鸽胚胎嗉囊成纤维细胞的分离培养及鉴定

为探究鸽嗉囊成纤维细胞的体外分离及培养方法,研究选择17日胚龄的鸽嗉囊组织,采用胰酶消化法和组织块贴壁培养法进行原代细胞分离,通过差速贴壁法纯化成纤维细胞.通过细胞形态观察、生长曲线测定和免疫荧光反应对细胞类型进行鉴定.结果 表明,采用胰酶消化法分离培养30 h后细胞开始生长,采用组织块贴壁培养法的细胞培养72 h后开...     

重金属铅暴露对家蚕组织GSTs和GSH-Px酶活力及基因表达的影响

谷胱甘肽S-转移酶(GST)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)是生物体内重要的解毒酶。为了研究重金属铅对鳞翅目昆虫的影响机制,给家蚕添食Pb(NO3)2进行Pb2+暴露,用酶活测定和real-time PCR方法,调查家蚕5龄6 d幼虫不同组织中酶活性及相关基因mRNA转录水平的变化。正常家蚕5龄6 d幼虫生殖腺中的GST酶活性分别是脂肪体和中肠中的20.0倍、34.6倍,GSH-Px酶活性分别是脂肪体和中肠中的57.7倍、46.6倍。幼虫食下含10 mg/kg Pb2+以上的人工饲料时,生殖腺中2种解毒酶的活性成倍下降;人工饲料含20～80 mg/kg Pb2+时,生殖腺中的Gstd1和Gsh-Px基因mRNA转录水平也显著下调,且雄性比雌性更加显著。幼虫食下含10～160 mg/kg Pb2+的人工饲料时,脂肪体中2种解毒酶活性显著升高,Pb2+对2种酶的影响浓度分别为10～160 mg/kg和20～80 mg/kg,但在20～80 mg/kg Pb2+范围内,Gsh-Px和Gstd1基因mRNA的转录却受到抑制,并且雌性幼虫脂肪体中的GSH-Px酶活性及其基因mRNA转录水平、雄性幼虫脂肪体中的GST酶活性及基因mRNA转录水平对Pb2+暴露更加敏感。幼虫食下含20 mg/kg Pb2+以上的人工饲料时,中肠的GST酶活性显著上升,而GSH-Px酶活性变化较小,性别间差异不明显;Gstd1基因mRNA转录水平有上调趋势,Gsh-Px基因mRNA转录水平则受到显著抑制。结果显示,家蚕幼虫生殖腺虽然有比脂肪体和中肠更强的GST酶和GSH-Px酶活性,但对Pb2+的毒害敏感,雄性比雌性受影响更大,生殖腺通过抗氧化防御系统抵御Pb2+毒害的作用很弱。     

毛滴虫在鸽肝组织原代外植块培养液中的生长研究

分别从3组不同日龄鸽消化道(口腔、嗉囊及内脏)采集毛滴虫特征性病变内容物,经处理后接种在健康鸽肝脏组织块原代外植pH 7.0培养液中,置37.5℃培养.250倍光学显微镜观察,虫体在24～36h生长达到高峰,数量为200～517个/μL,大量虫体定殖肝组织块中,并进行阿米巴样快速游动,同时可见数百虫体黏附聚集瓶底绞结成团及大量体积增加两倍的分裂体.5d后在瓶底可见死亡虫体,7d后活虫体数量逐渐下降,12d活虫体减至20个/μL,培养基液pH 6.0.每隔7d传代培养,最多可传至F1.代.     

体外培养奶牛乳腺上皮细胞的形态学观察

荷斯坦奶牛是我国饲养的主要奶牛品种。研究荷斯坦奶牛乳腺发育的生理、病理对于奶牛育种和保障奶牛健康均具有重大意义。因此，进行荷斯坦奶牛的乳腺上皮细胞分离培养及形态学研究，可为今后的工作奠定基础。本研究在形态学方面对培养的乳腺上皮细胞进行了系统的阐述，以期对今后的研究提供借鉴。     

