广东罗非鱼无乳链球菌分离鉴定及生物学特性分析

本研究旨在明确当前罗非鱼无乳链球菌流行状况和生物学特性,为鱼源无乳链球菌病防控提供新的数据。本研究于2019—2020年,从广东罗非鱼主养区茂名、湛江地区采集病样进行无乳链球菌的分离鉴定。用PCR方法对分离株血清型及4个主要毒力基因进行检测,通过纸片法对分离菌株进行31种抗菌药物药敏试验和多重耐药研究,利用斑马鱼模型进行了致病性试验。结果显示：从261份病样中分离到35株无乳链球菌;血清型检测表明无乳链球菌分离株的血清型均为Ia型;主要毒力基因的检测证明,cylE、sodA、gapC基因在所有鱼源分离株及人源、牛源和鱼源参考株中检出率均为100%,而scpB只在人源参考菌株中检出;药敏试验结果发现,无乳链球菌分离株对19种抗菌药敏感率为90%以上,对6种抗菌药耐药率为50%以上,分离株的耐药基因型和表型部分一致,无乳链球菌分离株均多重耐药,其中5重及以上耐药的菌株为27株,占总菌株数的77.1%;斑马鱼致病试验表明,无乳链球菌分离株可导致斑马鱼不同程度的发病死亡。本研究明确了当前罗非鱼源无乳链球菌的血清型、毒力基因、耐药特性和致病性,为广东乃至全国罗非鱼无乳链球菌病的防控提供了参考。     

山东东营地区规模化猪场仔猪链球菌的分离鉴定与耐药性分析

为了解山东省东营地区规模化养猪场中仔猪链球菌流行分布情况和对常用抗菌药物耐药性情况,本试验于2019—2021年采集东营地区规模化养猪场中疑似患链球菌病仔猪的肝脏、关节液及病死猪的淋巴结等病料组织184份,采用常规细菌分离法和PCR方法对采集的病料组织进行链球菌的分离鉴定,用人工感染小白鼠和K-B药敏纸片法分别检测其致病性和耐药性。结果表明,从采集的184份病料组织中分离得到了95株链球菌,其中72株分离菌株对小白鼠具有致病性,其对青霉素、新霉素、庆大霉素等10种药物耐药率在50.0%以上,对其他药物的耐药率在4.2%～29.2%之间。说明该地区分离得到的仔猪致病性链球菌的耐药性严重。     

基于PFGE技术的酸乳中乳酸菌的基因分型

采用选择性培养基分离酸乳中的保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌,并利用生理生化和糖发酵实验结合16S rDNA同源性分析对分离所得菌株进行鉴定,获得保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌分离菌株。利用脉冲场凝胶电泳（pulsed field gel electrophoresis,PFGE）分别对保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌分离株进行基因分型。结果表明：所检测的酸乳样品中均含有保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌;仅有2 种酸乳的嗜热链球菌为同一菌株,其余酸乳中的保加利亚乳杆菌及嗜热链球菌均为不同菌株。PFGE可以对保加利亚乳杆菌和嗜热     

藏绵羊肺脏中链球菌的分离鉴定及耐药性分析

本试验通过无菌采集西藏地区绵羊肺脏,然后进行细菌分离、纯化及PCR鉴定;同时,对分离的链球菌菌株进行药物敏感性研究,以期为生产实践中对该病原的防制提供参考信息。结果显示,纯化所得到的细菌呈革兰氏阳性链球状,经PCR、克隆、测序鉴定为链球菌;药敏试验结果显示分离菌株对复方新诺明、恩诺沙星、庆大霉素及四环素等大部分药物敏感。本研究为西藏地区绵羊链球菌病的有效防制提供参考。     

广西罗非鱼主养区致病性链球菌及其耐药性调查

为了解致病性无乳链球菌在广西罗非鱼主养区的分布及其耐药性情况,对广西各地区发病罗非鱼进行现场采样,以常规方法从患病罗非鱼的脑、心脏和肝脏等组织分离细菌,人工回归感染试验确定分离菌株的致病性,以API 20 Strep和16S rRNA分别对菌株进行生化鉴定和分子鉴定,K-B药敏纸片扩散法检测菌株的耐药性。调查结果,从广西8个市12个县/区采集的672个罗非鱼病样中,有30个病样共检出致病性强的革兰氏阳性球菌30株,参考株总检出率4.46%,百色市和来宾市的病样中未分离到革兰氏阳性球菌;经鉴定,分离到的30株球菌均为无乳链球菌(Streptococcus agalactiae),与无乳链球菌(S.agalactiae)参考株JF423947、JQ039375、KF111315和JQ99015616SrRNA核苷酸的同源性最高(98.5%~100%);28种药物的药敏试验结果显示,对所有菌株敏感的药物只有盐酸沙拉沙星1种,对所有菌株耐药的药物有磺胺-6-甲氧嘧啶(钠)、磺胺对甲氧嘧啶和复方磺胺嘧啶3种。     

