热处理杀灭木质包装中松材线虫的技术研究

近年来,出入境检验检疫部门多次从经热处理的木质包装中截获松材线虫.本实验利用电热恒温箱和热处理窑对携带松材线虫的进口木质包装进行热处理试验,结果表明:在实验室和工厂化热处理试验中,木材中心温度达到56℃时处理4h不能完全杀灭木质包装中的松材线虫;木材中心温度达到60℃时在实验室试验中需要3.5h方能完全杀灭松材线虫,而在工厂化热处理试验中,木材中心温度达到60℃处理2h,尚不能完全杀灭松材线虫;实验室和工厂化试验表明,仅当木材中心温度达到65℃,保持0.5h以上方能100%杀灭松材线虫.本文探讨了实验结果与目前IPPC推荐的国际标准(即木材中心温度56℃时处理30min以上)不一致的原因.     

水浸处理原木杀虫效果的研究

对水浸处理原木杀灭木材中的松褐天牛、横坑切梢小蠹、材小蠹及病害松材线虫的效果进行了研究。结果表明天牛成虫、蛹及小蠹虫较易死亡，而天牛幼虫和松材线虫抗逆性强，需长时间浸泡。结论认为水浸处理原木需1年时间或在高温季节处理3个月才能达到检疫杀虫的目的。     

异硫氰酸甲酯和硫酰氟混用杀灭松材线虫的增效研究

松萎蔫病由松材线虫(pine wood nematode,PWN,Bursaphelenchus xylophilus)引发并在世界范围内广泛发生,是对松树威胁最大的病害之一.本文使用不同比例的硫酰氟(sulfuryl fluoride,SF)和异硫氰酸甲酯(methyl isothiocyanate,MITC)混剂对木包装中的松材线虫进行了熏蒸.结果表明,75.5 g/m3硫酰氟在20℃单独熏蒸24 h才可杀灭99%的松材线虫,而添加2.5%,5%,10%,20%质量比的异硫氰酸甲酯后,分别只需硫酰氟11.8 g/m3,8.72 g/m3,5.49 g/m3,3.75 g/m3即可在同等条件下杀灭99%的松材线虫,说明异硫氰酸甲酯对硫酰氟杀灭松材线虫存在明显增效.     

木质包装松材线虫溴甲烷熏蒸处理

为寻求一定温度下溴甲烷熏蒸处理杀灭木质包装中松材线虫的有效浓度和时间,给国际贸易中木质包装松材线虫的熏蒸处理提供科学依据,进行了木质包装松材线虫溴甲烷熏蒸处理研究.研究分实验室基础试验和集装箱应用试验两部分,先在实验室中筛选出熏蒸有效浓度和时间,再于集装箱中进行应用试验.结果表明:11～15、16～20、≥21℃时,溴甲烷剂量分别为64、56、48g/m3,熏蒸24h,24h时浓度分别不低于32、28、24g/m3,即CT值分别为1152、1008、864 gh/m3,能够100%杀灭木质包装中松材线虫的成虫、幼虫及卵.此外,证实了国际植物检疫措施标准ISPM NO.15<国际贸易中木质包装材料控制准则>中熏蒸处理的要求偏低,不能完全杀灭木质包装中松材线虫.     

氧硫化碳及其混剂熏杀松材线虫效果研究

氧硫化碳(COS)作为一种潜在的溴甲烷替代熏蒸剂,日益引起广泛关注。本文以松材线虫为研究对象,首先探讨了氧硫化碳熏蒸松材线虫时,温度和时间因子对其杀灭效果的影响。其次,配制了氧硫化碳和硫酰氟(SO_2F_2)的混剂,分析了不同体积比的混剂对松材线虫的熏杀效果。结果表明,温度和时间是影响氧硫化碳熏杀松材线虫效果的关键因素,熏杀效果随温度和时间的增加而提高;在25℃的条件下,氧硫化碳投药剂量为156.33 g/m~3,熏蒸时间为48 h,确保熏蒸散气前的CT值为3773.79 g·h/m~3时,松材线虫全部死亡;添加10%、30%和50%体积比的硫酰氟对氧硫化碳的熏杀效果增效明显,其中添加50%体积比的硫酰氟后,只需加入89.67 g/m~3的氧硫化碳和70.45 g/m~3的硫酰氟的混剂,即可使松材线虫全部死亡。     

不同杀线剂对穿刺短体线虫的杀灭效果研究

为寻找杀灭短体属线虫有害生物的有效药剂,以穿刺短体线虫为供试线虫,测定了5种不同杀线剂对该线虫的杀灭效果。结果表明,5种供试杀线剂分别处理该线虫0.5h、1h和24h后,对该线虫均有一定的杀灭效果,顺序依次为:阿维菌素﹥噻唑磷﹥灭线磷﹥丁硫克百威﹥棉隆,其中阿维菌素和噻唑磷对穿刺短体线虫的杀灭效果较好,可作为备选药剂进一步研究。     

减压条件下溴甲烷对松材线虫熏蒸效果的研究

利用XMG-35真空熏蒸库在25～30℃和减压条件下,选择不同压力和浓度梯度,模拟对含有松材线虫的木质包装材料进行4h的熏蒸处理.结果表明,回气的条件下,熏蒸压力为30kPa、50kPa、70kPa时,100%杀死木质包装材料中的松材线虫所有虫态的有效剂量分别为72g/m3、80g/m3、88g/m3.减压熏蒸对松材线虫的杀灭效果和环境温度、压力、投药剂量及木质包装材料的厚度有关.     

