一种从果树成熟叶片提取DNA的方法

针对果树成熟叶片富含多糖、多酚及其它次生代谢物质的特点,以8个果树树种的秋季成熟叶片为材料,采用改进的CTAB法对其基因组总DNA进行了提取,并对得到的DNA进行了电泳检测、含量测定和AFLP分析。结果表明,该方法从8种果树的成熟叶片中均能提取出基因组总DNA,且DNA的纯度和完整性都较好,D260nm/D280nm的比值均在1.8～2.0之间,无降解现象,RNA去除干净,能被限制性内切酶完全消化;其AFLP分析(引物组合为EcoRI-TA/MseI-CTT,EcoRI-TT/MseI-CTT)条带清晰,多态性好,说明此方法提取的果树成熟叶片基因组总DNA完全适于AFLP分析。     

一种简易快速提取洋葱线粒体DNA 的方法

以哈尔滨长日圆葱研究所提供的洋葱细胞质雄性不育系A为试材 ,取其块茎 50g剪碎 ,加入 10 0mL预冷的缓冲液A〔30mmol/L甘露醇 ,50mmol/LTris HCl,3mmol/LEDTA ,0 1%BSA ,10mmol/Lβ-巯基乙醇 (pH 8 0 )〕 (按 1∶2比例 ) ,捣碎后 ,4层无菌纱布过滤 ,滤液 150 0g离心 10min ,弃沉淀 ,上清液 12 0 0 0g离心 15min,弃上清 ,加入 10mL缓冲液A悬浮沉淀 ,150 0g离心 10min ,弃沉淀。上清液加入 1mol/LMgCl2 终浓度 10mmol/L ,DNaseⅠ至 10 0 μg/mL ,冰上放置 1h,然后加入 3倍体积的缓冲液B〔1 2 5mol/LNaCl,50mmol/LTris HCl,2 0m…     

一种快速提取南瓜大群体基因组DNA的方法

基因型鉴定是作物分子标记辅助育种和基因功能遗传分析中十分重要的环节,此项技术的应用正日渐频繁,因而迫切需要一种高通量筛选的方法。本试验以南瓜中筛选到的互补型SSR引物为验证手段,在种子阶段比较了钻孔法和萌芽法采用碱煮法提取DNA的效果,并且在成熟植株阶段验证了各组织部位采用碱煮法提取DNA的效果。结果表明:使用萌芽的南瓜种子根尖以碱煮法提取DNA是可用于种子纯度测定的快速方法;成熟植株各部位采用碱煮法提取DNA均可用于植株基因型筛选。     

一种快速高效提取柑桔样品病原DNA的方法

为从柑桔样品中快速获得高质量的病原DNA,在传统CTAB法基础上,结合热萃取技术,新建立了一种快速提取病原DNA的CTAB简化法。与Solarbio植物基因组DNA提取试剂盒和传统CTAB法相比,该方法所需时间短,1～2 h即可完成整个提取过程,获得的DNA质量高、产量多。采用上述方法提取黄龙病、溃疡病、褪绿矮缩病等3种柑桔病害样品DNA进行PCR检测,CTAB简化法和传统CTAB法的检出结果一致,试剂盒的检出率稍低。新建立的CTAB简化法,适用于柑桔病害大规模DNA检测。     

胡萝卜叶片线粒体DNA的提取方法

提取高质量的线粒体DNA,对植物细胞质雄性不育的研究起着关键性的作用。以胡萝卜叶片为材料,通过高盐差速离心和蔗糖沉淀差速离心2种方法提取线粒体DNA。     

辣椒叶片DNA提取方法的优化

对提取植物DNA的CTAB法进行了改进.使用Retsch研磨仪极大地提高了效率,并在CTAB提取液中添加0.2%的二硫苏糖醇可以有效防止酚类物质的氧化及与DNA的不可逆结合.紫外吸收检测DNA A260/A280=1.7～1.8;经琼脂糖凝胶电泳检测得到一条带型较宽且清晰的DNA谱带,辣椒叶片DNA平均产量为29.8μg/100 mg,证明所提取DNA的质量和得率均较高;酶切结果表明DNA质量较高,能够酶切完全;PCR扩增到的特异性条带明亮、整齐,基本无拖尾,达到各种分子标记等研究技术的要求.     

