温度和初始种群密度对象耳豆根结线虫侵染番茄的影响

通过室内接种方法,研究了不同温度和接种密度对象耳豆根结线虫侵染番茄能力的影响。研究结果表明,28~30 ℃是象耳豆根结线虫侵染番茄的最适温度。随着温度的下降,其侵染能力明显降低。当象耳豆根结线虫2龄幼虫接种密度大于10条/100 cm3土壤时,番茄的生长会受到显著的抑制,随着线虫接种密度的增加,根结指数显著增加、线虫对番茄的危害也逐渐加重。研究结果将为广东省蔬菜产区制定象耳豆根结线虫防治指标提供理论依据。     

象耳豆根结线虫Hsp70基因的克隆与原核表达

采用RT-PCR、c DNA末端快速扩增法(RACE),克隆了象耳豆根结线虫Hsp70基因的全长c DNA(Me Hsp70)序列。Me Hsp70 c DNA全长2 203 bp,含有1 959 bp的开放阅读框,编码653个氨基酸,相对分子量为71.09 k Da,具有3段Hsp70家族的签名序列,Gen Bank登录号KF739434。同源性分析表明,氨基酸序列与其他真核生物的Hsp70序列具有很高的相似性。该Hsp70与其他物种中的Hsp70进行系统进化分析,结果显示,Hsp70的系统发育树不能体现物种间的亲缘关系,推测其反映的是不同物种间Hsp70生物学功能的相似性程度。构建了一个原核表达载体p EASY-E1-Me Hsp70,当IPTG终浓度为0.4~1.0 mmol/L时,能诱导表达融合蛋白。Me Hsp70基因的克隆和表达,将为象耳豆根结线虫的生态适应性机理研究提供依据。     

象耳豆根结线虫的PCR鉴定和检测方法

 象耳豆根结线虫是一种在中国具有潜在经济重要性的农作物病原物。为提供有助于控制象耳豆根结线虫传播扩散的方法,研制了该线虫的快速PCR鉴定和检测法。该方法PCR引物的扩增目标为rDNA-IGS2区域,其设计依据象耳豆根结线虫与南方、爪哇、花生和北方根结线虫在该区域核酸序列的差异。通过对6种近似根结线虫的不同地理群体及自然土壤线虫群体的测试,验证了设计的PCR引物针对象耳豆根结线虫的特异性和可靠性。本方法具有快速灵敏的特点,可用于象耳豆根结线虫单条线虫的直接鉴定以及混合土壤线虫群体中象耳豆根结线虫的检测。     

陕西省首次发现象耳豆根结线虫危害洛南白菜

采用形态学鉴定、特异性引物鉴定及rDNA-ITS序列分析方法,对采自陕西省洛南县白菜的根结线虫进行了种类鉴定,并结合构建系统发育树,确定了感染洛南县白菜的根结线虫为象耳豆根结线虫。切片观察发现,其会阴花纹整体呈圆形至卵圆形,线纹较密且平滑,背弓较高,为方形或近圆形,无明显侧线。利用象耳豆根结线虫特异性引物进行PCR扩增,得到大小约236 bp的目的条带,说明所鉴定线虫为象耳豆根结线虫。系统发育树结果显示,所鉴定根结线虫与已知的不同地区象耳豆根结线虫聚为同一进化分支,进一步确定陕西省洛南县采集的根结线虫为象耳豆根结线虫。本文首次发现并报道了陕西省有象耳豆根结线虫为害,为该线虫的扩散及防治研究奠定了基础。     

温湿度对南方根结线虫卵孵化和二龄幼虫的影响

根结线虫病害是世界上最难防治的蔬菜病害之一,是否可以通过控制生态条件经济有效地防治根结线虫病害值得深入研究。本文利用室内纯培养技术研究了温湿度单因素和双因素对南方根结线虫（Meloidogyne incognita）2龄幼虫(J2)的致死率和卵囊中卵孵化率的影响。试验结果表明,该线虫对温度敏感,40 ℃以上高温和5 ℃以下低温即可抑制J2存活和卵囊中卵孵化,15～30 ℃是线虫的适宜温度;该线虫对湿度不十分敏感,只有干旱（含水量低于1%）和高湿（含水量高于30%）时,对线虫才有一定抑制作用。低温（5 ℃以下低温、含水量5%以上湿度）和高温高湿（35 ℃以上温度和30%含水量）抑制卵囊中卵孵化和J2的存活。本数据的获得将为设施园艺中生态控制南方根结线虫病害提供理论指导和数据支持。     

