多主棒孢菌在黄瓜、番茄和茄子寄主上致病力的分化

 对从山东、辽宁和北京蔬菜栽培地采集的黄瓜、番茄及茄子发病组织上分离的31株多主棒孢菌,和从海南橡胶上分离的10株多主棒孢菌,采用喷雾接种的方法,测定其在盆栽黄瓜、番茄和茄子上的致病力。试验结果表明,不同寄主来源菌株的致病力间存在明显的差异,寄主来源同致病力分化之间具有显著的相关性,从而证明多主棒孢菌的种内菌株存在寄主专化性的特征。相同寄主和相同地理来源的病原菌群体中致病力也存在强、中、弱的差异,说明多主棒孢菌具有明显的致病力分化现象。     

山东省黄瓜棒孢叶斑病（褐斑病）病原菌鉴定和防治

对黄瓜棒孢叶斑病（褐斑病）在山东省的为害、症状特点、生物学特性以及病原菌的鉴定进行了研究。根据病原菌的形态特征和致病性,并结合其rDNA ITS区域的序列分析,将引起山东省黄瓜棒孢叶斑病的病原菌鉴定为多主棒孢霉〔Corynespora cassiicola(Berk & Curt)Wei.〕。室内测定和田间防治试验结果表明,43 %戊唑醇悬浮剂和33.5 %喹啉铜悬浮剂对黄瓜棒孢叶斑病的防治效果可达90.49 %。     

多主棒孢菌CcTLS1对黄瓜的致病机理分析

为了解多主棒孢菌CcTLS1基因对黄瓜棒孢叶斑病的致病机理,以多主棒孢菌强致病力菌株HG14102524和弱致病力菌株HG15052104为研究对象,通过对CcTLS1在强致病力菌株中敲除、回补以及在弱致病力菌株中异源表达等方法,研究CcTLS1在多主棒孢菌对黄瓜致病过程中的作用。CcTLS1全长为1 222 bp,与GenBank中已注释的基因无序列相似性。与野生型菌株相比,CcTLS1基因敲除菌株对黄瓜的致病力明显下降,产孢量和产孢梗数量显著减少,菌丝变细易卷曲,隔膜减少,纤维二糖水解酶分泌显著降低;而CcTLS1回补菌株致病力、产孢量以及纤维二糖水解酶分泌得到恢复;与野生型菌株相比,CcTLS1异源表达菌株对黄瓜的致病力提升,菌丝粗壮且隔膜增多,纤维素酶及纤维二糖分解酶分泌显著增加。影响多主棒孢菌致病的蛋白激酶基因CCK1、产孢相关基因（Ccflbc、CcstuA）以及黑色素合成相关基因CcSCD1,在CcTLS1基因敲除菌株中的相对表达量显著下调。结果表明,CcTLS1的表达影响菌株产孢机制、菌丝生长、蛋白激酶表达以及黑色素合成,在多主棒孢菌致病中起重要作用。     

黄瓜多主棒孢菌致病基因CcTLS2功能探究

为探究CcTLS2基因在多主棒孢菌（Corynespora cassiicola）致病过程中的作用,以强致病力菌株HG14102524为研究对象,通过克隆多主棒孢菌CcTLS2基因,构建Cc TLS2敲除株,并结合生物信息学分析、致病力测定、差异表达分析等方法,初步确定了CcTLS2对多主棒孢菌致病的影响。与野生型菌株相比,CcTLS2基因敲除菌株致病力丧失,菌落生长速度变慢,产孢量显著减少。多主棒孢菌G蛋白信号途径相关基因（A7125、A1402、A0835、A8311和A2529）在CcTLS2敲除株中的相对表达量显著下调。结果表明,CcTLS2可能通过G蛋白相关途径影响多主棒孢菌的产孢机制、菌丝生长和致病力,在多主棒孢菌致病中起重要作用。     

黄瓜棒孢叶斑病菌PCR检测方法的建立

根据黄瓜棒孢叶斑病菌多主棒孢（Corynespora cassiicola）与棒孢属下女贞棒孢（Corynesporalieustri）、威尔士棒孢（Corynespora cambrensis）和其他常见病原真菌Actin 基因序列差异,设计多主棒孢的特异性引物Caa5F/Caa5R,建立了黄瓜棒孢叶斑病菌的PCR 检测方法,可对引起黄瓜棒孢叶斑病的病原菌扩增出160 bp 的特异性条带,检测灵敏性为4 pg · μL-1 DNA,并可从接种后发病的黄瓜叶片总DNA中检测到特异条带。该引物的PCR 检测方法灵敏性较高,可直接检测植株总DNA,无需病原菌的分离培养,适用于对黄瓜棒孢叶斑病特异快速的检测。     