一种高质量葡萄基因组DNA提取方法

针对葡萄组织中多酚、多糖类物质含量较高的特点,对比研究了利用植物总DNA提取试剂盒和改良CTAB法提取葡萄总DNA.结果表明:改良的CTAB法能够从不同葡萄品种和不同生长时期的叶片中获得高质量、完整性好的总DNA,其OD260/OD260介于1.7～1.9之间,无降解现象,RNA去除干净,完全适于进行PCR和酶切等研究.     

一种高质量枇杷基因组DNA提取方法

针对枇杷叶片富含多糖、多酚及其它次生代谢物质的特点,采用改良CTAB法,通过对抽提液、沉淀液和解离缓冲液进行逐步筛选,对其基因组总DNA进行提取,并对DNA进行电泳检测、含量测定和ISSR分析。结果表明:该方法从‘大五星’枇杷幼叶、成熟叶片、花药、组培苗,与幼果中的胚珠,以及栎叶枇杷的幼叶与成熟叶片7种材料提取的基因组总DNA纯度和完整性都较好,OD260/OD280值均在1.8~2.0之间,无降解现象,RNA去除干净,能被限制性内切酶完全消化;其ISSR分析条带清晰,多态性好,表明此方法提取的枇杷基因组总DNA质量较高。     

一种提取食用菌DNA的有效方法

本文介绍一种提取食用菌DNA的有效方法。我们以常规方法为基础,根据食用菌的生物学特点,进行对比实验,总结出本方法。该方法简便、适用,提得的DNA纯度高,降解小,可直接用于转化实验。     

辣椒叶片基因组DNA提取方法的研究

本项研究采用SDS法、CTAB1法、CTAB2法及CTAB3法对辣椒叶片基因组DNA进行提取,通过琼脂糖凝胶电泳法与紫外吸收检测法对DNA的纯度进行检测。试验证明几种提取方法均能提取出辣椒叶片的基因组DNA,其中CTAB3法提取的DNA经琼脂糖凝胶电泳检测得到一条迁移率很低的整齐清晰的DNA条带,所提取DNA的质量和纯...     

一种改良质粒DNA提取方法在实验课中的应用

改良碱裂解质粒DNA提取方法,将溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、无水乙醇的反应时间分别缩短为0、0、10、0 min;用针式滤器除去残余蛋白质,替代了传统的酚/氯仿抽提方式,缩短DNA提取时间,使其在1 h内完成,并减少有毒物质对人体造成的伤害。获得的质粒DNA质量好、产率高,能满足常规分子生物学实验的要求。     

适于AFLP分析用的桃成熟叶片DNA提取方法

以多个野生桃秋季成熟叶片为材料,采用改进CTAB法对其基因组总DNA的提取进行了研究,并与其相应幼叶DNA的提取效果进行了比较分析。结果表明,从野生桃成熟叶片提取的DNA除产量低于幼叶外,DNA的纯度和完整性都较好,D260nm/D280nm的比值均为1.8～2.0,无降解现象,RNA去除干净,能被限制性内切酶完全消化;其AFLP分析(引物EcoRI-TA/MseI-CTT)条带清晰,多态性好,说明此方法提取的野生桃成熟叶片基因组总DNA完全适于AFLP分析。     

不同方法对枣叶片总DNA提取效果的影响

以串杆枣的成熟鲜叶为试材,分别采用-20℃、-70℃和硅胶脱水干燥3种方法保存样品,采用简易CTAB法、高盐沉淀法与高盐低pH值法分别对3种方法保存的样品及对照样(鲜叶)进行了基因组DNA提取效果的比较分析。结果表明,3种方法均能有效地从枣叶片中获得质量较高的DNA,以高盐沉淀法所得的DNA纯度最高,高盐低pH值法次之。就DNA的产量而言,高盐沉淀法的DNA产量相对较低,低于其他的2种方法,但未达到显著水平。硅胶干燥法和-70℃超低温保存的样品与鲜叶相比,所提DNA的质量和产量均无明显差异,均能满足PCR扩增要求。硅胶保存法适于野外远距离采样。     

