白藜芦醇对山羊冷冻精液质量的影响

本实验旨在研究白藜芦醇对山羊冻精质量的改善效果。用假阴道法采集8只云上黑山羊精液,用添加不同浓度(0、0.1、1、10、20μmol/L)白藜芦醇的Optidyl稀释液稀释后进行细管分装,其中不添加白藜芦醇组为对照组。在5℃平衡4 h后,将细管于液氮蒸气中预冻,最后在液氮中保存1周。37℃水浴解冻后测定精子活力、顶体完整性、膜完整性和磷脂酰丝氨酸分布等指标。结果表明:与对照组相比,10μmol/L白藜芦醇冷冻组精子直线运动百分率和质膜完整性均提高(P<0.05);10μmol/L白藜芦醇抑制了冷冻解冻后精子ROS的产生(P<0.05);而20μmol/L白藜芦醇冷冻组精子解冻后直线运动百分率低于其他各处理组(P<0.05);白藜芦醇不能缓解冷冻解冻过程对精子总活力、顶体完整性和磷脂酰丝氨酸分布的不利影响。总之,冷冻稀释液中添加10μmol/L白藜芦醇可以改善山羊冻精质量,这可能与白藜芦醇的抗氧化特性有关;但过高浓度的白藜芦醇加重精子的冷冻损伤程度。白藜芦醇是否能提高山羊冻精的人工授精效果还有待进一步研究。     

白藜芦醇对山羊精液常温保存效果的影响

为研究白藜芦醇对山羊精液常温保存效果的影响，实验通过假阴道法采集健康黑头山羊精液，在基础稀释液中分别添加0、25、50、100、200μmol/L白藜芦醇溶液，常温保存过程中检测精子活力、质膜完整率、顶体完整率、活性氧(ROS)含量、丙二醛(MDA)含量及总抗氧化能力(T-AOC)水平。结果表明：与0μmol/L组相比，在基础稀释液中添加白藜芦醇能提高黑头山羊常温保存精子的活力、质膜完整率和顶体完整率(P<0.05)，并提升精液T-AOC水平，降低ROS及MDA含量(P<0.05)；其中黑头山羊精液常温保存时白藜芦醇的适宜添加浓度为25μmol/L。本研究证实了在精液稀释液中添加白藜芦醇可改善黑头山羊常温保存的精液品质，保存3 d对母羊受胎率无显著影响。     

复合添加剂对解冻后奶牛性控冻精质量及受胎率的影响

【目的】试验旨在研究以褪黑素和地诺前列腺素组成的复合添加剂对奶牛性控冻精解冻后精子质量及奶牛人工授精后受胎率的影响。【方法】30份奶牛性控冻精样均分为2组：试验组和对照组,试验组添加由24 ng/mL褪黑素、1.5 mg/mL地诺前列腺素及精液稀释液组成的250μL复合添加剂,对照组添加250μL精液稀释液,试验组和对照组均与解冻后的奶牛性控冻精按照1∶1(V/V)进行混合,室温孵育0、2及4 h,通过免疫荧光染色分析精子活率、顶体完整率、高能线粒体活性精子比率;对216头青年奶牛和82头头胎奶牛输精后通过28 d早孕检测来确定受胎率情况。【结果】与对照组相比,经复合添加剂处理0 h的性控冻精活率、顶体完整率及高能线粒体活性精子比率均无显著变化(P>0.05);经复合添加剂处理2 h的性控冻精活率、顶体完整率、高能线粒体活性精子比率均显著升高(P<0.05);经复合添加剂处理4 h的性控冻精活率和顶体完整率均无显著变化(P>0.05),高能线粒体活性精子比率显著升高(P<0.05)。在输精试验中,试验组青年奶牛和头胎奶牛中的受胎率分别为65.22%和48.21%...     

