奶牛隐性乳房炎三种致病菌的多重PCR检测方法的建立

为建立快速并能同时检测无乳链球菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌3种奶牛隐性乳房炎致病菌的方法,根据无乳链球菌16S rRNA基因、金黄色葡萄球菌NUC耐热基因、绿脓杆菌ETA基因序列并参考文献各合成一对特异性引物,通过对PCR反应各项参数的调整优化,建立多重PCR检测体系,并同时进行灵敏性试验和特异性试验。结果显示:该检测方法可以同时扩增出无乳链球菌270 bp、金黄色葡萄球菌153 bp和绿脓杆菌375 bp的特异性片段以及细菌16S rRNA 1 500 bp的通用片段,而对于其他的6种病原菌只能扩增出1 500 bp的通用片段,具有较强的特异性。三种特异性引物扩增条带与GenBank上的细菌基因序列同源性为99%。增菌培养24 h,该体系对无乳链球菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌的最低灵敏度分别为8×10⁴、4×10⁴、1.5×10⁵ CFU·mL^-1。本研究建立的检测方法能够完成无乳链球菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌的快速检测,对于生产上奶牛隐性乳房炎的鉴别诊断和快速检测具有重大意义。     

奶牛乳房炎的发生、分类与防治措施

乳房炎是奶牛经常发生的疾病,是造成奶牛生产经济损失的重要原因之一。奶牛业发达的美国现在有1100万头泌乳牛,患有隐性乳房炎的达50%。我国北京、上海等地调查,隐性乳房炎发病率在60%左右,2003年东北农业大学在哈尔滨郊区进行了隐性乳房炎的调查,发病率高达75%,造成的损失每头患病牛每年1526.25元。乳房炎的病原体有80～130多种,其中主要的病原为无乳链球菌、停乳链球菌、金黄色葡萄球菌、霉形体、乳房链球菌、大肠杆菌等。奶牛乳房炎分为急性型、慢性型和隐性乳房炎。急性型乳房炎特征是乳房红、肿、热、硬、痛,乳汁显著异常,奶量减少,体…     

奶牛隐性乳房炎的发生规律及其致病菌的分离鉴别与药物敏感性试验

本文对内蒙古大黑河奶牛场的泌乳牛群进行隐性乳房炎的检测，及其致病菌的分离鉴别与药物敏感试验，其结果：①共检测泌乳牛283头次1078个乳区，隐性乳房炎的头阳性率为61．84％，乳区阳性率为32．28％，并且其发生与管理、挤奶卫生及其程序、泌乳期、年龄、胎次有很大关系；②致病菌的总检出率为92．31％，其主要病原菌为金黄色葡萄球菌，无乳链球菌和大肠杆菌，分别占总检出率的41．66％、20．83％和16．67％。③对所检出的病菌，一些新药物敏感性较好，而一些常用药物效果较次。     

奶牛隐性乳房炎检测与防治

对奶牛隐性乳房炎的发病原因进行了调查,并选用了CMT(加州乳房炎)法对316头泌乳奶牛的1264个乳区进行隐性乳房炎检测。结果表明:隐性乳房炎发病头数为89头,奶牛阳性率为28.2%,患病乳区246个,乳区阳性率为19.5%。在此基础上总结出了奶牛隐性乳房炎的综合防治措施。     

简述奶牛乳房炎的防治

1病因 引起乳房炎的主要原因是牛舍不卫生,挤奶不卫生、不规范,乳头损伤等多种因素导致的细菌感染。根据实际发病奶牛的调查统计,引起乳房炎的病原主要有金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、停乳链球菌、乳房链球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、化脓杆菌、产气荚膜杆菌等。     

新疆垦区奶牛乳房炎致病菌的调查

本试验选取新疆垦区7个试验牛场,经临床调查和试剂诊断,检测奶牛712头,采集奶牛乳房炎阳性乳样314份．其中,奶牛隐性乳房炎阳性检出率平均为36．3％,临床性奶牛乳房炎为16．7％．采集阳性奶样经实验室分离鉴定,革兰氏阳性菌仍是引起奶牛乳房炎的主要致病菌,但金色葡萄球菌已基本取代链球菌成为主要的致病菌,其检出率为78．98％．另外,常见环境性致病菌如沙门氏菌、大肠杆菌已明显减少,检出率仅为21．1％和9．24％．相反,绿脓杆菌和蜡样芽孢杆菌的检出率明显增加,其检出率为5．41％和11．15％,而且绿脓杆菌和隐球菌已经引起临床性乳房炎的爆发,其中隐球菌已经成为造成顽固性乳房炎的又一种新型病原。     

