ng核酸的PAGE胶中有效回收到足量的片段;再扩增的效果与回收效率呈正相关;将液态混合液与杂质分离是成功进行再扩增的关键.本研究构建的一套快速、高效的PAGE多态性条带回收及再扩增的方法为分析生物遗传多样性成因提供了新途径.     

玉米蛋白质组分电泳特性的比较研究

对比了10种玉米的盐溶蛋白和水溶蛋白，乙酸溶蛋白，醇溶蛋白以及胚和胚乳蛋白酸性PAGE的谱带，结果发现，玉米水溶蛋白，盐溶蛋白，乙酸溶蛋白和胚蛋白酸性PAGE谱带极为相似，均可以用于品种鉴定。     

火龙果IRAP分子标记反应体系的建立与优化

基于火龙果Ty1-copia类反转录转座子的长末端重复序列信息设计引物,采用5因素4水平L16(45)的完全随机正交试验,对Mg2+浓度、dNTPs浓度、Taq DNA聚合酶用量、引物浓度和DNA含量进行优化,建立火龙果IRAP分子标记反应体系。结果表明,25μL反应体系含基因组DNA 20ng、2.5mmol/L MgCl2、0.10mmol/L dNTPs、10×PCR Buffer 2.5μL、Taq DNA聚合酶0.75U、0.25μmol/L LTR引物,0.080g/mL的非变性PAGE胶适于IRAP多态性检测。     

热导系玉米种子贮存蛋白的生物指纹图谱分析

利用聚丙稀酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对热导系玉米种子的可溶性蛋白进行分析，结果表 明，清蛋白、球蛋白、谷蛋白都显示出丰富的带谱。自交系间谱带数目、带的强弱与分布等特点均可 见较明显的差异，可将各供试自交系互相区分出来；醇溶蛋白谱带均较弱，自交系间差异小，难以把 各供试自交系互相区分出来。尽管种子的可溶蛋白质 PAGE 图谱都可作为玉米自交系鉴定的蛋 白质指纹图谱，相比之下，利用清蛋白 PAGE 图谱较为理想。     

胶胞炭疽菌DNA的PCR特异性扩增

利用1对胶灰疽菌特异寡聚核苷酸引物，对31个来自于橡胶树，芒果树的胶胞炭疽菌菌株的全基因组DNA进行扩增，均扩增到约500bp的DNA片段，而芭蕉炭疽功，辣椒疽菌，菜豆炭疽菌，腐霉菌，镰刀菌则不能被扩增。这表明，通过种间DNA特异片段的PCR扩增，能将胶胞炭疽菌与其他炭疽菌种类区别开来。采用该方法鉴别胶胞炭疽菌，其结果与形态鉴别的相吻合。     

沙葱种子盐溶蛋白电泳技术体系构建

以沙葱种子为材料,利用PAGE的方法,探索了沙葱种子盐溶蛋白分离的适宜实验条件。其结果表明分离沙葱盐溶蛋白的PAGE电泳的适宜条件为：30%H2O2/1mL,胶浓度为13%,胶液为5μL,交联度为4%,加样量为20μL和25μL,电极液pH值是3.5,电泳方式为先低后高再低。     

枇杷RAPD扩增产物的不同电泳检测及其序列特征分析

为了更好地将RAPD技术应用于枇杷品种资源的鉴定以及遗传基础的研究,在选用11个碱基引物以及严格筛选PCR退火温度的最新RAPD技术优化的基础上,以16个枇杷品种为试验材料,对琼脂糖凝胶以及聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳检测的RAPD PCR扩增产物效果进行比较。结果表明,聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳检测出的总谱带数以及多态性谱带数均高于琼脂糖凝胶。根据两种电泳系统获得的标记信息进行枇杷品种遗传聚类分析,结果表明PAGE电泳的分析结果与枇杷的分类情况更为一致。随机对挑选的38个片段进行克隆与测序,发现37个片段都是对应引物的RAPD扩增产物,其中有6条是编码蛋白的基因片段,说明RAPD不仅扩增基因组上的非编码蛋白序列,而且可以扩增编码蛋白的基因片段,是能够揭示枇杷品种间基因组信息异同的理想的DNA标记技术。     

丁香属10种植物的同工酶谱分析研究

采用垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳对西宁市广泛引种栽培的丁香属10个植物品种的过氧化物酶(POD)和酯酶(EST)同工酶进行了分析,结果表明:10个品种共出现POD同工酶酶带9条,EST同工酶酶带12条,其中POD-1,POD-2和EST-1,EST-2为所有品种共有酶带,是丁香属植物的特征酶带,其他酶带在不同品种间有明显差异,可以根据酶谱中酶带的分布位置对丁香属不同品种进行鉴别.DPS聚类分析表明:10种丁香属植物可分为5大类.同工酶谱分析可作为丁香属植物分类鉴定的依据.     