黑熊链球菌的分离鉴定及对小鼠的毒力试验

本试验以死亡黑熊为试验材料,无菌采集病料中的病原体进行分离、培养,应用涂片染色镜检、生化试验及PCR等方法进行鉴定,对分离的病原体进行药物敏感性试验和小鼠毒力试验。结果表明,分离的病原体经革兰染色呈蓝紫色的阳性链球状菌体,经生化试验和PCR鉴定为致病性链球菌,分离的熊源链球菌对头孢先锋V、头孢孟多等药物较为敏感,对BALB/c小鼠具有一定的致病性,最小致死量5×109 CFUs。本试验为黑熊链球菌病的深入研究奠定了基础。     

一株猪源链球菌的分离鉴定及生物学特性研究

从送检的一份疑似链球菌病病死猪病料中分离出1株细菌,通过对分离菌株进行细菌的培养特性、生化试验、玻片凝集试验及PCR分型鉴定,确定为2型猪链球菌,动物致病性试验表明,1×10⁸ CFU/mL的剂量可致死小白鼠,对该分离菌株的毒力因子进行PCR检测发现,溶菌酶释放蛋白(mrp)、胞外因子(ef)和溶血素(sly)均为阳性。此菌的分离鉴定为自家灭活菌苗的制备提供了候选菌株。     

蛋种鸡源沙门菌分离与生物学特性

为鉴定蛋种鸡源沙门菌生物学特性，本试验采集患病蛋种鸡的肝脏、卵黄、心血等病料组织，通过细菌分离培养、肠杆菌科和其他革兰阴性杆菌的标准鉴定系统(API20E)、PCR等方法进行沙门菌分离鉴定；采用人工感染试验、玻板凝集试验、脉冲场凝胶电泳技术(PFGE)分别对分离的沙门菌致病性、血清分型、分子分型进行检测。结果显示，分离的12株沙门菌对雏鸡具有致病性；除菌株36未测出血清型外，其余11株沙门菌分离株属于4种血清型，其中菌株C1为O4(B)群无动力沙门菌，菌株C13、C4为鸡沙门菌，菌株C5、C6、C7、C8、C9为病牛沙门菌，菌株C10、C11、C12为肠炎沙门菌；菌株36的PFGE带型不明显，其余11株沙门菌可分为4个不同的PFGE带型，各带型间亲缘关系较远，不同血清型菌株之间的相似度在56%～100%,相同的血清型可能具有聚为1簇的趋势，不同血清型菌株之间具有较高的相似度。本试验结果为进一步分析蛋种鸡源沙门菌及开展分子流行病学溯源提供了科学依据。     

广西罗非鱼无乳链球菌的分离鉴定、毒力基因及耐药性研究

本研究旨在明确中国罗非鱼主养区广西各地罗非鱼无乳链球菌（Streptococcus agalactiae）分离株的血清型分布、毒力基因携带情况和耐药情况,为罗非鱼无乳链球菌病的防控奠定基础。2018-2019年从广西柳州、钦州、南宁、北海等地患无乳链球菌病罗非鱼体内分离了47株无乳链球菌,并对各分离株的血清型、毒力基因分布和耐药情况进行检测和分析。血清型检测结果表明,47株无乳链球菌血清型高度一致,均为Ⅰa血清型。对4种毒力基因检测结果表明,47株无乳链球菌临床分离株cylE、sodA、gapC毒力基因的检出率均为100%,而scpB基因仅在人源参考菌株2603V/R中检出,在所有鱼源分离株中未检出。对11类（31种）常见抗生素的药敏试验结果表明,临床分离株对磺胺异噁唑、新霉素、庆大霉素、卡那霉素的耐药率达到90%以上,对氧氟沙星、左氧氟沙星、氨苄青霉素、阿莫西林、头孢克洛、头孢曲松、头孢哌酮、头孢拉定、土霉素、强力霉素的敏感性均为100%。多重耐药检测结果表明,5重以上耐药菌株占93.62%,其中9重以上耐药菌株为19.15%,且均分离自柳州地区。结果表明,广西地区罗非鱼源无乳链球菌血清型单一,均为Ⅰa血清型,且均携带多种毒力基因,多重耐药现象严重。     