9种杀线剂对香蕉根结线虫病的防效评价

对9种不同作用机理的杀线虫制剂进行了田间防效评价试验。结果表明,10%噻唑磷颗粒剂、35%威百亩水剂和98%棉隆微粒剂对根结线虫具有良好的防效,不仅能控制土壤中2龄幼虫数量,而且能非常有效地抑制根结的形成,同时具有速效性好、持效期长、残留毒性低等优点,可作为根结线虫防治的首选药剂;5%丁硫克百威颗粒剂和0.5%阿维菌素颗粒剂具有较好的防效,对土壤中2龄幼虫数量和作物根结的形成具有中等水平的控制能力,速效性好、同时具有一定的持效性;生防制剂5亿活孢子/g淡紫拟青霉颗粒剂和2.5亿孢子/g厚孢轮枝菌微粒剂在香蕉生长前期防效较差,而在生长中期的防效逐渐上升并保持稳定;2.5%二硫氰基甲烷可湿性粉剂的表现一般,但可在生长季节多次灌根使用,同时具有毒性低、使用方便的优点,是当前为数不多的、能在作物生长季节里施用的广谱型杀线虫制剂;50%氰氨化钙颗粒剂的表现最差,仅能一定程度地控制根结线虫数量,未能有效地抑制病害的发展,对2龄幼虫的控制能力不超过60 d,生长中后期的2龄幼虫数量和根结指数增长较快。     

象耳豆根结线虫对抗病番茄品种VFNT的致病性研究

 象耳豆根结线虫是近年在我国发现的一种扩散迅速、寄主广泛、致病性强的根结线虫。为探究象耳豆根结线虫的强致病性原因,本研究用象耳豆根结线虫和南方根结线虫分别接种抗线虫番茄品种VFNT和感病番茄品种Rutgers,30 d后象耳豆根结线虫对VFNT和Rutgers的累计侵入率分别为14.1%和19.2%、虫瘿率为62.5%和81.6%,而此时南方根结线虫累计侵入率为0%和18.8%、虫瘿率为0%和68.5%,象耳豆根结线虫的侵染力和致病力显著强于南方根结线虫;通过侵染抗病番茄品种VFNT的病理切片以及根尖侵染早期胼胝质、活性氧染色发现象耳豆根结线虫的侵染不会激活Mi-1基因诱导的特异性抗性,在侵染早期南方根结线虫引起的胼胝质沉积量在72 h最大,是象耳豆根结线虫的2.0倍;体外H₂O₂应激测试发现,H₂O₂浓度为10～80 μmol·L^-1象耳豆根结线虫对H₂O₂的耐受性显著强于南方根结线虫。象耳豆根结线虫具有强致病性的原因可能是:具有更强的侵染力和活性氧耐受力;侵染不会激活Mi-1基因诱导的特异性抗性且侵染引起的胼胝质的积累量较低。     

象耳豆根结线虫果胶酸裂解酶基因的克隆及其RNAi 效应分析

 从象耳豆根结线虫中首次克隆了果胶酸裂解酶基因Me-pel-1,该基因cDNA 的开放阅读框(ORF)长813 bp,编码270 个氨基酸,具有果胶酸裂解酶第3 家族的4 个保守域特征。ME-PEL-1 与南方根结线虫的果胶酸裂解酶MI-PEL-1 和爪哇根结线虫的果胶酸裂解酶MJ-PEL-1 相似性最高,且系统进化树显示ME-PEL-1 也与它们最为接近。利用RNAi 技术对象耳豆根结线虫2 龄幼虫的Me-pel-1 进行沉默,结果发现Me-pel-1 基因被干扰后,象耳豆根结线虫2 龄幼虫对番茄的侵染率显著降低。该结果表明Me-pel-1 基因在象耳豆根结线虫侵染寄主的过程中发挥重要作用。     

土沉香根结线虫病的病原鉴定

本研究对海南省澄迈县土沉香根结线虫病危害与发生情况进行了调查与研究,并采用比较形态学结合rDNA-ITS序列分析的方法对病原进行了分离鉴定,确定了发生在澄迈县土沉香苗木上的根结线虫为象耳豆根结线虫Meloidogyne enterolobii YangEisenback。这是首次报道海南省澄迈地区土沉香上发生象耳豆根结线虫,为进一步分析土沉香病原根结线虫种群及该病的防治研究奠定了基础。     