奶牛性控冷冻精液品质和转染外源DNA的特点

本研究分析了奶牛性控冻精与普通冻精解冻后精液品质和转染外源DNA的特点。奶牛性控冻精与普通冻精解冻后,分别检测精液品质和精子超微结构,并与地高辛标记的线性化pEGFP-N1质粒共育转染,用免疫组化的方法检测精子转染外源DNA的效率。结果表明:性控冻精与普通冻精相比,有效精子数少(P0.01),精子活力、顶体完整率差(P0.05);2组精子超微结构都出现一定程度的顶体破裂、脱落等形态变化;2组精子都具有自动结合和转运外源DNA的能力,性控冻精转染率极显著高于普通冻精(P0.01),分别为(11.34%±2.41%)和(7.30%±2.14%)。     

利用性控精液体外生产奶牛早期胚胎

实验进行了精子处理方法、洗精液中添加抗生素种类及浓度、常规培养小滴(50μL)中入胚数的筛选,按照不同荷斯坦公牛个体分选的性控精液对体外生产的牛早期胚胎发育潜力的影响。结果表明:离心法处理性控精液效果最优。利用经过分选的性控精液进行体外受精(IVF)后都较易导致污染,且受精后的体外胚胎发育效果都较差。在洗精液中添加10μL/mL头孢哌酮钠的IVF胚胎体外发育较好,囊胚率达到16.9%;且在常规培养小滴中适当减少入胚数,能有效抑制利用性控精液制备的奶牛IVF胚胎自身对培养微滴的污染。利用直接离心法处理精液,在洗精液中添加头孢哌酮钠10μL/mL,可以成功进行牛性控精子的体外受精,但目前的受精效果低于用普通精子的体外受精效果。     

白藜芦醇对山羊冷冻精子质膜、DNA完整性和温度耐受性的影响

试验旨在研究白藜芦醇对山羊冷冻精子质膜、DNA完整性和温度耐受性的影响。采用假阴道法采集8只云上黑山羊精液,用含不同浓度(0、0.1、1、10和20μmol//L)白藜芦醇的Optidyl稀释液稀释后进行细管分装,对照组不添加白藜芦醇。在5℃平衡4 h后,将细管于液氮蒸气中预冻10 min,最后在液氮中保存30 d。37℃水浴解冻后,采用低渗耐受性试验检测质膜完整性和温度耐受性,精子染色质扩散法检测DNA碎片率等指标。结果显示,10μmol/L白藜芦醇冷冻组精子弯尾率显著高于其他各处理组(P0.05),而其他各冷冻组之间无显著性差异(P0.05);10μmol/L白藜芦醇冷冻组精子DNA碎片率极显著高于鲜精组(P0.01),极显著低于未添加白藜芦醇冷冻组(P0.01)。温度耐受性试验结果表明,不同浓度白藜芦醇冷冻组精子37℃水浴1 h后的精子弯尾率以10μmol/L冷冻组最高,与其他各冷冻组间差异极显著(P0.01);精子弯尾率随着孵育时间的延长而呈逐步下降的趋势,当孵育4 h时,10μmol/L白藜芦醇冷冻组精子弯尾率与对照组无显著差异(P0.05)。透射电镜结果表明,10μmol/L白藜芦醇组精子质膜完整率显著高于不添加白藜芦醇对照组(P0.05)。上述结果表明,在冷冻稀释液中添加白藜芦醇可显著改善山羊冻精质膜状态、DNA完整率和温度耐受性,其最佳作用浓度为10μmol/L,但白藜芦醇是否能改善山羊冻精的人工授精效果还有待进一步研究。     

抗氧化物质对提高家畜冻精受精能力的研究进展

超低温冻存技术将低温生物学与生殖生物学紧密结合在一起,并在生命科学领域得到了广泛应用。在生殖生物学领域,配子与胚胎的超低温冻存有着广阔的研究前景。目前,常用于家畜繁殖育种的冷冻精液包括常规冻精液和性控冻精,精液经冷冻解冻,尤其是性控冻精在制备时经稀释、染料、激光、分离加压、冷冻以及受精时精液解冻等过程,均会产生大量活性氧(ROS)。ROS破坏精子内部抗氧化防御体系平衡,精子发生氧化应激损伤,造成精子质膜脂质过氧化(LPO)、DNA损伤、凋亡等,影响精子受精能力及受精卵的发育。内源性抗氧化剂不足,补充外源性抗氧化剂成为必然选择。近年来,抗氧化物质在家畜常规冻精中的研究日益增多,但在性控精液中研究很少。本文综述了番茄红素、抗坏血酸、白藜芦醇、褪黑素这几类抗氧化物质对降低家畜常规冻精及性控冻精氧化应激损伤作用机理的研究进展,以期筛选出高效的抗氧化剂以提高冻精质量。     