海南罗非鱼源无乳链球菌的分离鉴定及生物学特性研究

为探究目前海南地区罗非鱼无乳链球菌病的流行性,了解该地区无乳链球菌耐药情况,本研究2020年8月从海南地区部分渔业养殖场的病鱼中共分离获得15株无乳链球菌,对各分离菌株的血清型、主要毒力基因及耐药性进行检测,并对多重耐药情况进行分析。血清型检测结果显示,15株分离菌株的血清型与对照菌株A909一致,均为Ⅰa型。毒力基因检测结果显示,15株分离菌株均未检出毒力基因scpB,但该毒力基因在参考菌株人源无乳链球菌2603V/R中检出,而主要毒力基因cylE、sodA、gapC的检出率均为100%。药敏试验结果表明,15株分离菌株对甲氧胺嘧啶、磺胺异噁唑、复方新诺明、链霉素、新霉素、庆大霉素的耐药率达85%以上;对头孢克洛、头孢曲松、头孢哌酮、头孢拉定、卡那霉素、红霉素、利福平、克林霉素敏感性达80%以上;未发现对甲氧胺嘧啶、氟罗沙星、链霉素、新霉素、庆大霉素敏感的菌株。多重耐药检测结果表明,15株分离菌株均至少对4种药物表现耐药,其中6重及以上耐药的菌株占总分离菌株数的86.67%,并有2株为13重耐药菌株。本研究为海南地区鱼源无乳链球菌病的用药提供参考,为华南地区罗非鱼无乳链球菌的流行病学和疾病防控提供调查依据。     

一株猪源豕链球菌的分离鉴定

从一头痛死猪分离到一株疑似猪链球菌的菌株,通过生化鉴定、链球菌血清学分群、猪链球菌的血清学分型、PCR鉴定排除了是猪链球菌的可能.应用16 S rDNA的通用引物27F和1492R对可疑菌的核酸扩增、测序及序列比对表明,所分离到的菌株与豕链球菌具有98％的同源性,因此判断为豕链球菌.小鼠感染试验显示,感染的小鼠没有明显的发病症状,且2周后仍正常存活,因此认为所分离的豕链球菌不具有致病性或具有较弱的致病性.     

福建省漳州市罗非鱼无乳链球菌分离鉴定及毒力基因和耐药性研究

【目的】 明确福建漳州地区罗非鱼无乳链球菌临床分离株的血清型、毒力基因携带情况与耐药特性,为鱼源无乳链球菌研究提供新的数据。【方法】 于福建省漳州市部分罗非鱼养殖场采集疑似无乳链球菌感染的病鱼样品,通过分离培养、形态观察及生化试验初步分离鉴定病原菌。经由16S rDNA特异性片段引物、16S rDNA通用引物进行PCR鉴定及测序比对鉴定分离株。用PCR方法检测分离株血清型及4个主要毒力基因（cylE、sodA、gapC和scpB基因）分布情况。通过纸片扩散法对分离菌株进行11大类共29种抗菌药物的药敏试验,并进行多重耐药分析。【结果】 分离株菌落呈白色圆形、边缘整齐、表面光滑湿润,呈β溶血;革兰染色阳性,菌体排列为长短不一的链状,单个或成对存在;VP试验、CAMP均为阳性,触酶试验阴性,能发酵海藻糖,均符合无乳链球菌的典型特征,经鉴定共分离获得14株鱼源无乳链球菌。14株分离菌株的血清型均为Ⅰa型。分离株毒力基因cylE、sodA、gapC的检出率均为100%,而毒力基因scpB均未检出。分离菌株对磺胺异噁唑、庆大霉素、卡那霉素耐药率均为100%,对链霉素、新霉素、甲氧胺嘧啶耐药率均>70%。分离株均为多重耐药菌株,6重及以上耐药的菌株占总分离菌株数的78.57%。【结论】 本研究明确了当前福建漳州地区罗非鱼源无乳链球菌的血清型、毒力基因和耐药特性,为进一步研究鱼源无乳链球菌的致病机理和临床有效防控措施提供参考。     

广西罗非鱼链球菌病病原的生化鉴定及药敏试验

从来自南宁、北海等地的十几个暴发疾病的罗非鱼养殖场发病罗非鱼中,分离得到了8株链球菌。通过生化鉴定及药敏试验,结果表明,分离到的8株致病性链球菌,有6株为海豚链球菌（streptococcus iniae）,2株为无乳链球菌（streptococcus agalactiae）。     

腹泻犊牛大肠杆菌血清型抗菌药物耐药性耐药基因鉴定及脉冲场凝胶电泳分型

本试验对2011年由哈尔滨周边地区采集的263份腹泻犊牛的肛拭子进行大肠杆菌的分离鉴定,并通过小鼠致病性试验鉴定出26株致病性大肠杆菌,用Kirby-Bauer法开展对12种药物的药敏试验,PCR检测了我国流行广泛的9种耐药基因,脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行基因分型.检测结果,该地区主要流行的致病性血清型为O26、O78和O15,所有致病性菌株都存在多重耐药现象,其中阿莫西林-棒酸、链霉素、四环素、复方新诺明的耐药率达到了100％,共检出7种耐药基因,检出率符合我国平均分布趋势,且检出率基本上与耐药表型相一致.PFGE结果显示,该地区存在致病性菌株的克隆传播.     