奶牛隐性乳房炎乳房链球菌巢式PCR检测方法的建立

为研究巢式PCR检测奶牛隐性乳房炎链球菌的灵敏度,以本实验室从新鲜奶样中分离并经过生理生化鉴定的乳房链球菌、无乳链球菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌为研究对象,提取细菌DNA,采用巢式PCR技术,根据细菌16S rRNA序列保守区设计通用引物进行第1次PCR扩增,再在乳房链球菌16S rRNA保守区内的可变区设计特异引物对4种病原菌进行第2次PCR检测。结果表明：巢式PCR技术能检测出乳房链球菌16S rRNA保守区的可变区序列,与生理生化鉴定结果一致。该方法能快速有效检测出奶牛隐性乳房炎乳房链球菌。     

奶牛乳房炎无乳链球菌培养基的筛选及影响因素研究

[目的]筛选制备奶牛乳房炎疫苗生产菌株的无乳链球菌最佳培养基。[方法]将培养好的无乳链球菌接种于舍不同浓度葡萄糖的改良肉汤、优化培养基和THB培养基中,培养过程中补加NaOH调节pH值,观察不同处理对无乳链球菌生长情况的影响。[结果]无乳链球菌在优化培养基中生长良好,其次为THB培养基,改良肉汤不适合无乳链球菌生长。无乳链球菌在含10g／L葡萄糖的优化培养基中生长最好。在培养过程中的对数生长期内补加NaOH,调节pH值,能明显提高细菌的产量,并能延长其对数生长期。[结论]该研究为奶牛乳房炎多联苗的深入研究奠定了基础。     

奶牛隐性乳房炎检测方法的研究进展

国家乳房炎委员会根据乳房和乳汁有无肉眼可见变化,将奶牛乳房炎分为临床型和隐性型(亚临床型)两种类型.临床型乳房炎有明显的临床症状,易于被发现;而隐性型由于没有明显症状,不易被检出.     

奶牛隐性乳房炎早期检测试剂的比较

本试验对2种奶牛隐性乳房炎早期监测试剂进行试验比较,筛选适合本地条件的监测试剂,以有助于对奶牛隐性乳房炎进行早期诊断预防。     

奶牛乳房炎的防治

奶牛乳房炎是危害奶牛业的主要疾病之一，它是由多种病原微生物引起的一种局部炎症。在细菌病原中，以金黄色葡萄球菌、链球菌、大肠杆菌、克雷伯氏杆菌、绿脓杆菌等最多。奶牛乳房炎分临床型乳房炎和隐性乳房炎两种，是奶牛泌乳期最多发的一种乳房疾病。     

奶牛乳房炎病原分离鉴定与分析

本试验对吉林地区两家大型乳业集团奶牛乳房炎病牛乳样进行分离鉴定,8份乳样共分离到62株菌,其中含51株4种主要病原菌。4种病原菌不同临床型的比例是：金黄色葡萄球菌占36.36%、大肠杆菌占9.09%、无乳链球菌占27.27%、乳房链球菌占9.09%;隐性型中金黄葡萄球菌占38.89%、大肠杆菌占27.28%、无乳链球菌占11.11%、乳房链球菌占11.11%。     

奶牛乳房炎葡萄球菌的分离鉴定及耐药性检测

【目的】了解引起奶牛乳房炎的最主要病原菌葡萄球菌的耐药性,为奶牛乳房炎的防治提供参考依据。【方法】于2006~2007年在泰安地区5个规模化奶牛场,采集128份临床乳房炎奶牛乳样,用传统的细菌分离、培养和生化鉴定方法,对其中的葡萄球菌进行了分离,用K-B纸片扩散法对葡萄球菌的耐药性进行了检测调查。【结果】本次调查中共分离到29株葡萄球菌,其中金黄色葡萄球菌14株(14/29,47.4%),产色葡萄球菌3株(3/29,10.3%),木糖葡萄球菌、腐生葡萄球菌、松鼠葡萄球菌、表皮葡萄球菌和人葡萄球菌各2株(2/29,6.9%),头葡萄球菌和模仿葡萄球菌各1株(1/29,3.3%);葡萄球菌对头孢拉定和阿米卡星高度敏感,对临床上常用的林可霉素、红霉素、四环素、复合磺胺均存在不同程度的耐药性。金黄色葡萄球菌对万古霉素的平均抑菌圈直径为19.1 mm,凝固酶阴性葡萄球菌对万古霉素的平均抑菌圈直径为20.3 mm。【结论】金黄色葡萄球菌在分离葡萄球菌中仍占主导地位,万古霉素对葡萄球菌具有较强的体外抗菌活性,未发现耐药株。     