高效新型杀松材线虫剂的筛选及其林间防效

为筛选出新型的高效松材线虫Bursaphelenchus xylophilus防治药剂,采用浸渍法室内测定了氯氟氰虫酰胺、阿维菌素、甲维盐、灭多威、特丁硫磷、甲基异柳磷和吡虫啉7种药剂对松材线虫的毒杀作用和对其繁殖能力的影响,采用高效液相色谱仪测定氯氟氰虫酰胺在马尾松体内的输导分布,并在林间开展树干注射氯氟氰虫酰胺抗松材线虫病试验。结果表明,7种药剂中氯氟氰虫酰胺对松材线虫的毒力最强,LC_(50)为0.019 mg/L,阿维菌素和甲维盐次之,LC_(50)分别为0.0213 mg/L和0.0214 mg/L。氯氟氰虫酰胺树干注射3个月内能迅速从马尾松基部传导至树梢顶部,树干边材东、南面的药剂含量显著高于西、北面,且树干不同高度的氯氟氰虫酰胺含量均高于其LC50;氯氟氰虫酰胺制剂在林间注干后,对人工接种病原松材线虫松树的防治效果为73.33%,自然感染松材线虫病松树的死亡率降至2.00%,而对照试验中人工接种松材线虫松树和自然感染松材线虫病松树的死亡率分别为93.33%和19.67%。表明氯氟氰虫酰胺制剂能有效预防松树个体的松材线虫病发生与为害,可以推广使用。     

集安口岸松材线虫监测与结果分析

集安口岸进境货物主要是来自朝鲜的木材,朝鲜是松材线虫的疫区,因此对进境木材松材线虫监测刻不容缓.     

利用RNAi分析松材线虫ncr基因功能

由松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)侵染引起的松材线虫病是松属植物的重要病害之一,其繁殖和传播速度快,防治困难。RNAi技术是目前研究植物寄生线虫基因功能的重要手段。本文利用农杆菌介导灰葡萄孢菌表达松材线虫ncr基因的dsRNA(PDH-RH-NCR),并连续多代喂饲松材线虫使ncr基因表达稳定下调后分析其表型。结果表明,在转有PDH-RH-NCR的灰葡萄孢菌上连续培养10代的松材线虫,ncr基因表达量显著下调13倍。ncr基因表达下调后,线虫发育缓慢,繁殖力也显著降低;处理4 d后发育成成虫的百分率为61.75%,显著低于PDH-RH-s GFP(89.75%)和空载体(88.75%)处理;而9 d的繁殖量则较PDH-RH-s GFP和空载体处理分别少2 314和2 347条。松材线虫ncr基因表达下调后,4龄幼虫平均寿命(20.9 d)和体内脂肪量(1.340 nmol)则显著高于PDH-RH-s GFP(15.5 d,0.336 nmol)和空载体(15.2 d,0.323 nmol)处理。通过喂饲法RNAi发现松材线虫ncr基因可能与松材线虫的发育速度、繁殖量、寿命、脂肪积累等表型相关。     

苏云金芽孢杆菌对松材线虫的杀线活性

在室内条件下,测定了17株苏云金芽孢杆菌Bacillus thuringiensis伴孢晶体蛋白对松材线虫Bursaphelenchus xylophilus的杀线活性。通过初筛,发现菌株020、RBT-200701的伴孢晶体蛋白对松材线虫有明显毒杀作用。在测试的浓度范围内（菌株020为6.37-203.9μg/ml;RBT-200701为13.7-438.8μg/ml）,菌株对松材线虫的校正死亡率随其浓度增大而提高;随时间延长杀虫效果提高。020菌株晶体蛋白24h、48h时对松材线虫的LC50、LC95分别为183.20、408.20μg/ml和80.132、25.29μg/ml;RBT-200701菌株伴孢晶体蛋白24、48h时对松材线虫的LC50、LC95分别为368.00、868.00μg/ml和82.73、382.73μg/ml。SDS-PAGE分析发现这2个菌株晶体蛋白的蛋白图谱不同。     

牡丹皮、黄连、大黄提取物对松材线虫生理代谢的影响

对3种中草药黄连、牡丹皮、大黄的乙醇提取物毒杀松材线虫作用机制进行了初步研究。测定了其对线虫体内总糖和蛋白含量的影响, 处理前后线虫体内超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、过氧化物酶（POD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和乙酰胆碱酯酶（AChE）酶活性变化和丙二醛（MDA）含量变化, 处理前后SOD、CAT、GSH-Px和AChE表达量变化; 并用松枝水培试验测定3种提取物对松材线虫病害的防控效果。结果表明, 提取物处理后线虫体内总糖及蛋白含量显著下降, 线虫体内糖及蛋白质的代谢受到干扰; 线虫体内SOD、CAT、GSH-Px酶活性提高, POD活性显著下降, MDA含量升高, 表明线虫体内氧化与抗氧化作用失衡, 细胞功能受到极大影响; AChE活性被抑制, 表明线虫的神经系统受到破坏, SOD、CAT、GSH-Px和POD表达量与酶活性变化基本一致。松枝水培试验表明中药提取物能够有效控制松材线虫病害发生。综上, 3种提取物引起的松材线虫体内众多生理指标的改变是造成线虫死亡的主要原因。     