多主棒孢SdhB-H278Y突变位点real-time PCR检测体系的建立与应用

根据Gen Bank已登录序列中黄瓜多主棒孢琥珀酸脱氢酶B亚基(Sdh B)基因序列差异，针对Sdh B-H278Y突变设计特异性引物，建立Sdh B-H278Y突变实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测体系。结果表明：供试多主棒孢携带Sdh B-H278Y、Sdh B-I280V突变；Sdh B-H278Y突变株对啶酰菌胺抗性较强，EC₅₀值为21.47μg·m L^-1或>30μg·m L^-1；建立的real-time PCR检测体系具有良好的线性关系，相关系数R²=0.992 9，可特异性检测Sdh B-H278Y突变，灵敏度为3.6×10^-4ng·μL^-1，为AS-PCR的10倍。利用携带Sdh B-H278Y突变不同比例的基因组DNA对检测体系进行验证，预期值与检测值具有很高的相关性，R²=0.999 7；利用该检测体系对山东地区黄瓜棒孢叶斑病病斑中多主棒孢Sdh B-H278Y突变株所占比例进行检测，检测...     

甜瓜靶斑病病原菌鉴定

甜瓜(Cucumis melo L.)是我国重要的瓜类经济作物。2015年10月在我国广西武鸣甜瓜主要种植区进行病害调查时发现一种新的叶斑病。该病原菌疑似通常危害植物叶片引起叶斑病的多主棒孢菌。采用形态学观察,多基因鉴定和致病性试验的方法对引起该病的病原菌进行了鉴定。病原菌菌落中间墨绿色,边缘浅褐色,有明显的生长圈,气生菌丝茂密。分生孢子呈圆柱形或倒棍棒形,单生或串生,直立或稍微弯曲,具0～13个隔膜,大小为(3.1～6.4)μm×(14.0～138.9)μm。克隆测定该病原菌的4个保守序列ITS1,2、ITS4,5、ACT和TUB2。分离纯化的病原菌回接到甜瓜幼苗,表现出与田间相似的症状,符合柯赫氏法则,鉴定该病原菌为多主棒孢。该病原菌也可侵染西瓜(Citrullus vulgaris Schrad.)和黄瓜(Cucumis sativus L.)幼苗及离体叶片使其发病。     

武汉地区黄瓜靶斑病病原鉴定及生物学特性研究

2011年7月在武汉黄陂发现黄瓜靶斑病,对病样进行分离、致病性测定、形态学鉴定,并对病原进行了生物学特性研究。结果表明,引起武汉地区黄瓜靶斑病的病原菌为多主棒孢霉(Corynespora cassiicola)。这是多主棒孢霉在武汉引起黄瓜靶斑病的首次报道。生物学特性研究结果表明,光照有利于病原菌菌丝生长;病原菌菌丝生长的适宜温度范围为25~30℃;最适宜p H值为6~9;病原菌能够利用多种碳源和氮源,碳源以麦芽糖利用效果最好,氮源以硝酸钾利用效果最好。     

黄瓜棒孢叶斑病菌的毒力分化及AFLP分析

以6个黄瓜品种(系)为试材,以来自山东、辽宁、黑龙江的200个黄瓜棒孢叶斑病菌为供试菌株,采用苗期接种鉴定及AFLP分子标记技术,研究了黄瓜棒孢叶斑病菌的毒力分化。结果表明:黄瓜棒孢叶斑病菌存在生理小种分化现象,并将200个菌株分为4个生理小种,初步筛选出D0330、D1306、D0649和D2025作为研究黄瓜棒孢叶斑病菌生理小种分化的鉴别寄主备选材料;AFLPs与菌株的地理来源无关,与毒力存在相关性。     

广东黄瓜棒孢叶斑病（褐斑病）的发生及品种抗病性鉴定

黄瓜（Cucumis sativus）是广东省主要蔬菜作物之一,年种植面积15 万hm 2 以上。由半知菌亚门棒孢属（Corynespora） 多主棒孢霉（Corynesporacassiicola） 侵染引起的黄瓜棒孢叶斑病又称为褐斑病、靶斑病,是近年来黄瓜生产上重要病害之一（杨双娟等,2012）,目前已在山东、河北、北京、辽宁、吉林、河南、云南、海南、宁夏、甘肃和上海等11 个省（市、区）发生为害,春秋种植的黄瓜发病比较严重,病害发生率达到30% 以上（高苇,2011）。2011 年,笔者在广东首次发现黄瓜棒孢叶斑病的危害。     

海南冬瓜褐斑病病原鉴定

为了明确海南冬瓜种植基地发现的冬瓜新病害病原菌种类,将从澄迈县采集的病样进行分离纯化培养后观察分析。结果显示:该病害为冬瓜褐斑病,根据病原菌形态特征和致病性鉴定为多主棒孢〔Corynespora cassiicola(BerkCurt)Wei〕,序列比对结果与多主棒孢同源性为100%,且与不同地区的多主棒孢均属于同一分支,确定病原菌为多主棒孢。     