辅酶Q_(10)对湖羊精液常温保存效果的影响

本实验旨在探究辅酶Q_(10)对湖羊精液常温保存效果的影响。选取3只1～2岁的健康湖羊采集精液,在基础稀释液中添加0、5、50、250、500μmol/L的辅酶Q_(10),检测在20℃保存过程中的湖羊精子活力、活率、曲线速度、质膜完整率、顶体完整率和活性氧(ROS)含量等指标。结果表明:随着在常温保存稀释液中添加辅酶Q_(10)浓度的提升,其对精子的保护作用呈先上升后下降的趋势,当辅酶Q_(10)浓度为50μmol/L时,精子活力、质膜和顶体完整率显著提高,ROS含量显著降低。本实验条件下,在湖羊精液常温保存稀释液中添加50μmol/L辅酶Q_(10)能够提高湖羊精液常温保存效果。     

添加咖啡因、亚牛磺酸对牛精子功能的影响

为研究获能液中添加咖啡因和亚牛磺酸对牛精子功能的影响,本研究将荷斯坦牛冻精解冻后分别添加在含不同浓度咖啡因(0、2.5、5.0、7.5mmol/L)或亚牛磺酸(0、5、10、20、40μmol/L)的获能处理液中,且每个处理组加入约200μL的精液,在CO_2培养箱里经上游处理45min,以评估咖啡因和亚牛磺酸对牛精子活力、顶体及质膜完整性的影响,进而探讨在获能液中亚牛磺酸替代咖啡因的效果。结果显示,添加2.5、5.0mmol/L咖啡因组经上游法获能处理后的牛精子活力和顶体完整率均显著高于对照组(P0.05),且2.5mmol/L咖啡因组精子活力最高;添加10、20μmol/L亚牛磺酸组经上游法获能处理后的牛精子活力、顶体完整率和质膜完整率均显著高于对照组(P0.05),且20μmol/L亚牛磺酸组的精子功能参数值最高;将筛选的最佳浓度2.5 mmol/L咖啡因和20μmol/L亚牛磺酸采用同样的方法处理,发现20μmol/L亚牛磺酸组的精子顶体完整率和质膜完整率均显著高于2.5mmol/L咖啡因组和对照组(P0.05)。因此,20μmol/L亚牛磺酸可以替代2.5mmol/L咖啡因用于体外受精体系中的精子获能处理,有助于提高精子功能参数。     

含海藻糖稀释剂增补EDTA对猪精子冷冻能力的影响

探讨了猪精子冷冻保存液中添加不同浓度的海藻糖(trehalose)和EDTA(0.05mol/L trehalose、0.05mol/L trehalose 2.0mmol/LEDTA、0.05mol/L trehalose 5.0mmol/L EDTA、0.1mol/L trehalose、0.1mol/L tre-halose 2.0mmol/LEDTA、0.1mol/L trehalose 5.0mmol/LEDTA)对猪精子冷冻效果的影响。结果表明,精子冷冻解冻后,0.1mol/Ltrehalose 2mmol/LEDTA混合处理组精子活力显著高于0.1mol/Ltrehalose处理组(P<0.05),0.1mol/Ltrehalose和5.0mmol/LEDTA混合处理组的精子生存率最高。0.1mol/Ltrehalose和2~5mmol/LEDTA混合处理组精子顶体完整率显著高于trehalose处理组(P<0.05),0.05~0.1mol/Ltrehalose和5.0mmol/LEDTA混合处理组低渗膨胀精子率显著高于trehalose处理组(P<0.05)。trehalose和EDTA混合处理组精子内活性氧(ROS)含量总体上高于trehalose处理组(P<0.05)。这些结果显示稀释剂中trehalose和EDTA增补能改善精液特性,但不能抑制精子内ROS的发生。     