大豆品种的聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定研究

利用改良聚丙烯酰胺凝胶电泳法，对１２个南斯拉夫大豆品种种子贮藏蛋白进行了电泳分析。结果表明，１２个品种的蛋白质电泳组成表现了较高的多态性，每１品种均可根据各自的电泳图谱加以区分。尽管少数大豆品种表现相似的电泳模式，但在一些细微组分上仍存在差异     

云南野生和逸生苜蓿资源多酚氧化酶和超氧化物歧化酶同工酶研究

 采用聚丙烯酰胺凝胶不连续垂直板电泳系统,对30份云南野生和逸生苜蓿材料多酚氧化酶（PPO）和超氧化物歧化酶（SOD）进行了检测。结果表明：供试材料PPO检测分离出10条酶带,SOD 为6条酶带,二者多态位点百分数均为100%。对酶谱进行谱形分析表明,除1,3,4号3份二倍体材料外,其他材料均具有多条相同的共有谱带,但也存在明显差异;采用类平均法(UPGMA)进行聚类分析,表明30份供试材料亲缘关系的远近与地理分布呈一定的相关性。试验结果可以作为研究云南苜蓿资源遗传关系的基础。     

RAPD标记与猪繁殖性能的相关性研究

应用RAPD标记技术对猪繁殖性能进行了相关研究,选用随机引物20条,对其基因组DNA进行PCR扩增,对扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳。结果表明:多态条带数73,84,85对总产仔数的影响非常明显,产仔数最高,可为选育提供依据,并为今后进一步研究提供理论基础。     

利用脂酶鉴定柴胡及其亲缘关系的研究

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)对5种柴胡脂酶同工酶进行了研究。结果表明,柴胡不同种之间脂酶同工酶条带数不同,且各自均具有特征谱带。用PAGE能对柴胡属5种植物进行区分。此法能有效地鉴定柴胡及其近似种。     

金针菇杂交菌株的同工酶标记与菌株特性

采用垂直平板板聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）法，利用酯酶同工酶谱和可溶性蛋白ＰＡＧＥ表型的差异，对金针菇的杂交后代作了遗传分析和鉴定。结果表明，金针菇杂交亲本及其后代抽工酶箐型表现明显的多型性。４个杂交菌株的同工酶亲本有较明显的差异。２处生化（ＥＳＴ，ＰＲＯ）标记在杂交菌株中均表现有不同程度的遗传互补性，并有新的酶带产生。结合同工酶酶谱和标记杂合位点数目对杂种优势可进行早期预测和栽培验证。     

利用醋酸纤维素薄膜电泳显示金针菇酯酶同工酶

[目的]利用醋酸纤维素薄膜电泳分析金针菇酯酶同工酶。[方法]以6种金针菇为材料,采用醋酸纤维素薄膜电泳对其酯酶同工酶进行分析,并与利用PAGE法得到的针菇酯酶同工酶图谱进行对比。[结果]6种金针菇共电泳得到20条酯酶同工酶带,其中相对迁移率不同的共有8条,大小分别为0.580、0.613、0.645、0.709、0.806、0.839、0.871、0.934;6种金针菇中,①号和②号有3条相同的带,④号和⑤号条带完全相同,③号与④号、⑤号有2条相同的带,⑥号与其他5种菌株间相同的条带较少。[结论]该试验结果与PAGE法显示的金针菇酯酶同工酶图谱基本一致,为实现利用醋酸纤维素薄膜电泳技术快速检测各类食用菌酯酶同工酶提供了可能。     

不同蔬菜连作对土壤细菌DNA分子水平多态性影响的研究

 采用从土壤中直接提取微生物总DNA，并用细菌16S rDNA特异性引物进行PCR扩增、变性梯度凝胶电泳（DGGE）、克隆和测序等一系列分子生物学手段，研究了不同蔬菜连作对土壤中细菌群落结构的影响。结果表明,采自同一地区的土壤样品，其DGGE图谱的相似性很高；同时蔬菜连作对土壤中细菌的群落组成产生影响，这种影响同蔬菜作物种类和连作年限有关。研究结果还表明，所取土样中的细菌大多数为Proteobacteria 类细菌，另外Acidobacteria、Sphingobacteria和Actinobacteria 类细菌只占少量比例。     

小麦族赖草属植物与近缘二倍体物种的同工酶分析

对小麦族赖草属、冰草属、偃麦草属、澳冰草属、拟鹅观草属、新麦草属和大麦属7个属24个物种的酯酶同工酶和超氧化歧化酶同工酶进行比较分析。结果表明:7个属24个物种共出现24种不同的同工酶酶谱,电泳分离出迁移率不同的45条酶带;②Leymus chinensis与Leymus其他13个种的亲缘关系较远,与Hordeum bogdanii的亲缘关系较近,Psathyrostachys juncea与Leymus的亲缘关系很近;③相似染色体组的物种聚类在一起;④2种同工酶的分析结果与细胞学、形态学及分子标记的研究结果基本一致。     

3种鲟血清蛋白的比较研究

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳及饱和硫酸铵分步沉淀法对健康的3龄中华鲟Acipenser sinensisG ray、2龄施氏鲟A.schrenckiiB randt和3龄达氏鳇Huso dauricusGeorgi的血清蛋白及其组成成分进行了研究。结果表明,3种鲟的血清电泳图谱具有各自的特有谱带,其电泳图谱的相似程度表明,中华鲟与施氏鲟的亲缘关系较达氏鳇与施氏鲟近。3种鲟血清蛋白的总浓度分别为18.70、21.25、24.60 mg/mL。