奶牛隐性乳腺炎病原菌的分离鉴定

从2002年10月起，应用LMT从西安及其周边地区184个乳区的1000头奶牛中抽取了48头，进行奶牛隐性乳腺炎的调查及病原菌的分离鉴定。结果西安及其周边地区患隐性乳腺炎奶牛占总头数的66．7W，患隐性乳腺炎乳区占总乳区的35．4％。4个乳区全阳性者占15．2％。共检出细菌67株，其中金黄色葡萄球菌占总检出菌41．8％。链球菌占总检出菌29．9％。G^ 杆菌与G^-杆菌各3株，分别占总检出菌4．5％。     

奶牛隐性乳房炎调查及病原分离鉴定

对信阳市奶牛场、奶牛养殖小区和个体奶牛户进行隐性乳房炎的流行病学调查以及致病菌的分离鉴定,结果隐性乳房炎的发病率为51.81%,个体饲养的奶牛隐性乳房炎阳性率高达68.49%;从12份被检乳汁中共分离出87株细菌,其主要致病菌为葡萄球菌、无乳链球菌和大肠杆菌。     

哈尔滨地区奶牛隐性乳房炎病原菌的分离鉴定

通过BMT法、乳汁pH检验法和体细胞直接计数法等方法相结合,对哈尔滨市3个大型奶牛场、10户奶牛养殖户选取的1 000头奶牛,4000个乳区进行隐性乳房炎的流行病学调查,以及致病菌的分离鉴定.结果表明,其中隐性乳房炎的发病率为47.7%(477/1 000);乳区发病率为27.3%(1092/4000),从477头的隐...     

奶牛隐性乳房炎多重PCR检测方法研究

[目的]建立一种快速、准确和特异性强的奶牛隐性乳房炎检测方法。[方法]采用多重PCR从基因水平上对70份临床疑似奶牛隐性乳房炎感染样本进行检测。[结果]多重PCR方法检测隐性乳房炎阳性样品数为58份,阳性检出率为82.5%;传统生化方法检测阳性样品数为53份,阳性检出率为75.5%,两者的阳性符合率为92%。[结论]成功地建立了一种快速、特异性强的奶牛隐性乳房炎多重PCR检测方法。     

基于PCR技术对奶牛乳房炎主要致病菌的检测

该文针对引起奶牛乳房炎的4种主要致病菌（大肠杆菌、金黄葡萄球菌、无乳链球菌、肺炎克雷伯氏菌）建立了PCR检测技术,采集奶牛乳房炎病原菌样本并进行菌落的筛选和鉴定,从鉴定出的葡萄球菌、链球菌、大肠菌和假单胞菌中提取DNA,通过比对基因序列,筛选出具有高度保守性的基因片段作为PCR的引物,设计PCR反应体系,对提取的DNA进行扩增。之后进行琼脂糖凝胶电泳,检测PCR产物的大小和数量。对PCR产物进行序列分析和比对,进一步确认其种属。结果显示该PCR检测方法可以特异性检测出这4种病菌,并对送检的30份临床乳样检测中阳性检出率高于细菌分离检测,证明检测方法在实际应用中的可靠性和有效性。     

奶牛乳房炎主要致病菌在牛奶中的分布

[目的]观察奶牛乳房炎主要致病菌在牛奶中的分布情况。[方法]在牛奶中添加一定量的乳房炎致病菌金黄色葡萄球菌或大肠杆菌,于4℃分别静置8、12和24 h,牛奶被分割成上、中、下3等份。采用平板菌落计数法测定各部分牛奶中的细菌数。[结果]两种致病菌菌落数在牛奶中从下到上呈现上升趋势,且上部牛奶中的菌落数显著高于中、下部（P〈0.001）,中部与下部差异不显著。[结论]奶牛乳房炎致病菌经乳头管侵入后可以随牛奶中的脂肪滴上浮,进而侵入到乳腺的深层组织。     

奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌凝固酶基因型研究

 【目的】了解上海和贵州地区引起奶牛乳房炎的金黄色葡萄球菌凝固酶基因型情况,为奶牛乳房炎的防治提供理论依据。【方法】利用16S rRNA保守序列设计引物,PCR扩增鉴定金黄色葡萄球菌,并利用凝固酶基因及其酶切产物多态性对分离鉴定出的金黄色葡萄球菌进行了凝固酶基因分型。【结果】共鉴定出78株金黄色葡萄球菌,有74株金黄色葡萄球菌扩增凝固酶基因片段,分为5个基因型和两个亚型。PCR 1型为贵州地区优势基因型,PCR 3型为上海地区优势基因型。【结论】两地区各基因型菌株分布比例有显著的地域性差异,这与两地区地理环境和养殖水平差异对病原流行传播的影响有关。