The Effects of Resveratrol on the Quality of Frozen Sheep Semen

The effects of resveratrol on the quality of frozen-thawed sheep semen were studied in this study.Semen was collected from six Yunnan semi-fine wool sheep using artificial vagina.The semen was diluted with the Optidyl extender supplemented with resveratrol with a concentration of 0,0.1,1,10,or 20 μmol/L,followed by loading into plastic straws and equilibration at a low temperature.Then,the straws were pre-frozen in liquid nitrogen vapor,followed by storage in liquid nitrogen for 30 days.After thawing for 30 seconds in a 37 ℃ water bath,the parameters including sperm motility,acrosome integrity,membrane integrity,distribution of phosphatidylserine (PS) and ROS were measured.The results showed that the post-thaw sperm total motility,progressive motility and the rate of sperm with curved tail were 76.14%±0.97%,43.56%±0.91% and 43.24%±1.68% in the 10 μmol/L resveratrol group,respectively,which were significantly higher than those in the other groups (P<0.05).However,when the concentration of resveratrol in the freezing extender was 20 μmol/L,the post-thaw total motility,progressive motility and the rate of sperm with curved tail were 21.78%±0.79%,25.23%±1.34% and 4.84%±0.68%,respectively,which were significantly lower than those in the other groups (P<0.05).The acrosome integrity of sperm frozen in the 10 μmol/L resveratrol group was best,which was 50.47%±0.91% and significantly higher than the other treatments (P<0.05).The results of PS distribution showed that the percentage of viable sperm in the 10 μmol/L resveratrol group was 46.43%±2.95%,and significantly higher than that in the 20 μmol/L group (31.14%±3.56%,P<0.05),but there was no significant difference with the other groups (P>0.05).In addition,the PS labeling rate of sperm in the 20 μmol/L resveratrol group (39.82%±3.38%) was significantly higher than those of the other groups (P<0.05).In terms of ROS production,this study demonstrated that the rate of viable sperm (ROS and PI were negative) in the 10 μmol/L resveratrol group (63.57%±0.71%) was significantly higher than that of the other groups (P<0.05),while the rate of viable sperm (32.45%±1.42%) in the 20 μmol/L resveratrol group was significantly lower than those of the other groups (P<0.05).In conclusion,the post-thaw quality of sheep semen could be improved after the addition of resveratrol to the freezing extenders,which might be related to the antioxidant properties of resveratrol.But,the cryoprotective effects of resveratrol dependents on its used doses,and the optimal concentration was 10 μmol/L based on this present study.However,excessively high concentration of resveratrol could aggravate cryodamage on sperm.In addition,the protective effects of resveratrol on sheep sperm still needs to be verified by in vitro fertilization and artificial insemination.     

白藜芦醇对绵羊冷冻精液质量的影响

试验旨在研究白藜芦醇对绵羊冷冻精液质量的改善效果。采用假阴道法采集6只云南半细毛羊精液，用含不同浓度（0、0.1、1、10、20 μmol/L）白藜芦醇的Optidyl稀释液稀释后进行细管分装，低温平衡和液氮气相预冻后，在液氮中保存30 d。解冻后测定精子活力、质膜完整性、磷脂酰丝氨酸（PS）分布、顶体完整性和活性氧等指标。结果表明，解冻后10 μmol/L白藜芦醇组精子总活力、直线运动百分率、精子弯尾率分别为76.14%±0.97%、43.56%±0.91%、43.24%±1.68%，均显著高于其他各组（P<0.05）；而20 μmol/L白藜芦醇组精子总活力、直线运动百分率、精子弯尾率分别为21.78%±0.79%、25.23%±1.34%、4.84%±0.68%，均显著低于其他各组（P<0.05）。10 μmol/L白藜芦醇组精子顶体完整性最高，为50.47%±0.91%，显著高于其他各处理组（P<0.05）。PS分布结果表明，10 μmol/L白藜芦醇组正常精子百分率为46.43%±2.95%，显著高于20 μmol/L组（31.14%±3.56%，P<0.05），与其他各组无显著性差异（P>0.05）。20 μmol/L白藜芦醇组PS标记率（39.82%±3.38%）显著高于其他处理组（P<0.05）。活性氧试验结果表明，10 μmol/L白藜芦醇组正常精子（63.57%±0.71%）显著高于其他各组（P<0.05）；而20 μmol/L白藜芦醇组正常精子（32.45%±1.42%）显著低于其他各组（P<0.05）。综上，在冷冻稀释液中添加白藜芦醇可以改善绵羊冷冻精液品质，这与白藜芦醇的抗氧化特性有关。但是，白藜芦醇的冷冻保护效果具有明显的浓度依赖性，其最佳作用浓度为10 μmol/L，过高浓度的白藜芦醇反而加重精子的冷冻损伤。此外，对于白藜芦醇对绵羊精子的抗冻保护效果仍然需要体外受精或人工授精验证。     

