HSP27和HSP90在猫不同发育时期子宫的表达规律研究

为了探讨热休克蛋白(HSP) 27和HSP90在不同发育时期猫子宫中的表达情况,试验采用免疫组织化学技术分别检测HSP27和HSP90蛋白在5月龄、10月龄、1岁龄、1. 5岁龄、1. 5岁龄(妊娠20 d)猫子宫中的分布与表达情况。结果表明:HSP27在5月龄和10月龄猫子宫中不表达,在1岁龄、1. 5岁龄和1. 5岁龄(妊娠20 d)猫子宫中表达,不同强度阳性区域出现在腔上皮、腺上皮、固有层、血管内皮和子宫肌层中,妊娠期尿囊绒毛膜弱表达; HSP90在10月龄、1岁龄和1. 5岁龄子宫中未见表达,在5月龄和1. 5岁龄(妊娠20 d)猫子宫中表达,5月龄猫子宫腔上皮和腺上皮呈弱表达,1. 5岁龄(妊娠20 d)猫子宫腔上皮呈强表达,浅层腺上皮中等表达,深层腺上皮和尿囊绒毛膜弱表达,在子宫固有层、肌层和血管内皮未见表达。说明HSP27和HSP90蛋白在猫不同发育时期子宫中的表达具有差异性,提示两种热休克蛋白参与子宫重塑过程中子宫细胞凋亡和细胞增殖等过程。     

BDNF与TrkB蛋白在小鼠子宫和着床前胚胎中表达规律的研究

为了研究BDNF与TrkB蛋白在小鼠发情周期和妊娠早期子宫、输卵管及着床前胚胎中的表达规律,试验采用免疫组织化学方法检测BDNF与TrkB蛋白在子宫和输卵管中的表达,采用免疫荧光技术检测着床前不同发育阶段胚胎中蛋白的表达,并利用图像分析软件对两种蛋白在着床前胚胎中的表达强度进行定量分析。结果表明:BDNF与TrkB蛋白在发情周期及妊娠3.5天和4天子宫腔上皮、子宫腺上皮和血管内皮细胞中表达,在发情周期子宫内膜固有层基质细胞中不表达,但在妊娠3.5天和4天子宫蜕膜细胞中表达,发情前期、发情期和发情后期BDNF蛋白的表达强度高于发情间期;BDNF与TrkB蛋白在妊娠2天输卵管黏膜上皮和血管内皮细胞中表达;两种蛋白在着床前胚胎各发育阶段都有表达,在囊胚期达到最高水平。说明BDNF和TrkB蛋白通过旁分泌或自分泌途径对子宫、输卵管尤其是着床前胚胎发育发挥调控作用。     

瘦素对绵羊子宫内膜上皮细胞增殖、迁移和凋亡的影响

试验旨在明确瘦素在妊娠和非妊娠绵羊子宫内膜组织中的定位特征,探究其对绵羊子宫内膜上皮细胞中胚胎附植的影响。使用免疫组化法检测瘦素及其受体在妊娠和未妊娠绵羊的子宫内膜上皮组织的表达及定位;利用组织块分离培养原代绵羊子宫内膜上皮细胞,CCK8法确定瘦素最适浓度,RT-qPCR和Western blot检测瘦素对绵羊子宫内膜上皮细胞凋亡的作用,细胞划痕试验检测瘦素对绵羊子宫内膜上皮细胞迁移的作用,RT-qPCR检测瘦素对胚胎附植相关因子血管内皮生长因子（VEGF）、白血病抑制因子（LIF）、白细胞介素-6(IL-6)、子宫内膜附植位点黏蛋白（Muc1）、基质金属蛋白9(MMP9)、白细胞介素-1β(IL-1β)、骨桥蛋白（OPN）、泛素样修饰因子（ISG15）等基因mRNA的表达情况。结果显示,瘦素蛋白主要表达在未妊娠绵羊子宫内膜的基质和上皮组织中,主要在妊娠绵羊子宫内膜上皮组织中表达,瘦素受体表达无明显变化;组织块法可成功获得具有典型上皮样细胞特征并表达角蛋白CK18的原代绵羊子宫内膜上皮细胞。250 mg/L瘦素促进绵羊子宫内膜上皮细胞增殖和迁移,并显著上调Bcl-2,下调BAX、Cas...     