β-激动剂对体外培养的瘤胃微生物活力的影响

β-激动剂在提高反刍动物饲料转化率和胴体瘦肉率等方面比对其它动物的作用更明显。为探讨其作用是否与瘤胃代谢有关 ,本实验研究了 β-激动剂对瘤胃微生物活力的影响。实验选用了3种 β-激动剂———盐酸肾上腺素、克伦特罗(Clenbuterol)和塞曼特罗(Cimaterol) ,各设5个不同剂量(0.125 ,0.250 ,0.500 ,1.000 ,2.000mg/kg) ,研究不同剂量的β-激动剂对体外培养的瘤胃微生物产气量、微生物蛋白含量、底物消失率的影响。结果表明 :产气量、微生物蛋白含量和底物消失率与 β-激动剂之间存在着显著的量效关系。盐酸肾上腺素在0.5mg/kg 时微生物蛋白浓度最高(0.0917mg/ml) ,底物消失率最大(37.79 %) ,气体累计产量最大(269.06ml)。克伦特罗在0.5mg/kg 时微生物蛋白浓度最高(0.1167mg/ml),底物消失率最大(39.63 %) ,气体累计产量最大(269.38ml)。塞曼特罗在0.5mg/kg时 ,微生物蛋白浓度最高(0.1125mg/ml) ,1mg/kg 时气体累计产量最大(265.39ml)。3种 β-激动剂都显著促进了瘤胃微生物体外培养的活力(对照组微生物蛋白浓度为0.087mg/ml,底物消失率31.53 %,气体累计产量209.3ml) ,其中克伦特罗的作用最显著。本实验提示瘤胃微生物细胞本身可能存在 β-受体。     

光镜观察氟苯哒唑对体外培养鼠蛲虫的活力,产卵及形态学影响

光镜观察氟苯哒唑对体外培养鼠蛲虫的活力、产卵及形态学影响许正敏，胡生梅（襄攀市卫生学校４４１０２１）许敏，余波（襄樊市第一医院）氟苯哒唑国外试用于临床、对钩虫、鞭虫、蛔虫等均有良好疗效，对鼠蛲虫效果如何，尚未见报道，本文以光镜观察氟苯哒对体外培养鼠蛲...     

酶消化组织块法体外培养奶牛乳腺上皮细胞

建立稳定培养奶牛乳腺上皮细胞系的方法。结合酶消化法和组织块法,在体外进行分离培养奶牛乳腺上皮细胞,利用胰酶消化进行纯化和传代。通过倒置显微镜观察、细胞爬片姬姆萨染色和角蛋白18免疫组织化学方法对培养的细胞进行形态学观察和鉴定。观察发现,细胞排列紧密,呈多角形或梭形,长满后呈铺路石样。胞核呈圆形或椭圆形,核仁清晰可见,多为3~5个。通过细胞角蛋白18免疫组织化学方法对乳腺上皮细胞进行鉴定,呈阳性反应。获得的乳腺上皮细胞增殖旺盛,培养至40代生长活性仍然稳定。酶消化组织块法成功培养出奶牛乳腺上皮细胞,是分离乳腺上皮细胞的一种有效方法。     

蛇床子素体外抗鸽毛滴虫的效果及形态学观察

为了观察蛇床子素体外抑制鸽毛滴虫的效果及其对形态学的影响,试验分为4组,蛇床子素浓度分别为0(空白)、1、3、5 mg/m L,分别在培养2、4、6、8、12、24 h从各组取样,于光学及电子显微镜下观察鸽毛滴虫的形态学变化,记录死亡情况。结果显示:随着蛇床子素浓度的增加,鸽毛滴虫的死亡率随之升高,死亡时间随之缩短。5 mg/m L组的效果最佳,用药12 h即可杀灭全部的毛滴虫;浓度为1 mg/m L的药物组至24 h仍未全部死亡;浓度为3 mg/m L的药物组至24 h全部死亡。扫描电镜观察显示,药物作用初始阶段鸽毛滴虫由梨形逐步变圆,形态完整;不久虫体边缘模糊,表面出现皱褶,局部有凹陷;接着凹陷面积扩大,内部出现空洞,虫体形状变得不规则,最后虫体崩解成碎片。结果表明蛇床子素具有明显抗鸽毛滴虫的效果。     

高能微波对体外培养乳鼠心肌细胞生长活力的影响

体外培养的心肌细胞可保持心肌结构及功能上的诸多特点 ,有自发性节律性搏动 ,且不受神经、体液等体内因素的影响 ,因而在实验研究上得到了广泛应用。目前 ,乳鼠心肌细胞的培养方法较多 [1 ] ,但由于心脏细胞成分复杂 ,心肌细胞培养过程较为繁琐 ,应根据实验目的摸索简便快捷的培养方法。随着微波技术的应用 ,微波污染也日益增多 ,并成为日常影响人畜身体健康的主要物理因素之一 [2 ]。本试验对乳鼠心肌细胞的培养方法作了改进 ,并观察了高能微波对乳鼠心肌细胞生长活力的影响。1　材料与方法1 .1　动物　生后 1～ 3d的 Wistar大鼠 (二级 )…     