稀释液中添加海藻糖对猪冷冻精液质量参数和活性氧的影响

本试验旨在探讨海藻糖对猪精子冷冻效果以及精子内活性氧(ROS)的含量影响。试验分对照组和4个海藻糖处理组(0.025,0.05,0.1和0.2 mol/L)。精子冷却后,添加0.1 mol/L海藻糖处理组精子活力显著(P<0.05)高于对照组,而精子内和稀释液中各组间ROS发生量都没有显著的差异。精子冷冻解冻后,添加0.05 mol/L海藻糖处理组的精子活力显著(P<0.05)高于对照组;添加0.05 mol/L和0.1 mol/L海藻糖处理组的精子生存率显著(P<0.05)高于对照组;添加0.1 mol/L海藻糖处理组顶体完整的精子百分比显著(P<0.05)高于对照组;4个海藻糖处理组膨胀精子百分比都显著(P<0.05)高于对照组;添加0.025 mol/L海藻糖处理组ROS水平显著(P<0.05)低于对照组。结果表明:海藻糖对精子冷冻保存是有益的,且能抑制精子内ROS的发生,但它的作用机制有待于进一步的研究。     

对香豆酸影响猪常温保存精液品质的研究

本试验旨在探讨于猪精液基础稀释液（BTS）中添加不同浓度的对香豆酸（P-coumaric acid,PCA）对猪精液质量及抗氧化酶活性的影响。在猪常温稀释制剂中添加浓度为0、0.03、0.06、0.09、0.12、0.15 g/L的PCA,利用CASA全自动精子分析仪与荧光探针技术分别在1~5 d内检测精子运动学参数与精子功能完整性;利用抗氧化试剂盒在1、3和5 d检测精子活性氧（reactive oxygen species,ROS）和丙二醛（malondialdehyde,MDA）水平以及超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性。试验结果表明,在精液保存的第5天,0.09 g/L的PCA处理组与空白组相比,精子活力显著提高（P<0.05）,精子的顶体功能完整性、质膜功能完整性、线粒体功能完整性也显著升高（P<0.05）,不仅如此,0.03、0.06、0.09和0.12 g/L PCA处理可显著降低精子ROS与MDA水平,提高SOD活性（P<0.05）,其中0.09 g/L处理组相比其他组抗氧化活性效果最佳,而当添加浓度为0.15 g/L时,精子的抗氧化活性与0.09 g/L组相比显著降低（P<0.05）。综上,猪常温基础稀释液中添加PCA可改善精子常温保存品质,添加0.09 g/L效果最佳。     

ω-3多不饱和脂肪酸对公猪精液质量的影响及其机制

在规模化养猪生产中,公猪的精液品质直接影响母猪的繁殖性能,这对猪场的生产成绩非常重要.多不饱和脂肪酸(PUFA)对精子质膜的流动性和脂质过氧化反应的敏感性有重要作用,同时也影响精子的授精能力.研究表明,在公猪饲粮中添加ω-3 PUFA能提高公猪精液品质,但效果重复性还不稳定;公猪饲粮中添加ω-3 PUFA能增加猪精子中ω-3 PUFA的含量和延长精液的保存时间.本文主要综述公猪饲粮中添加ω-3 PUFA对公猪精液品质的影响及其主要的作用机制,为其在现代规模化养猪生产中有效提高精液品质、猪场生产成绩和经济效益提供参考.     

白藜芦醇对甲基乙二醛损伤BRL-3A细胞的抑制作用

为研究甲基乙二醛(MGO)对大鼠肝细胞BRL-3A细胞的损伤机制,在MGO存在的情况下,以50μmol/L白藜芦醇处理BRL-3A,分别用MTT法检测细胞活力;DNPH法检测细胞内Schiff base浓度;DCFH-DA荧光探针法检测ROS水平;以及脂质过氧化产物MDA含量的检测。结果表明,MGO导致细胞内Schiff base、ROS和MDA显著增加,诱导细胞发生氧化应激,白藜芦醇处理可有效改善MGO对细胞的损伤作用。     