绵羊妊娠识别、建立和维持的信号系统

妊娠的建立和维持归因于胚体的信号和黄体对孕酮的产生,在反刍动物,胚体滋养层分泌的激素抑制子宫内膜产生前列腺素PGF2α.在发情周期的绵羊,孕酮下调子宫内膜腔上皮和子宫腺上皮孕酮受体基因的表达,并伴随着上皮雌激素受体和催产素受体的增加.在催产素的作用下,子宫开始分泌溶黄体作用的前列腺素F2α.在妊娠绵羊,孕体滋养层产生的干扰素可作用于子宫内膜而直接抑制雌激素受体基因和催产素受体基因的转录.孕酮、干扰素、胎盘催乳素和生殖激素共同组成了一个"作用网络"来调节子宫的功能分化和子宫腺的形态发生,从而维持绵羊妊娠.本文综述了绵羊妊娠识别、建立和维持的信号系统.     

绵羊妊娠识别、建立和维持的信号系统

妊娠的建立和维持归因于胚体的信号和黄体对孕酮的产生,在反刍动物,胚体滋养层分泌的激素抑制子宫内膜产生前列腺素PGF2α。在发情周期的绵羊,孕酮下调子宫内膜腔上皮和子宫腺上皮孕酮受体基因的表达,并伴随着上皮雌激素受体和催产素受体的增加。在催产素的作用下,子宫开始分泌溶黄体作用的前列腺素F2α。在妊娠绵羊,孕体滋养层产生的干扰素可作用于子宫内膜而直接抑制雌激素受体基因和催产素受体基因的转录。孕酮、干扰素、胎盘催乳素和生殖激素共同组成了一个"作用网络"来调节子宫的功能分化和子宫腺的形态发生,从而维持绵羊妊娠。本文综述了绵羊妊娠识别、建立和维持的信号系统。     

FZD5在山羊妊娠早期的表达及激素调控

实验旨在研究雌性山羊早期妊娠和发情周期中 Frizzled-5(FZD5)蛋白在子宫中的表达,以及类固醇激素对 FZD5 的表达调控。选取发情周期、早期妊娠及雌激素(50 μg/mL)与孕酮(50 ng/mL)处理山羊的子宫组织,采用免疫组织化学染色、荧光定量 PCR和 Western blot检测 FZD5在山羊子宫中的表达规律。结果表明:FZD5 蛋白在山羊妊娠早期的子宫腔上皮和腺上皮中表达;FZD5 mRNA 和蛋白在胚胎与子宫的黏附前(D6)和黏附中(D16)表达较高,在黏附后(D19)和胎盘形成早期(D25)呈下降趋势;孕酮处理导致FZD5表达降低,表明山羊子宫中孕酮下调 FZD5的表达。研究提示FZD5可能在山羊胚胎着床过程中发挥作用。     

幼龄小麂子宫组织结构及BDNF和TrkB蛋白表达的研究

为了探讨幼龄小麂子宫组织结构,并研究脑源性神经营养因子(BDNF)及其受体酪氨酸蛋白激酶(TrkB)蛋白在幼龄小麂子宫中的表达情况,试验采集意外死亡小麂子宫样品,运用H. E.染色方法对其子宫结构进行观察,同时采用免疫组织化学方法分析BDNF和TrkB蛋白在子宫中的分布情况。结果表明:小麂两侧子宫角存在体积较大的子宫肉阜凸伸向子宫腔,子宫组织结构与其他动物相似,包含四层结构,固有层可见不同形态的子宫腺,上皮和固有层有数量不等的淋巴细胞; BDNF和TrkB蛋白在小麂子宫内膜上皮、腺上皮、肌层和血管内皮都可见强度不等的表达,BDNF表达强度高于TrkB蛋白。     

白血病抑制因子及其受体与子宫内膜的关系

白血病抑制因子(LIF)是一种多生物活性的细胞因子,研究表明,LIF在人及动物的子宫内膜的腺上皮细胞、妊娠期蜕膜及胎盘上均有表达;胚泡是动物生殖过程中的关键,一些细胞因子起重要作用,它们能够充当子宫内膜微环境的"局部调节者",LIF对哺乳动物胚胎发育到胚泡阶段具有一定的作用,LIF在子宫内膜中特异性表达,促进胚胎生长发育和启动胚泡植入;LIF在生殖周期中影响子宫的功能及调节子宫内膜生长,这可能与LIF作用于子宫使其能发生蜕膜反应有关;LIF通过与LIF受体及gp130蛋白作用而发挥重要的生物学功能。LIF在哺乳动物早期妊娠中的作用机制具有重要意义。文章对LIF及其受体与子宫内膜的关系做了综述。     