罗非鱼链球菌双重荧光PCR方法的建立及临床应用

为构建一种无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)和海豚链球菌(Streptococcus iniae)的双重荧光PCR检测方法,根据筛选的海豚链球菌LysR基因和无乳链球菌Sip基因设计特异性引物和探针,优化反应浓度和退火温度,建立标准曲线,分析方法的敏感性、特异性和重复性,最后进行方法的初步应用。结果显示：当无乳链球菌引物和探针浓度分别为0.20和0.16μmol/L,海豚链球菌引物和探针浓度分别为0.20和0.32μmol/L,且退火温度为53℃时,建立的双重荧光PCR方法荧光曲线标准,线性关系线良好,有较高的扩增反应效率;无乳链球菌和海豚链球菌最低检测限分别为29.6和10.7 CFU/mL,与猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype 2)和其他8种常见的水生动物疫病病原体无交叉反应,重复变异系数均小于2%;临床样品及人工污染样品检测结果与细菌分离鉴定方法符合率为100%。结果表明,本研究建立的罗非鱼链球菌双重荧光PCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,可同时对无乳链球菌和海豚链球菌进行检测,为罗非鱼链球菌病的临床诊断和研究...     

犊牛脑炎病原菌的分离鉴定及病理组织学观察

为了确定导致初生犊牛脑炎的主要病原菌,采用生化试验、PCR技术及16 S rRNA测序对分离的病原菌进行鉴定,动物试验确定主要病原菌的致病性,药敏试验确定其药物敏感性,通过石蜡切片观察其脑组织的病理组织学变化.结果显示,分离株符合乳房链球菌的生物学特性；该菌株对小鼠致病性较强,死亡率为5o％,而对家兔无致病性；对万古霉...     

巴马香猪源马兽疫链球菌分离及分子生物学鉴定

为了对山东某巴马香猪场送检的35日龄病死猪病因进行确诊,试验对送检病料进行了细菌分离培养、形态学观察、生化试验、药敏试验、致病性试验及PCR鉴定。结果表明:分离菌为马兽疫链球菌,该菌株具有多重耐药性,对昆明系小鼠及断奶仔猪均有一定致病性。说明该分离菌为发病猪发病病原,可作为防治该病自家灭活菌苗的候选菌株。     

5株牛源肺炎链球菌的分离鉴定及耐药性分析

为了确定导致吉林省某肉牛场肉牛发病的致病菌,对分离菌进行形态特征、生化特性、分子生物学等鉴定,并对分离菌进行致病性和耐药性检测。结果表明:细菌分离培养共分离到5株病原菌,经分子生物学鉴定,5株病原菌均为牛肺炎链球菌,且均具有致病性;5株牛肺炎链球菌对阿米卡星、氟苯尼考、头孢噻肟敏感,对复方新诺明、泰乐菌素、青霉素钠、红霉素和头孢吡肟具有较强的耐药性,对环丙沙星、氯霉素、强力霉素和庆大霉素呈现不同程度的耐药现象。说明头孢噻肟、氟苯尼考、阿米卡星可作为治疗牛链球菌病的首选药物。     

一株高致病性7型猪链球菌的分离鉴定

为了对山东省滨州市某规模化养猪场发病猪进行确诊,对关节肿大并出现死亡的断奶前后仔猪进行剖检和病原菌的分离鉴定,分离得到1株革兰氏阳性链球菌,对分离菌株进行特性培养、显微镜观察及分子生物学鉴定等工作,并开展了耐药性检测、动物回归试验和小鼠致病性试验。结果表明:分离菌株为7型猪链球菌,对多种药物具有抗性;致病性试验结果表明该菌株对猪具有高致病性,导致部分猪只出现神经症状,对昆明系、BALB/c小鼠无致病性,对CD1小鼠具有一定的致病性。     

天津地区猪7型链球菌的分离鉴定与小鼠致病性研究

为了解天津地区猪链球菌病的发病情况及流行血清型,试验从天津地区某猪场发病猪脑与肺脏中分离病原菌,并对分离菌株进行革兰氏染色镜检、生化试验、不同毒力基因型PCR检测、药敏试验和小鼠致病性试验。结果表明:从脑与肺脏中分离出2株链球菌;革兰氏染色为阳性球菌;生化试验符合链球菌生长特性; PCR检测2株链球菌的毒力血清型,从脑中分离出的链球菌为cps7h型,并携带溶菌酶释放蛋白(mrp)和溶血素(sly)毒力基因,从肺脏中分离出的细菌未测出血清型;从脑中分离出的链球菌对青霉素高度敏感,对头孢呋辛、新霉素等耐药;致病性试验显示,昆明系小鼠不表现明显的临床症状,仅表现组织水平的变化。