重组牛源荚膜A型多杀性巴氏杆菌脂蛋白E的免疫保护性研究

为鉴定多杀性巴氏杆菌脂蛋白E的免疫保护性,本研究从牛源荚膜A型多杀性巴氏杆菌PM-HLJ株的基因组DNA中扩增出大小为1 011 bp的脂蛋白E编码基因(PlpE),经序列测定显示,其氨基酸序列与A型多杀性巴氏杆菌参考株PlpE序列一致性为95.83%。将PM-HLJ的PlpE基因克隆于表达质粒pET-30a(+)并诱导表达,将表达的重组脂蛋白E纯化后经腹腔免疫小鼠,间接ELISA检测结果显示各免疫组均产生了针对重组脂蛋白E的IgG抗体,免疫保护试验显示,当小鼠免疫剂量为20μg、30μg、40μg和60μg时,保护率分别达到20%、40%、80%和100%。结果表明,牛源荚膜A型多杀性巴氏杆菌重组脂蛋白E具有良好的免疫保护作用。     

牛源荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌的分离鉴定

从采集于黑龙江、天津的病牛肺组织中分离到2株病原菌,经菌落形态学观察、培养特性、生化反应和小鼠毒力试验,初步鉴定为多杀性巴氏杆菌,分别命名为Pm-HLJ和Pm-TJ.参考多杀性巴氏杆菌种特异性基因kmt1和荚膜血清型特异性基因hyaD-hyaC、bcbD、dcbF、ecbJ和fcbD,合成引物,通过多重PCR扩增2株菌的种特异性基因和荚膜血清型特异性基因.选取Pm-HLJ的目标PCR产物进行克隆、序列测定、Blast搜索同源序列并且比较分析.结果显示,Pm-HLJ的kmt1基因片段全长460 bp,与GenBank中各血清型kmt1基因同源性均在96.6%以上;荚膜血清型A菌株特异性基因同源性为99.9%;而与其他荚膜血清型B、D、E、F的型特异性基因的同源性均低于50%.由此确认,分离的2株多杀性巴氏杆菌均为荚膜血清A型,这是我国A型多杀性巴氏杆菌引发牛出血性败血症的首例报道.     

三株鸭源荚膜A型多杀性巴氏杆菌的分离与鉴定

从疑似禽霍乱死亡鸭分离到3株细菌,经PCR法鉴定为荚膜A型多杀性巴氏杆菌,纸片法进行药物敏感试验,发现3株细菌同时敏感的药物有恩诺沙星、多黏菌素B、复方新诺明和头孢唑啉,3株细菌同时耐受的药物有链霉素、四环素、克林霉素和青霉素。本研究结果可为禽源多杀性巴氏杆菌的血清流行病学和禽霍乱的临床治疗提供参考。     

雁鸭源荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌的分离鉴定

为鉴定一株从雁鸭脏器内分离到的革兰氏阴性细菌,本研究对该菌进行分离培养、细菌16S rRNA序列比对、动物试验和药物敏感性试验。结果表明该分离菌与多杀性巴氏杆菌(P.mutocida)(AF224297)同源性达99.88%,毒力强,能够致死家兔、小鼠和鸡,对氧氟沙星等药物敏感。分离菌的荚膜抗原血清型特异性基因PCR产物与荚膜血清A型P.mutocida hyaD-hyaC基因同源性达99.9%,确定该菌株为荚膜血清A型P.mutocida。本研究首次从雁鸭体内分离到A型P.mutocida。     

犊牛热射病诱发荚膜A型多杀性巴氏杆菌感染的诊断

2019年7月,山东省某规模化肉牛场8 d内累积出现22头犊牛死亡,死亡犊牛多集中在3月龄以内.为查找死因,遂对发病牛场的生活环境进行调查,并对场内犊牛进行早、中、晚体温检测,对病死牛进行病理剖检、病理组织学检查和细菌分离鉴定,同时对分离到的细菌进行动物致病性试验.结果显示:牛舍密闭不通风,没有降温措施,舍内温度偏高、...     