BDNF和TrkB蛋白在5月龄和10月龄雌猫子宫和卵巢表达的研究

为探讨脑源性神经营养因子(BDNF)及其受体酪氨酸激酶B(TrkB)在幼龄和初情期猫子宫和卵巢的表达规律,试验采用免疫组织化学方法检测BDNF和TrkB在5月龄、10月龄雌猫子宫和卵巢上的表达差异。结果表明:BDNF和TrkB在原始卵泡和各级卵泡中均有表达,BDNF在窦状卵泡的颗粒细胞、膜细胞和卵母细胞中表达明显,10月龄蛋白表达强度强于5月龄,颗粒细胞的蛋白表达增强明显;TrkB表达部位与BDNF基本一致,但卵泡液和卵母细胞表面出现强表达,10月龄表达强度与5月龄基本一致。此外在猫卵巢发现含有多个卵母细胞的卵泡。BDNF在子宫内膜、腺体和小血管均有表达,10月龄子宫的蛋白表达强度高于5月龄,BDNF在10月龄子宫肌层有表达、5月龄无表达;TrkB在10月龄子宫内膜、腺体、肌层弱表达,小血管强表达,TrkB蛋白除了在5月龄子宫的小血管强表达外其他部位几乎无表达。     

褪黑素受体在未妊娠和妊娠牦牛子宫表达的研究

旨在研究褪黑素对妊娠牦牛子宫的调控作用,采用real-time PCR法和免疫组织化学S-P法,对未妊娠和妊娠不同时期牦牛子宫中褪黑素受体(MT1)mRNA和褪黑素受体(MT1)蛋白的表达进行研究。结果表明:牦牛未妊娠和妊娠的不同时期,牦牛子宫基质细胞(SC)和肌层平滑肌细胞(MM)中均有MT1蛋白表达(P0.05);血管内皮细胞(EBV)和血管平滑肌细胞(VSM)中的MT1蛋白表达,在妊娠28~35d差异不显著,随妊娠时间的增加,MT1蛋白表达增加(P0.05);腺上皮细胞(GE)中的MT1蛋白,在妊娠初期(妊娠28~35d)差异不显著,妊娠50~60d时,差异显著(P0.05),妊娠90~100d时,差异极显著(P0.01)。而在腔上皮细胞(SE)中,MT1蛋白表达量在妊娠28~35d比未妊娠时低(P0.05),而这种趋势随妊娠时间的增加继续降低(P0.01)。未妊娠牦牛子宫中MT1mRNA表达量显著高于妊娠牦牛(P0.01)。综上表明,在妊娠期,牦牛子宫对褪黑素的需求量降低,褪黑素主要作用于牦牛GE,调节子宫腺功能,使牦牛子宫产生适应妊娠的生理反应。     

孕酮对小鼠妊娠早期子宫内膜转化生长因子β1Ⅰ型受体表达的影响

采用免疫组织化学SABC法，研究了外源性孕酮对妊娠小鼠着床早期子宫内膜转化生长因子β1Ⅰ型受体(TGFβRⅠ)表达的影响。结果显示：(1)孕4d，注射2mg孕酮组，子宫表面上皮、腺上皮及基质中TGFpRI表达增加，与对照组和注射孕酮4mg组差异显著(P＜0．01)。注射孕酮4mg组，表面上皮TGFβRⅠ表达无显著增加；腺上皮细胞TGFβRⅠ表达稍有下降，但与对照组差异不显著；基质细胞TGFβRⅠ表达明显增加，与对照组差异显著(P＜0．01)。(2)孕5d，试验组表面上皮和腺上皮TGFβRⅠ随着孕酮剂量的加大，其表达下降；基质细胞TGFβRⅠ表达则随孕酮剂量的增加而增多，且3组间差异显著(P＜0．01)。(3)孕6d，注射2mg组，表面上皮及基质细胞TGFβRⅠ表达增加，与对照组差异显著(P＜0．01)，而腺上皮TGFβRⅠ表达呈下降趋势。注射4mg组，表面上皮、腺上皮及基质表达变化趋势同孕5d。结论：外源性孕酮对妊娠小鼠着床早期子宫内膜转化生长因子β1型受体表达有一定影响，即孕酮可显著提高基质TGFβRⅠ表达，但对腺上皮TGFβRⅠ的表达有下调作用；对表面上皮TGFβRⅠ的表达作用不定，2mg使表面上皮TGFβRⅠ表达增多，4mg使TGFβRⅠ表达降低。     