西瓜不同类型样品的DNA提取研究

为比较不同类型西瓜样品DNA提取效果,以西瓜种子、子叶、下胚轴、种芽、新鲜真叶、干燥真叶为研究材料,采用改进的DNA试剂盒法进行了DNA提取研究,结果表明,从新鲜真叶和干燥真叶提取的DNA质量浓度最高,分别为1 130.2、1 039.7 ng·μL~(-1),子叶、下胚轴、种芽提取的DNA质量浓度为中等,分别为434.3、406.3、429.0 ng·μL~(-1),种子提取的DNA质量浓度最低,为55.1 ng·μL~(-1)。d CAPS扩增和酶切表明,全部类型样品提取的DNA均可扩增出稳定的条带,并能被内切酶顺利酶切,说明从西瓜不同类型样品中提取的DNA均可以满足d CAPS分子标记研究的需求。     

甜樱桃DNA的快速提取法

介绍了一种从甜樱桃叶片中快速提取DNA的方法,既节省时间,又可获得高质量的DNA,可满足微卫星DNA分析的需要。     

快速粗提取致病疫霉菌菌丝DNA的方法

为满足规模分析病菌群体、认识病菌的群体遗传变异特征,以致病疫霉菌(Phytoph-thorainfestans)为材料,建立快速、简便的用于PCR扩增的病菌基因组DNA。分别大量和微量提取基因组DNA,比较2种方法所提取的DNA用于SSR标记的PCR扩增效果。结果表明:以微量粗提法所得的病菌基因组DNA质量足以用于PCR扩增,与大量提取所得的DNA的PCR扩增非常一致,并且粗提的DNA与大提的DNA一样都可以在-20℃条件下保存。基于PCR扩增的遗传标记广泛用于病菌群体的分析,该研究建立的基于玻璃珠振荡法提取疫霉菌菌丝基因组DNA的微量提取方法需材少、简便且快速有效,为规模分析疫霉菌群体奠定了基础。     

锥栗叶片两种提取蛋白方法的比较

比较三氯乙酸/丙酮沉淀法、酚柚提法两种方法对锥栗叶片总蛋白的提取效果。结果表明:酚抽提法获得的蛋白质产率高、纯度高;且其提取蛋白质所得电泳图谱背景浅、拖尾轻、蛋白点分散且性状规则,适合锥栗叶片蛋白质的提取。试验为锥栗胚胎发育期蛋白质组学研究提供参考,也对其他干扰物质含量高的植物组织蛋白提取有一定的参考价值。     

天竺葵基因组DNA五种提取方法的比较

以天竺葵为试材,比较分析了CTAB法、简单法、高盐低pH值法、CTAB-SDS法、SDS法对天竺葵叶基因组DNA提取的效果。结果表明：5种方法提取的天竺葵总DNA在纯度上有很大的差别。所得到的DNA提取纯度依次为简单法、CTAB-SDS法、CTAB法、高盐低pH法、SDS法。酶切结果为简单法、CTAB法效果最好,其次SDS法,高盐低pH法、CTAB-SDS法不能被EcoRI酶完全消化。经综合的比较分析,认为简单法是最佳的提取方法。因其步骤简单、快捷,得到的基因组DNA降解少、杂质含量少,能获得高质量的DNA模板,可以用于分子生物学试验研究。     

扩展青霉基因组DNA五种提取方法比较

为寻找一种适合于扩展青霉基因组DNA的提取方法,比较了固体培养、液体静置培养和液体振荡培养3种培养方式的提取效果,分别采用氯化苄法、蜗牛酶法、CTAB法、SDS法及异硫氰酸胍法提取扩展青霉菌基因组DNA,经DNA质量浓度测定及电泳分析,比较5种方法的差异,并利用扩展青霉的多聚半乳糖醛酸酶(Polygalacturonase)基因内一段保守序列,设计PCR引物,扩增大小为288 bp的特异目的基因,检测其灵敏性.结果表明:固体培养的方式较适合扩展青霉基因组DNA的提取,另外5种提取方法均能提取出扩展青霉菌基因组DNA,扩增出目的条带,其中氯化苄法和蜗牛酶法所提DNA的纯度均较好,但蜗牛酶法所提DNA量较少.因此,氯化苄法是5种提取方法中最可靠的DNA提取方法,所提DNA浓度高、纯度好、结果稳定,可作为PCR反应的模板进行特异性扩增,且该方法的最低检测限大约为1.01×10-1μg/mL.