4株荚膜A型多杀性巴氏杆菌的分离与鉴定

2011年7月,从高邮某养殖户两次送检病死麻鸭的肝脏、心脏中分离出4株细菌,对纯化的菌株进行形态学和培养特性的观察、生化反应、血清型PCR鉴定及16SrDNA基因序列分析,确定4株分离茵均为荚膜A型多杀性鸭巴氏杆菌,鸭群所患疾病为该致病菌引起的鸭霍乱。4株分离茵的药敏结果表明,其对氯霉素、强力霉素、萘啶酸等药物多重耐药,而对左氟沙星等药物敏感。     

牛荚膜A型多杀性巴氏杆菌强菌株rpoE蛋白的原核表达及其免疫保护效力研究

为研究牛荚膜A型多杀性巴氏杆菌(PM)强菌株rpoE蛋白的免疫保护性,本研究利用PCR方法扩增牛荚膜A型PM的rpoE基因,构建pET-28a-rpoE重组表达质粒,经诱导表达后SDS-PAGE检测结果显示,表达的rpoE蛋白相对分子量约为20 ku,与理论值一致;western blot结果显示该蛋白具有很好的特异性和反应原性;纯化的rpoE蛋白经皮下免疫BALB/c小鼠,间接ELISA检测融合蛋白的免疫原性,结果显示rpoE蛋白可以诱导小鼠产生较高水平的特异性抗体;PM攻毒后,免疫组保护率为70%。本研究获得的牛荚膜A型PM重组rpoE蛋白具有良好的免疫原性,免疫小鼠后能够提供一定的保护,可以作为研发PM亚单位疫苗的候选抗原。     

牛溶血性曼氏杆菌及牛荚膜A型多杀性巴氏杆菌灭活疫苗对小鼠的保护性研究

牛溶血性曼氏杆菌及牛荚膜A型多杀性巴氏杆菌是导致牛呼吸道疾病（bovine respiratory disease,BRD）的重要细菌性病原,每年给养牛业带来巨大的经济损失,目前对其疫苗研究仍显不足。本研究选用牛溶血性曼氏杆菌（Mannheimia haemolytica,Mh） Mh422株和牛荚膜A型多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida,Pm） PmCQ2株作为疫苗菌株,分别制备了2种菌体浓度的Mh和Pm单价灭活菌苗及3种菌量配比（1∶1、2∶1和3∶1）的Mh-Pm二联灭活苗,以小鼠为模型,皮下多点免疫（0.2 mL）,加强免疫2次,免疫剂量均为首免的一半。首免后第7天及其后每隔5 d,小鼠尾静脉采血分离血清,ELISA方法检测抗体效价,三免后第20天,分别以Mh422或PmCQ2进行腹腔攻毒测定免疫保护效果。结果显示,所有小鼠接种疫苗均无不良反应,二免后第10天抗体达较高水平,三免后抗体水平持续升高,第15天到达高峰,其后25 d维持高水平,后缓慢下降。Mh单菌苗的2种免疫剂量对Mh422株攻毒的免疫保护率均为0,而Pm单菌苗的2种免疫剂量对PmCQ2株攻毒的免疫保护率全为100%;Mh和Pm间无交叉免疫保护作用;3种菌量配比的Mh-Pm二联疫苗对Mh422株和PmCQ2株攻毒的各自免疫保护率分别为53%～71%和100%。该研究结果表明,所制备的Mh422单菌苗对同型攻毒无免疫保护作用,在诱导机体抗体产生方面,Mh和Pm间无相互抑制作用,PmCQ2株具有促进Mh422株灭活疫苗对Mh422的免疫保护作用,这为牛溶血性曼氏杆菌和牛多杀性巴氏杆菌二联疫苗的进一步研究提供了理论基础。     

产毒多杀性巴氏杆菌研究进展

产毒多杀性巴氏杆菌 (T Pm)是引起猪传染性萎缩性鼻炎的主要病原菌。对 T Pm的检出及高效疫苗的研制是根除猪传染性萎缩性鼻炎的关键。产毒多杀性巴氏杆菌毒素是一种皮肤坏死毒素 ,也是一种活性很强的有丝分裂原 ,单独就可引起细胞 DNA的合成及分裂。基于此毒素的特性 ,已经建立了诸如豚鼠皮肤坏死实验、小鼠致死实验、细胞促生长实验、胎牛肺细胞毒性实验、EL ISA及 PCR等方法来检测产毒多杀性巴氏杆菌。随着人们对产毒多杀性巴氏杆菌毒素活性的研究 ,猪传染性萎缩性鼻炎的疫苗也逐渐向更安全、有效的毒素疫苗发展。文章主要对 T Pm的检测方法、毒素生物学活性及疫苗的发展进行了概述     