松褐天牛疫木隔离结合人工释放管氏肿腿蜂防治松材线虫病

为提高天敌昆虫寄生松褐天牛以此控制松材线虫病的效果,本研究采用松褐天牛疫木就地隔离,同时加上人工助放管氏肿腿蜂的方法,开展了控制松材线虫病的试验。结果表明：管氏肿腿蜂对松褐天牛低龄幼虫的致死率最高达68．50％,对中老龄幼虫的致死率为44．58％。3月和4月释放,松褐天牛死亡率分别为57．11％和65．64％,而5月份释放幼虫死亡率只有14．57％。将疫木劈为4开的情况下时,天牛死亡率最高,达71．33％。单边放蜂,松褐天牛的死亡率最高达67．18％。铁丝网、渔网和聚丙烯布隔离疫木对松材线虫病的发生都有较好的控制效果,其中铁丝网隔离后,健康松树死亡率下降到2．5％,渔网和聚丙烯布隔离后,松树死亡率为12％,均显著低于对照的80％。表明隔离松疫木加上施放管氏肿腿蜂能有效控制松材线虫病流行危害。     

利用RAPD研究松材线虫和拟松材线虫亲缘关系

 用RAPD技术对18个松材线虫株系、8个拟松材线虫株系基因组DNA多态性进行研究。在事先优化的条件下,用15个随机引物进行PCR扩增,一共扩增出165条谱带,多态性为91.5%。通过聚类分析,结果表明:松材线虫和拟松材线虫种间和种内都表现出很大的差异性,但种间差异大于种内差异,因而松材线虫和拟松材线虫应为2个独立的种。     

Detection of the Pinewood Nematode, Bursaphelenchus xylophilus, Using a Real-Time Polymerase Chain Reaction Assay

ABSTRACT The pinewood nematode, Bursaphelenchus xylophilus, has caused significant damage to pine plantations both in East Asia and North America and is an important quarantine organism. A real-time polymerase chain reaction (PCR) assay was developed to detect B. xylophilus. A set of primers and probe specific for B. xylophilus was designed to target the ribosomal DNA internal transcribed spacer region. Optimal primer concentration, Mg(2+) concentration, and extension temperature were 400 nM, 3.0 mM, and 60 degrees C, respectively. The assay was highly specific and sensitive, detecting as little as 0.01 ng of B. xylophilus DNA. The real-time PCR assay also successfully detected B. xylophilus in field samples, and it should be very useful for quarantine purposes.     

松材线虫PCR快速检测方法研究

松材线虫是许多国家的检疫性有害生物 ,其形态与拟松材线虫非常相似。为克服传统的形态学鉴定的不足 ,本研究依据松材线虫rDNA基因部分序列 ,通过单个碱基的故意错配 ,设计了一对特异性引物 ,运用PCR方法 ,最终实现了对单条松材线虫的快速检测。该检测方法具有很好的实用性和稳定性     

一株虫生真菌杀线虫活性代谢产物的分离与结构鉴定

以生物活性为导向,利用硅胶、凝胶柱层析法以及高效液相色谱等技术对一株虫生真菌拟青霉菌Paecilomyces sp.的活性次生代谢产物进行了研究。从其活性组份中共分离得到2个杀线虫活性次生代谢产物,经质谱和核磁共振等波谱分析方法鉴定其结构分别为脑苷酯类化合物Cerebroside A( 1 )和 Cerebroside B( 2 )。活性测定结果显示,这2个化合物均具有杀松材线虫Bursaphelenchus xylophilus活性,其中化合物 1 在质量浓度分别为1 000,100和10 μ g/mL下对松材线虫的致死率分别为100%,100%和11.1%。     

具杀线虫活性的苏云金杆菌筛选研究

 Bioassay of 51 strains of Bacillus thuringiensis to Bursaphelenchus xylophilus had been studied in laboratory. Two of them had higher toxicity to B. xylophilus. Extraction of endotoxin and exotoxin of the two isolates to B. xylophilus showed the action of exotoxin higher than that of endotoxin.     

松材线虫伴生细菌与松树萎蔫病关系的初步研究

利用马尾松水培离体松枝作接种材料,接种消毒后的松材线虫、线虫虫体上分离到细菌分离物GD1以及两者的混合体。结果表明,单独接种消毒后的松材线虫蔌细菌分离物GD1均不能使松枝萎蔫,只有两者混合接种才能使松枝发病枯死。从而说明了松材线虫的伴生细菌对松树萎蔫病的发生起着重要的作用。