体外法研究米曲霉培养物对瘤胃发酵参数及微生物酶活性的影响

本试验旨在通过体外产气试验研究高酶活力的米曲霉培养物(AOC)对瘤胃发酵的影响。以米曲霉产酶特性为标准研制米曲霉培养物,体外法研究0、3、6、12 mg米曲霉培养物对瘤胃发酵和微生物酶活力的影响。结果表明:培养48 h的AOC酶活力最高(P<0.05);与对照组相比,添加6、12 mg AOC显著增加了24 h产气量、微生物蛋白浓度、总挥发性脂肪酸、乙酸和丙酸的含量(P<0.05),12 mg AOC组的氨态氮浓度显著高于其他各组(P<0.05)。6 mg AOC组微晶纤维素酶活性显著高于其他组(P<0.05),木聚糖酶活性显著高于对照组和3 mgAOC组(P<0.05);12 mg AOC组的羧甲基纤维素酶和淀粉酶活性显著高于对照组和3 mg AOC组(P<0.05)。综上所述,添加米曲霉培养物可通过提高瘤胃微生物酶活性而促进体外瘤胃发酵。     

犊牛睾丸组织培养及PGP 9.5基因的检测

收集新生牛睾丸,进行组织学观察与组织的体外培养,在10%血清培养液中培养1周和2周后进行组织学观察与RT-PCR分析。结果表明:新生牛睾丸组织经体外培养1周时,管腔直径增大,精原干细胞数明显增多;体外培养2周时,管腔直径继续扩增,精原干细胞数量减少;在新鲜睾丸组织、培养1周和2周的睾丸组织中PGP 9.5持续表达。     

酵母培养物对山羊瘤胃纤维素酶活及挥发性脂肪酸的影响

在高精料日粮条件下,以4头装有永久性瘤胃瘘管的本地山羊为试验动物,采用4×4拉丁方设计,研究酵母培养物(0、20、30、和40g/d)对山羊瘤胃纤维素酶活及挥发性脂肪酸(VFA)的影响。结果表明:日粮中添加酵母培养物有提高瘤胃中性洗涤纤维(NDF)、酸性洗涤纤维(ADF)消失率及羧甲基纤维素酶活、木聚糖酶活的趋势,但差异均不显著(P>0.05)。日粮中添加酵母培养物能够提高瘤胃乙酸、丙酸、丁酸、TVFA浓度及乙酸丙酸比。与对照组相比,早饲后4h时,20g/d处理组乙酸浓度提高22%(P<0.05),TVFA浓度提高21%(P<0.05),30g/d处理组的丙酸浓度提高11%(P>0.05);18h时,30g/d处理组乙酸浓度和TVFA浓度较对照组分别提高32%(P<0.05)和28%(P<0.05)。     

蒙古马睾丸支持细胞的体外分离培养与鉴定

为研究一种简单快速分离蒙古马睾丸支持细胞并保证其活性的基本方法,本试验采集2岁蒙古马睾丸组织于低温环境下进行机械分离,将1~3 g睾丸组织剪碎,采用重力沉淀法去除游离的红细胞和间质细胞;使用0.1%胶原酶Ⅳ和0.25%胰蛋白酶+EDTA逐步进行组织消化,并用含有10%胎牛血清的培养基进行细胞培养;在接种后采用差异贴壁法分离纯化支持细胞,使用Tris-HCl低渗法去除杂质细胞,并采用碱性磷酸酶（AKP）染色、HE染色、实时荧光定量PCR方法进行鉴定。结果显示,支持细胞贴壁性能较强,培养24 h后大多数细胞开始贴壁,细胞形状呈椭圆形;培养48 h后胞质增多,折光性变强;培养3~4 d细胞胞质展开紧密连接,此时细胞呈三角形,有明显的核仁,培养6~7 d细胞生长状态进入稳定期。实时荧光定量PCR结果显示,GATA4和GDNF基因在培养细胞中极显著表达（P<0.01）,AKP染色支持细胞呈阴性表达,表明分离培养的细胞确为支持细胞。本试验使用机械分离法与两步酶消化法处理组织,可快速高效地获得睾丸支持细胞,成功构建了蒙古马睾丸支持细胞体外培养方法。     

Isolation,Culture and Identification of Testis Sertoli Cells in Mongolian Horses in vitro