兔源荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌的分离与鉴定

对山东滨州某兔场送检的病死兔,进行病原菌的分离,对分离细菌进行形态学观察、生化试验、PCR鉴定、药敏试验和动物致病性试验。染色镜检、生化试验结果及PCR试验证实成功分离到一株荚膜血清A型巴氏杆菌,药敏试验结果证实,该菌株具有多重耐药性,致病性试验中,该菌株对昆明系小鼠、断奶仔兔均具有一定的致病性,该菌的分离鉴定为自家灭活菌苗的制备提供了候选菌株。     

多杀性巴氏杆菌荚膜抗原的血清学鉴定

不少地区反映,目前使用的猪肺疫菌苗效力不稳定,注射菌苗后仍有此病发生。禽霍乱病亦有类似情况。这可能与制苗用的菌种不完全符合各地流行的血清型有关。为了摸清我省流行的多杀性巴氏杆菌的血清型,为预防本病提供科学依据,我们从1980～1983年对先后由15个地(州)市分离的416株多杀性巴氏杆菌进行了荚膜血清学鉴定。现将结果报告如下。     

多杀性巴氏杆菌荚膜抗原的血清学鉴定

不少地区反映,目前使用的猪肺疫菌苗效力不稳定,注射菌苗后仍有此病发生。禽霍乱病亦有类似情况,这可能与制苗用的菌种不完全符合各地流行的血清型有关。为了摸清我省流行的多杀性巴氏杆菌的血清型,为预防本病提供科学依据,我们从1980～1983年对先后由15个地(州)市分离的416株多杀性巴氏杆菌进行了荚膜血清     

多杀性巴氏杆菌免疫逃避机制

多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)引起多种畜禽巴氏杆菌病,严重影响养殖业发展。该菌为了能在宿主体内建立感染,已具备了多样化的和复杂的策略来逃避宿主的免疫应答。已发现的多杀性巴氏杆菌的免疫逃避机制包括干扰或逃避宿主的吞噬作用,抵抗中性粒细胞、抗菌肽、补体介导的杀伤作用,降解免疫球蛋白或封闭抗体活性,形成生物膜等,除此之外,多杀性巴氏杆菌毒素(PMT)还参与多种免疫逃避活动。本文就针对多杀性巴氏杆菌的免疫逃避机制做一综述。     

广安县猪多杀性巴氏杆菌荚膜抗原型别的研究

最近几年我县猪肺疫病逐年上升,死于此病的猪也日趋增多,对农业、畜牧业带来一定的损失。为了弄清发病原因,我们从1981年10月到1983年3月,自我县68个公社发病死亡猪的257份病料分离出72株巴氏杆菌,其中除重复病料外,按每个公社一株计算有57株。我们对这57株巴氏杆菌进行了Carter荚膜抗原定型,均属于Carter荚膜B型,现将试验情况分述于后。     

牛源荚膜A型多杀性巴氏杆菌疫苗候选株的筛选及鉴定

为了筛选生长快、毒力强、免疫原性好、副反应小的牛源荚膜A型多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida,Pm）灭活疫苗菌株,本试验选取6株来自不同地区致犊牛肺炎死亡的牛源荚膜A型多杀性巴氏杆菌分离株,测定了培养基生长曲线、小鼠毒力、菌体脂多糖（LPS）含量及各菌株灭活菌苗免疫小鼠和家兔后的抗体效价,并进行了攻毒保护试验。结果显示,分离株Pm2、Pm3、Pm5生长速度较快、毒力较强、LPS含量较多,均含有与毒力和免疫相关的ptfA和fimA基因;免疫小鼠及家兔未发现明显不良反应,在二免后14 d血清抗体达1：64~1：128,强毒攻毒后全部存活,而PBS对照组全部死亡。本试验结果表明,Pm2、Pm3、Pm5均可作为多杀性巴氏杆菌灭活菌苗的候选菌株,其中Pm3作为首选株。     