Crb1在小鼠生后不同发育阶段子宫组织中的表达

应用HE染色方法和免疫荧光组织化学技术对小鼠生后不同发育阶段子宫组织结构的发育以及极性调控蛋白Crb1的定位表达进行了研究,结果显示,随个体发育,子宫管腔及子宫腺腔不断扩大,子宫内膜上皮持续增厚、固有层内子宫腺逐渐发达;4周龄时子宫腔面出现纤毛,随发育进程越来越发达;在各发育阶段的小鼠子宫组织中均有Crb1的表达,随个体发育表达呈现先增强后减弱的趋势,在8周龄时达到最强;Crb1主要定位于子宫内膜上皮细胞和子宫腺上皮细胞的胞膜和胞质,提示Crb1可能与小鼠子宫内膜上皮细胞和腺上皮细胞的极性建立和维持有关。     

褪黑素受体在牦牛子宫中的表达分析

为探究褪黑素受体（MTNR）在牦牛子宫中的定位及表达与妊娠的关系,本研究利用免疫组织化学技术（S-P法）分别检测未妊娠、妊娠25~45 d、妊娠50~85 d、妊娠90~110 d牦牛子宫中MTNR的表达情况。结果表明：MTNR免疫阳性产物在牦牛子宫腺上皮细胞、腔上皮细胞、基质细胞、血管平滑肌细胞、血管内皮细胞、肌层平滑肌细胞均有表达;不同妊娠阶段牦牛子宫中的基质细胞和肌层平滑肌细胞中均有MTNR的表达,但其差异性不显著（P〉0.05）;血管内皮细胞和血管平滑肌细胞中的MTNR表达强度随着妊娠阶段时间的增加且差异性显著（P〈0.05）;腺上皮细胞中的MTNR在妊娠后期表达强度增加且差异极显著（P〈0.01）;腔上皮细胞的MTNR在妊娠后期表达强度降低（P〈0.01）。     

八点黑獭兔不同发育时期子宫组织结构变化的研究

观察母兔妊娠20、26、29天和15、30、60、90日龄八点黑獭兔的子宫组织,以探讨八点黑獭兔子宫的形态学发育特点。结果表明：獭兔的子宫随着年龄的增长．其内膜的粘膜上皮由假复层柱状纤毛上皮逐渐分化成紧密规则的单层柱状上皮;固有层在15～30日龄之间出现．内含大量间质细胞;妊娠期固有层发生水肿和充血;子宫肌层在幼龄时分层不明显,各层肌纤维互相交织,随平滑肌细胞分裂增生,3月龄时肌层出现明显的内环、外纵两层,中间形成一层环状排列的血管：獭兔出生后其子宫内膜腺由子宫内膜上皮细胞内陷形成,随后腺上皮细胞经有丝分裂增生,15日龄幼兔已形成单管子宫腺。该研究结果可为兔的解剖学、生殖生理学增添新的内容,也为进一步研究兔生殖系统疾病的治疗与预防提供参考资料。     

山羊子宫内胆碱能神经分布及妊娠时的变化

采用乙酰胆碱酯酶组化法，研究了山羊子宫内胆碱能神经的分布，结果，山羊子宫颈是经较丰富，在浆膜和肌层内有神经束伴血管而行并分支分布于血管壁，在粘膜及其皱褶上皮下，粘液腺上皮有神经丛分布，妊娠时子宫颈部的神经分布与未妊娠时相比无明显变化，子宫角部神经密度均低于子宫颈部，其内环行肌层中及其与内膜交界处神经密度略高，神经束伴血管而行并分支分布于血管壁，在子宫腺上皮下及内膜上皮下无神经分布，妊夺时作胎盘内无神经分布外，仍有神经束伴血管而行交分支分布于血管壁，在分布于血管壁的神经纤维减少，结果提示，胆碱能神经主要支配山羊子宫内血管壁及颈部粘液腺上皮和粘膜上皮，妊 时子宫颈部胆碱能神经无明显变化，而子宫角内支配血管壁的胆碱能神经纤维减少。     

小鼠子宫内膜凝集素结合特性的生殖周期改变

用４种酶标植物凝集素（ＣｏｎＡ,ＷＧＡ,ＳＢＡ,ＲＣＡ）作探针,研究了小鼠发情周期、妊娠期和产后子宫内膜上皮、固有膜细胞和腺上皮凝集素结合特性的变化。子宫内膜与这４种凝集素的结合,随发情周期而波动。与间情期相比,妊娠期子宫内膜上皮与ＣｏｎＡ的结合,由阴性转为阳性,并随妊娠的持续逐渐加强,产后又突然转为阴性。子宫内膜上皮与ＷＧＡ的结合,在间情期和妊娠１ｄ均为阳性,妊娠７ｄ减为弱阳性,继之又加强,产后达最强。无论妊娠期还是产后,子宫内膜上皮与ＲＣＡ的结合均为强阳性,与ＳＢＡ的结合均为阴性。结果提示,生殖周期子宫内膜与凝集素结合特性的规律性变化,可能与激素调节、胚泡的着床和分娩有关     