To study a simple and rapid separation of testis Sertoli cells in Mongolian horses and ensure their activity,the testis tissue of two-year-old Mongolian horses was mechanically isolated under a low temperature environment in this experiment,and 1-3 g of testis tissue was chopped,the free red blood cells and interstitial cells were removed by gravity precipitation method.0.1% collagenase Ⅳ and 0.25% trypsin-EDTA were used for tissue digestion, and cells were cultured in medium containing 10% fetal bovine serum.After inoculation,the purified Sertoli cells were isolated and purified by differential sticking method,and the impurity cells were removed by Tris-HCl infiltration method,and were identified by alkaline phosphatase (AKP) staining,HE staining and Real-time quantitative PCR.The results showed that most of the cells began to adhere to the wall after culture 24 h,and the shape of the cells was oval.After culture 48 h,the cytoplasm increased and the refraction became stronger.After culture 3-4 d,the cytoplasm of the cells expanded into tight junction.At this time,the cells were triangular with obvious nucleoli.After culture 6-7 d,the cells entered the stable phase.Real-time quantitative PCR results showed that the expression of GATA4 and GDNF genes were extremely significantly expressed in cultured cells (P<0.01).AKP staining supported the negative expression in Sertoli cells,indicating that the isolated cultured cells were indeed Sertoli cells.In this experiment,tissue was treated by mechanical separation and two-step enzyme digestion,and testicular support cells were obtained quickly and efficiently,the method of culturing Sertoli cells in Mongolian horses testis in vitro was successfully constructed.     

瘤胃真菌体外培养条件对其产酶活性的影响

本文主要从环境因素、营养因素和其他因素等方面阐述了瘤胃真菌体外培养条件对其产酶活性的影响。     

牛体外受精卵的二步法培养体系的研究

以CR1aa为基础培养液,采用二步法对牛体外受精卵进行体外培养,完善牛体外受精卵的培养体系.实验一:对照组连续7 d均为CR1aa 50 mL/L FBS培养,处理组前3 d为CR1aa 3 mg/mLBSA培养,后4 d换为CR1aa 50 mL/L FBS.处理组的囊胚率显著高于对照组,但卵裂率和囊胚孵化率无显著差异.实验二:对照组连续7 d均为CR1aa 50 mL/L FBS培养,处理组前3 d为CR1aa培养,后4 d换为CR1aa 50 mL/L FBS.处理组的卵裂率显著高于对照组,但囊胚率和囊胚孵化率差异不显著.实验三:对照组连续7 d均为CR1aa 50 mL/L FBS 0.1mmol/L GSH培养,处理组前3 d为CR1aa 0.1 mmol/L GSH培养,后4 d换为CR1aa 50 mL/L FBS 0.1 mmol/L GSH.处理组的卵裂率显著高于对照组,囊胚率极显著高于对照组,但囊胚孵化率差异不显著.结果表明,GSH与二步法培养系统结合相对于传统的一步法培养系统更适于牛体外受精卵的体外培养.     

猪附红细胞体培养方法及药敏试验研究

为实现抗猪附红细胞体药物的高通量筛选,拟建立稳定可靠的体外培养方法,并应用其进行药敏试验.采用单因素试验法,分别对培养基种类、胎牛血清添加比例、动物红细胞泥种类、换液和传代间隔时间进行考察.应用建立的方法对猪附红细胞体进行体外培养,并以贝尼尔、青蒿素作为阳性对照药物,对咪唑苯脲、四环素、强力霉素等8种药物进行药敏试验....     

鸡精原细胞分离纯化与体外培养初探

本研究以组合酶分步消化法并利用Percoll梯度分离、贴壁纯化的方法，从不同时期的鸡睾丸组织中分离精原细胞。结果发现：①Percoll分离后，出壳6d雏鸡获得的细胞总数、精原细胞总数、精原细胞纯度分别为282．1、174．6、61．9％，其中精原细胞纯度比孵化15d、19d鸡胚和出壳后13d雏鸡分别高10．2％、5．7％和2．5％；②贴壁纯化后精原细胞纯度达到82％，比未经贴壁纯化的精原细胞纯度高出15．6％；③在无饲养层培养条件下，比较Percoll梯度分离前、后鸡精原细胞体外培养的情况，Percoll梯度分离前精原细胞贴壁在时间上比分离后较快，且分离前精原细胞体外存活时间亦比分离后长。     

鸡小肠上皮细胞的分离培养与鉴定

选择组织块法分离培养鸡小肠上皮细胞(intestinal epithelial cells,IEC),采用机械刮除法和相差消化－相差贴壁法纯化细胞,0.05%的Trypsin-EDTA对获得的IEC进行消化传代,免疫细胞化学法鉴定IEC。结果表明,组织块培养法可分离出活性较强的IEC,并获得纯化的上皮细胞;形态学和免疫细胞化学法检测显示获得的细胞表面抗原呈阳性,鉴定为IEC;纯化的IEC可在体外稳定传代。