荚膜A型多杀性巴氏杆菌引起牛纤维素性化脓性肺炎:病原引起疾病因果关系的确定

2006年底本研究室在牛群中发现了病因不明的牛纤维素性化脓性肺炎疫情,该疫情已蔓延至中国的多个养牛地区,本研究室从发病牛肺脏中分离得到荚膜A型多杀性巴氏杆菌。为确定该菌与牛纤维素性化脓性肺炎的病原-疾病因果关系,本研究从病原流行病学调查、病原对实验动物的致病性与免疫保护性以及病原回归本动物致病特征3个方面,对其进行验证性研究。调查结果显示,在2008年~2014年采集的88份发病牛肺脏样品中,荚膜A型多杀性巴氏杆菌的PCR阳性率高达86.36%,而且PCR阳性样品中该菌的分离率高达90.79%。将现地分离株接种小鼠进行动物实验,结果显示,该菌具有高度致死性,而且灭活菌体接种小鼠对活菌攻击呈现良好的免疫保护性。动物回归试验结果显示,健康犊牛接种该分离菌株后出现与自然感染病例相似的纤维素性化脓性肺炎,免疫组化试验显示该菌株分布于病变肺组织、并从中重新分离出接种的病原菌。上述研究结果符合病原微生物鉴定的科赫法则,因此确定荚膜A型多杀性巴氏杆菌是引起牛纤维素性化脓性肺炎的病原。荚膜A型多杀性巴氏杆菌与牛纤维素性化脓性肺炎病原-疾病因果关系的确立,为该新发疫情防控技术的研究提供了参考依据、奠定了实验基础。     

我国多杀性巴氏杆菌荚膜抗原的血清学鉴定

在过去一段时间,研完工作者对各种多杀性巴氏杆菌区分为型的问题实际上已开始了广泛的研究。有关多杀性巴氏杆菌血清学分类的工作结果曾指出,用与流行的巴氏杆菌病在血清学上同样型的菌株制造菌苗的必要性。不同动物的多杀性巴氏杆菌在血清学上的分类在我国尚未进行。现在为了改进生产抗巴氏杆菌病菌苗用菌种,我所进行了巴氏杆菌病茵株的血清学鉴定。由我国不同地区的牛、猪和其他种类动物和禽分离的多杀性巴氏杆菌,共计62株,用经改变的卡特氏(G.R. Carter)间接血凝试验进行了血清学分型。血清学的鉴定结果如下:所有由黄牛、水牛和耗十分离的12个菌株,属于卡特氏英膜B型,13个由猪分离的菌株中7个属于B型,4个A型,2个D型。这个结果与多数的国外研究资料结果不一致,在国外的资料中,猪的菌株是以A型和D型占优势,而在我国Carter氏B型菌是引起猪巴氏杆菌病的主要菌种;在26个禽的菌株中,除了7个菌株未能定型外,其他19个菌种是属于A型;另外由綿羊分离的两个菌株均属于B型,在4个由马分离的菌株中1个属于A型,3个属于B型,3个由兔分离的和1个由水貂分离的菌株全是Carter氏英膜A型。     

牛源荚膜A型多杀性巴氏杆菌疫苗候选株的筛选及鉴定

为了筛选生长快、毒力强、免疫原性好、副反应小的牛源荚膜A型多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)灭活疫苗菌株,本试验选取6株来自不同地区致犊牛肺炎死亡的牛源荚膜A型多杀性巴氏杆菌分离株,测定了培养基生长曲线、小鼠毒力、菌体脂多糖(LPS)含量及各菌株灭活菌苗免疫小鼠和家兔后的抗体效价,并进行了攻毒保护试验。结果显示,分离株Pm2、Pm3、Pm5生长速度较快、毒力较强、LPS含量较多,均含有与毒力和免疫相关的ptfA和fimA基因;免疫小鼠及家兔未发现明显不良反应,在二免后14d血清抗体达1∶64~1∶128,强毒攻毒后全部存活,而PBS对照组全部死亡。本试验结果表明,Pm2、Pm3、Pm5均可作为多杀性巴氏杆菌灭活菌苗的候选菌株,其中Pm3作为首选株。     

牛,羊,猪产气荚膜杆菌和多杀性巴氏杆菌混合感染

牛、羊、猪产气荚膜杆菌和多杀性巴氏杆菌混合感染卢中华，毛春生，王自振，曹定盈（河南农业大学郑州４５０００２）侯安祖，刘香仁，陈洪科（河南省兽医防治站）１９８９年以来，在豫东、豫西南和安徽西部地区散发一种以牛、羊、猪突然死亡、全身实质器官及消化道急性出...     

猪源荚膜血清F型多杀性巴氏杆菌分离鉴定

本研究对从病死猪肺脏分离出的1株菌株,经菌落形态观察、培养特性、生化反应、药敏试验、动物致病性试验,并采用PCR对该分离菌株进行菌种及荚膜血清型鉴定。结果显示,该分离菌株为较少见的荚膜血清F型多杀性巴氏杆菌,对小鼠有较强致病性,且对不同药物的敏感性不同,为指导临床科学用药提供依据。