enJSRV及其受体HYAL2在妊娠蒙古绵羊胎盘组织中的表达

为了探究enJSRV及其受体HYAL2在妊娠蒙古绵羊的发育过程和肺腺瘤病的致瘤过程中的作用,运用TaqMan实时荧光定量PCR和组织原位杂交技术对其在不同妊娠时期（30、50、70、90、110、130d）蒙古绵羊胎盘的表达规律和分布定位进行了研究。荧光定量PCR结果显示,enJSRV及其受体HYAL2在蒙古绵羊胎盘组织的不同妊娠时期均有表达,通过SPSS统计学分析可以看出,妊娠蒙古绵羊胎盘组织中enJSRV基因的表达于90d时达到高峰,之后开始下降,直至妊娠130d表达量最低,且enJSRV与其受体HYAL2mRNA之间亦无线性相关性。原位杂交结果显示,enJSRV及其受体HYAL2mRNA在妊娠30、50、130d蒙古绵羊胎盘的腺上皮细胞、肉阜、胎盘绒毛叶、间质及滋养外胚层中均有阳性信号表达。enJSRV及其受体HYAL2在不同妊娠时期蒙古绵羊胎盘组织的表达规律和分布定位揭示其在胎盘的形成过程中可能发挥重要作用,且可通过干扰enJSRV的侵入而影响肺腺瘤病的发生。     

甘氨酰tRNA合成酶在小鼠围着床期子宫及蜕膜化过程的时空特异性表达

核编码的甘氨酰-tRNA合成酶(Glycyl-tRNA Synthetase, GlyRS)是细胞质和线粒体蛋白质翻译所必需的,GlyRS除了在蛋白翻译中的作用外,它还参与基因转录、炎症和细胞增殖等其他生物学过程。本研究从mRNA水平和蛋白水平检测了GlyRS在小鼠早期妊娠1～8 d模型、人工诱导蜕膜化模型和体外诱导人子宫内膜基质细胞蜕膜化模型中的表达规律。结果表明:GlyRS mRNA和蛋白在小鼠早期妊娠1～4 d的腔上皮和腺上皮中表达,在小鼠早期妊娠5～8 d主要在胚胎和蜕膜区表达;随着蜕膜化程度增加,表达量逐渐增加;在人工诱导蜕膜化模型中,诱导组GlyRS mRNA和蛋白表达情况类似,表达量均明显高于对照组。在体外诱导的人子宫内膜基质细胞蜕膜化模型中,诱导组GlyRS mRNA表达量随着诱导天数的增加而增加,均显著高于对照组。以上结果表明GlyRS参与小鼠早期妊娠及子宫蜕膜化的过程。     

哺乳动物子宫内膜腺的发育与调控

哺乳动物的子宫内膜腺可合成和分泌或转运一些蛋白及相关物质 ,这些物质在胎儿存活、发育、妊娠识别信号的启动及胚胎着床等方面起重要的作用。子宫内膜腺的发育包括内膜上皮出芽形成内膜腺上皮、内膜腺上皮管穿过固有层及内膜腺上皮卷曲和分支等几个连续的过程。哺乳动物子宫内膜腺的形态发生受许多因素的调控 ,但确切的调控机理目前尚不完全清楚     

雌激素受体α、β在妊娠猪子宫中的表达

众所周知,子宫是一个内分泌、旁分泌和自分泌的分子作用靶器官,类固醇激素对其具有特殊的重要性。本试验通过RT-PCR、Western bloting和免疫组化技术对怀孕猪整个妊娠期（交配后10、18、32、50、71、90 d）的雌激素受体（ERα和ERβ）mRNA和蛋白质进行了定位。研究结果首次发现,猪的整个妊娠周期中都有雌激素受体蛋白存在。ERα存在于怀孕猪子宫的腔上皮（LE）、腺上皮（GE）细胞和子宫肌层的肌细胞中,而且在妊娠的不同阶段染色的强度并不相同;在怀孕猪妊娠周期内LE和GE细胞中均可检测到ERβ,但子宫肌层上仅只有少许细胞中存在ERβ,并且染色结果显示弱免疫反应。Western bloting分析结果表明,试验期内都能检测到ERα和ERβ蛋白。RT-PCR结果显示,在妊娠期的每一阶段都有ERα和ERβ的mRNA表达。以上结果表明,相对ERβ而言,妊娠猪子宫中ERα含量更丰富,且占主导地位;怀孕猪整个妊娠周期内都能发现ERα和ERβ,并且可能对雌激素细胞的增值和分化起直接作用。