Protective effect of vitamin C and lycopene on the in vitro fertilization capacity of sex-sorted bull sperm by inhibiting the oxidative stress

The fertilization capacity of sex-sorted sperms is seriously decreased, which inhibits its wide application. However, little information is still available about the effect of vitamin C (VC) and lycopene (Lyc) on the fertilization capacity of sex-sorted bull sperm. In this study, the washing medium and fertilization medium of sex-sorted sperm from three bull individuals were supplemented with different concentrations of VC (0, 1 × 10^–3, 1 × 10^–4, 1 × 10^–5, 1 × 10^–6 M) or Lyc (0, 1 × 10^–4, 1 × 10^–5, 1 × 10^–6, 1 × 10^–7). After washing twice and incubation for 1.5 hr, the malondialdehyde (MDA) level, phosphatidylserine (PS) translocation, membrane potential (Δψm) and IVF (in vitro fertilization) ability of sex-sorted sperm were investigated. For the sex-sorted sperm of bulls A, B and C, 1 × 10^–3 M VC or 1 × 10^–4 M Lyc treatment significantly decreased their MDA levels and PS translocation and increased their Δψm levels and cleavage rates after IVF. When blastocysts were concerned, 1 × 10^–4 M Lyc significantly improved the blastocyst rates and their IFN-tau expression of bulls A and C. In conclusion, supplementation of 1 × 10^–3 M VC or 1 × 10^–4 M Lyc in washing and fertilization medium contributed greatly to improving the fertilization capacity of sex-sorted bull sperm during IVF procedure.     

猪精子顶体素水平与精液质量参数和体外受精间的联系

本研究目的是评估不同处理对精子顶体素活性的影响以及顶体素活性、精液参数和体外受精间的联系.鲜精、稀释精液(1:1)和液相精液(17℃)的精子顶体素活性分别是5.27,4.28和4.41 mIU/106.冻精或液相精液保存4 d后顶体素活性显著下降(P＜0.05).公猪间液相精液顶体素活性和低渗膨胀精液百分数有显著的差异(P＜0.05).冷、热应激对精子顶体素活性没有影响.鲜精和冻精的顶体素活性与低渗膨胀精子百分数和顶体完整率呈正相关.不同种猪液相精液精子顶体素活性与体外受精率和随后的囊胚发育率相关性不大.因此建议顶体素活性与其它精子功能参数相结合才能精确预测精子受精力.     

白藜芦醇对山羊冷冻精子质膜、DNA完整性和温度耐受性的影响

试验旨在研究白藜芦醇对山羊冷冻精子质膜、DNA完整性和温度耐受性的影响。采用假阴道法采集8只云上黑山羊精液,用含不同浓度（0、0.1、1、10和20 μmol//L）白藜芦醇的Optidyl稀释液稀释后进行细管分装,对照组不添加白藜芦醇。在5 ℃平衡4 h后,将细管于液氮蒸气中预冻10 min,最后在液氮中保存30 d。37 ℃水浴解冻后,采用低渗耐受性试验检测质膜完整性和温度耐受性,精子染色质扩散法检测DNA碎片率等指标。结果显示,10 μmol/L白藜芦醇冷冻组精子弯尾率显著高于其他各处理组（P<0.05）,而其他各冷冻组之间无显著性差异（P>0.05）;10 μmol/L白藜芦醇冷冻组精子DNA碎片率极显著高于鲜精组（P<0.01）,极显著低于未添加白藜芦醇冷冻组（P<0.01）。温度耐受性试验结果表明,不同浓度白藜芦醇冷冻组精子37 ℃水浴1 h后的精子弯尾率以10 μmol/L冷冻组最高,与其他各冷冻组间差异极显著（P<0.01）;精子弯尾率随着孵育时间的延长而呈逐步下降的趋势,当孵育4 h时,10 μmol/L白藜芦醇冷冻组精子弯尾率与对照组无显著差异（P>0.05）。透射电镜结果表明,10 μmol/L白藜芦醇组精子质膜完整率显著高于不添加白藜芦醇对照组（P<0.05）。上述结果表明,在冷冻稀释液中添加白藜芦醇可显著改善山羊冻精质膜状态、DNA完整率和温度耐受性,其最佳作用浓度为10 μmol/L,但白藜芦醇是否能改善山羊冻精的人工授精效果还有待进一步研究。