68.75%噁酮锰锌水分散粒剂对黄瓜褐斑病的防治效果

以黄瓜褐斑病〔Corynespora cassiicola(Berk.Curt.)Wei.〕为供试病原菌,通过室内生物活性测定和田间小区防效试验,测定了噁酮锰锌对黄瓜褐斑病的防效。室内生物活性测定结果表明,噁酮锰锌和代森锰锌对黄瓜褐斑病菌的EC_(50)分别为1.16 mg·L~(-1)和6.23 mg·L~(-1)。田间试验结果表明,用68.75%噁酮锰锌水分散粒剂468.0、625.5、937.5 g·hm~(-2)连续3次施药后,对黄瓜褐斑病的防效可达到78.61%、89.33%和90.28%。且试验浓度下对黄瓜安全,无药害产生。     

辽宁省豇豆轮纹病病原菌鉴定及其生物学特性

对辽宁省新发现的病害——豇豆轮纹病的发病症状进行了描述,并对其病原菌进行了鉴定,
对病菌生物学特性进行了初步测定。结果表明,通过柯赫氏法则证病试验,经形态学及分子生物学技术鉴
定,并与基因库中Corynespora cassiicola（Berk and Curt.）序列进行比对,相似性达99%,鉴定豇豆轮
纹病的致病菌为多主棒孢霉Corynespora cassiicola（Berk and Curt.）。生物学特性测定结果表明,病原菌
菌丝在豇豆叶煎汁培养基上生长最快,碳源和氮源以甘露醇和牛肉浸膏最佳,最适温度为28 ℃,最适pH
为8～10;分生孢子产生的最佳培养基为豇豆种子煎汁培养基,最佳碳源为麦芽糖,最佳氮源为牛肉浸膏,
最适温度为28 ℃,最适pH 值为9,光暗交替培养利于孢子的产生;分生孢子萌发的最适温度为28 ℃,
最适pH 值为7～10;菌丝致死温度为65 ℃,10 min;分生孢子致死温度为60 ℃,10 min。     

黄瓜褐斑病防治药剂的活体筛选

选取蔬菜上常用的11种杀菌剂,运用活体微量筛选方法,测定了供试药剂对黄瓜褐斑病的生物活性,并挑选出活性最好的4种药剂进行田间小区试验。试验结果表明:所选的4种药剂75%百菌清可湿性粉剂、50%福美双可湿性粉剂、25%咪鲜胺乳油和70%代森锰锌可湿性粉剂对黄瓜褐斑病的田间最高防效可分别达到92.71%、89.16%、87.31%和73.20%,是防治黄瓜褐斑病的优良杀菌剂。     

黄瓜靶斑病药剂防治持效期的离体研究

离体条件下研究了7种杀菌剂对黄瓜靶斑病病菌防治的持效性。结果表明,不同药剂对病菌菌丝生长抑制的持效期不同。福美双对病菌的抑制效果最好,持效期达15 d以上,15 d后抑菌率仍达85%以上;溴菌腈、苯醚甲环唑、异菌脲对病菌菌丝生长也有较好的抑制效果,持效期也可达15 d;腈苯唑、烯肟菌酯对病菌的抑制效果较差,持效期为7 d;甲基托布津的抑菌效果最差,对病菌菌丝生长几乎没有抑制作用。     

黄瓜褐斑病菌室内药剂筛选试验

采用生长速率法测定了6种杀菌剂对黄瓜褐斑病菌的毒力。结果表明,6种药剂对褐斑病菌的作用效果存在很大差异。室内测定抑菌效果最好的是50%多.福.锰锌可湿性粉剂在25 600倍液、10亿个.g-1枯草芽孢杆菌可湿性粉剂在19 200倍液时抑菌率均为100%,20%烯肟.戊唑醇、430 g.L-1戊唑醇悬浮剂和75%肟菌.戊唑醇水分散粒剂次之。该结果为田间防治试验提供了理论依据。     

黄瓜靶斑病菌的生物学特性

黄瓜靶斑病菌在10～35℃下均能生长,以30℃左右最适。分生孢子萌发的温度范围为10～35℃,以25～30℃最适;同时要求90％以上的相对湿度,在水滴中萌发率最高。光照对菌丝生长有促进作用,但对孢子的产生有抑制作用,紫外线对孢子有杀伤作用。     

黄瓜棒孢叶斑病(Corynespora cassiicola)的研究概况

黄瓜棒孢叶斑病(Corynespora cassiicola)是近年来国内流行的一种新病害,对黄瓜生产造成的损失日益严重。本文综述了黄瓜棒孢叶斑病的命名、分类、发病规律、抗病鉴定技术、抗病资源和防治方法。并针对研究中存在的问题,对今后的研究方向进行了展望。