淡紫紫孢菌PLHN与甲氨基阿维菌素苯甲酸盐减量复配防治象耳豆根结线虫

象耳豆根结线虫Meloidogyne enterolobii严重威胁热带农业生产,迫切需要寻求一种兼具生物防治和化学农药减施高效双重优势的绿色防治方法。本研究通过杀线剂毒力测定和生防菌耐药测定,设计系列药菌复配组合并筛选出对象耳豆根结线虫活性好的复配方案。结果表明:3%甲氨基阿维菌素苯甲酸盐(甲维盐)微乳剂对淡紫紫孢菌Purpureocillium lilacinum PLHN的菌丝生长、产孢量及孢子萌发的影响均较小,且对象耳豆根结线虫的LC50为0.107 mg/L, LC99为0.792 mg/L,绝对致死浓度为0.8 mg/L。复配组合中甲维盐0.4 mg/L(减量50%)+75% PLHN和甲维盐0.6 mg/L(减量25%)+50% PLHN对根结线虫2龄幼虫和卵的抑杀作用均优于其他组合。盆栽防效表明:0.6 mg/L甲维盐(减量25%)+50%PLHN复配组合的防效最好,对根结形成有一定的抑制作用,防治效果与全量甲维盐相当,并能促进番茄植株的生长;0.6 mg/L甲维盐+25% PLHN和0.4 mg/L甲维盐+75%PLHN次之。甲维盐和淡紫紫孢菌PLHN的复配使用,不仅甲维盐能减量25%～50%,还能弥补生物防治稳定性较弱、持效期不长等不足,是植物线虫病防治的可选策略之一。     

Effects of DL-methionine on hatching and activity of Meloidogyne incognita eggs and juveniles

Several concentrations of DL-methionine were tested in the laboratory for their effects on Meloidogyne incognita (Kofoid & White) Chitwood egg hatching and juvenile activity in aqueous suspensions and infested soil. After 7 days in methionine solutions, the proportions of hatched eggs were reduced by 23.3% at 0.25 mg litre(-1) methionine and by 76.4% at 25 g litre(-1) when compared with controls in tap water. An effect of methionine solutions on juvenile activity was also apparent after 24 h in the 25 g litre(-1) treatment, where the percentage of active M incognita juveniles was reduced by 16.3%. Further reductions in nematode mobility were observed as the time of exposure increased, and at lower methionine concentrations over longer exposure times. When methionine solutions were applied to soil infested with M incognita, reductions in egg hatching and juvenile activity were observed at 0.1 and 1 mg methionine g(-1) soil in both sand and clay-loam soils. The percentage of hatched eggs one week after methionine application at rates of 1 mg g(-1) was lower in sand (5.6%) and clay-loam soil (20.8%) than in controls where egg hatch was 52.0% and 48.0% in sand and soil, respectively. Non-active juveniles were found at 1 mg methionine g(-1) soil one week after its application to soil.     

南方根结线虫二龄幼虫对不同类型盐离子的趋化反应

为了明确南方根结线虫对不同类型盐离子的趋化性,在琼脂糖平板培养基上测试了南方根结线虫2龄幼虫对37种无机盐和11种有机盐的趋化反应。结果表明,Cl-和SCN-盐对南方根结线虫均有排斥作用;对南方根结线虫有排斥作用的NO-3盐为Ba(NO3)2、NH4NO3、Mn(NO3)2;H2PO-4或HPO2-4盐为KH2PO4、K2HPO4;CO2-3或HCO-3盐为 Na2CO3、K2CO3、(NH4)2CO3 和KHCO3;OH-盐为KOH和 NaOH;有机酸为C2H4O2、C3H6O3和C4H6O6。含有相同阳离子的不同盐对南方根结线虫的吸引或排斥作用不受影响。阴离子对南方根结线虫的排斥作用大小为SCN->NO-3>Cl->OH->CO2-3> H2PO-4>有机酸>SO2-4。只有KCl、Ba(NO3)2、NH4NO3、Mn(NO3)2、(NH4)2CO3、C2H4O2和 C4H6O6对线虫的趋化性随浓度的增加而增加,而其他被测试的41种盐浓度对线虫的趋化性没有显著影响。     

Evaluation of loop‐mediated isothermal amplification (LAMP) assays based on 5S rDNA‐IGS2 regions for detecting Meloidogyne enterolobii

A loop‐mediated isothermal amplification (LAMP) assay for detection of Meloidogyne enterolobii (Me‐LAMP) was developed based on the sequences of the 5S ribosomal DNA (5S rDNA) and intergenic spacer 2 (IGS2) segment. The LAMP amplification was achieved at 65°C isothermal conditions within 1–1·5 h. Its amplicons were confirmed using gel electrophoresis, SacI enzyme analysis, lateral flow dipstick (LFD) assay, and visual inspection through SYBR Green I and calcein staining. The results demonstrated that the Me‐LAMP was able to specifically detect M. enterolobii populations from different geographical origins, with a detection limit of about 10 fg M. enterolobii genomic DNA, which was 10–100 times more sensitive than conventional PCR. In addition, the applicability of LAMP to field detection was confirmed following its successful performance in detecting the pest on root and soil samples. The Me‐LAMP assay possessed the characteristics of simplicity, sensitivity and specificity, and is a promising and practical molecular tool for M. enterolobii diagnosis in pest quarantine and field surveys.