鸡源大肠杆菌O38、O53及O75分离株外膜蛋白型的研究(英文)

[目的]研究鸡源大肠杆菌血清型O38、O53及O75分离株的外膜蛋白型。[方法]以8株不同血清型鸡致病性大肠杆菌为试验菌株,采用超声波裂解和N-十二烷基肌胺酸钠对其进行外膜蛋白(OMP)的提取,提取产物经SDS-PAGE电泳检测后,根据OMP型模式图确定其OMP型。[结果]3个血清型的8株大肠杆菌外膜蛋白共分为3个型。其中2株O75血清型大肠杆菌的外膜蛋白分别为OMP-I型和OMP-II型,1株O53血清型大肠杆菌的外膜蛋白为OMP-II型,5株O38血清型大肠杆菌的外膜蛋白分为OMP-I型和OMP-III型。[结论]该研究结果表明,同一血清型的大肠杆菌菌株外膜蛋白可能属于完全不同的OMP型,血清学上毫不相关的分离株之间的外膜蛋白却可具有相同的OMP型。同一血清型的分离株的外膜蛋白之间可发生遗传分化,而不同血清型的分离株的外膜蛋白之间也可具有不同程度的遗传相关性。     

16省市禽源性大肠杆菌O18和O78的外膜蛋白型

经对我国16个省市、自治区分离到的110个禽病原性大肠杆菌O18和O78分离株的外膜蛋白型(OMP型)的测定,结果表明,这些分离株共产生了4个OMP型,56个O18分离株可分为3个OMP型,54个O78分离株出现了4个OMP型,其OMP1～3型为二者所共有.     

布鲁氏菌L7/L12、OMP31基因的克隆、测序及免疫原性分析

为研制鹿布鲁氏菌病工程疫苗,根据已发表的布鲁氏菌核糖体蛋白L7/L12、外膜蛋白OMP31基因设计两对引物进行扩增,PCR产物连接pGEM-Teasy载体,转化DH5α后测序,并进行基因分析。结果从布鲁氏菌疫苗株中克隆出L7/L12和OMP312个目的基因,同源分析L7/L12达97.1%,OMP31达100%,免疫原性分析可作为免疫优势抗原。     

培养及提取条件对迟缓爱德华菌外膜蛋白的影响

提取迟缓爱德华菌（Et)外膜蛋白（OMP），经SDS-PAGE分析发现，在不同培养温度、时间、pH值及不同培养基上OMP图谱无明显差异，主条带是35000和40000。但在铁限制环境下，增加了高分子区域带98000，93000，75800及72400，而45000条带变细变浅。用去污剂Triton X-100和Sackosyl抽提OMP，条带基本相似，后者主条带更浓密。用SDS抽提OMP，则仅有35000条带。将OMP样品分别在37，50，70，90及100℃加热5min后点样，45000条带持续出现，35000在70℃以上开始出现，在90℃和100℃浓集，提示35000条带是热修饰微孔蛋白。     

猪胸膜肺炎放线杆菌外膜蛋白基因（0MP-1）的克隆、表达及其ELISA方法的建立

猪传染性胸膜肺炎由猪胸膜肺炎放线杆菌（APP）引起,是猪最重要的呼吸道传染病之一。通过筛选APP3～8kb随机基因组文库,获得1株阳性克隆。测序拯救质粒得到其DNA序列,通过BLAST分析确定此片段为APP外膜蛋白基因,预计成熟蛋白质的分子量为48．766kD。根据序列设计特异性引物,用PCR扩增该基因,分子克隆表达该外膜蛋白。Western blot结果表明,该蛋白与APP康复期血清发生反应。纯化该重组蛋白,并将其作为抗原包被ELISA酶标板,对已知阳性血清、阴性血清和临床送检血清样品进行ELISA检测,为最终建立APPELISA检测方法奠定了基础。     

1、2型鸭疫里默氏菌外膜蛋白分析

采用超声波裂解和超速离心法提取30株鸭疫里默氏菌(Ra,1型和2型各15株)的外膜蛋白(OMP),经SDSPAGE凝胶电泳分析,以上2个血清型Ra的OMP均由13个蛋白多肽组成,其分子质量大小为20-100ku,相同血清型的电泳图谱相似,不同血清型的电泳图谱差异较大.经软件分析,1型RaOMP的主要条带有5条,其分子质量分别为95.0、87.7、73.2、55.4、49.8ku,占OMP总量的60.1%;2型RaOMP的主要条带有4条,其分子质量分别为95.5、53.1、50.0、22.4ku,占OMP总量的62.6%.2个血清型菌株有10个蛋白多肽的分子质量大小相似,但含量不同,另有3个蛋白多肽的分子质量差异明显.     

嗜水气单胞菌的研究进展

简要回顾和总结了气单胞菌的分布、分类地位、分离鉴定和生长条件等方面的研究情况,并概述嗜水气单胞菌的外膜蛋白（OMP）、胞外分泌物（ECP）等致病因子、诊断技术及疫苗开发方面新的研究成果。     

产色素温和气单胞菌的特性及其外膜蛋白型研究

[目的]研究产色素温和气单胞菌的致病机理。[方法]从不同来源的病鳖和病鳗体内分离到4株产生棕色色素温和气单胞菌,并采用平板法进行检测。[结果]对鲫鱼胸基部注射9×108cfu/ml菌悬液0.4ml后,BA10、BA15和BA16株对鲫鱼的致死率在33.3%以上,M1株对鲫鱼无致死性。采用超声波破碎-SI法提取外膜蛋白(OMPs),SDS-PAGE电泳结果显示,4株温和气单胞菌的外膜蛋白相对分子质量范围在20.1～66.2kDa,其中1个鳗鱼分离株M1株属OMP1型,由8条主要蛋白带组成;其余3个鳖源分离株BA10、BA15和BA16株属OMP2型,由9条主要蛋白带组成。[结论]产色素与致病性无相关;4株产色素温和气单胞菌之间存在共同抗原;产色素温和气单胞菌的OMP型可能与菌株来源有关。     

牛坏死杆菌43K OMP多克隆抗体的制备

为了评价牛坏死杆菌外膜蛋白43K OMP的免疫原性,试验利用大肠杆菌原核表达系统对牛坏死杆菌43K OMP基因进行表达,纯化目的蛋白免疫兔,制备牛坏死杆菌43K OMP多克隆抗体,并对其进行鉴定。对基因序列进行预测分析后,针对大肠杆菌稀有密码子优化合成该基因序列,克隆至pET-32a原核表达载体上,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达及镍柱进行纯化,获得重组蛋白大小约为59 ku。重组蛋白经Western blotting鉴定后免疫兔,制备多克隆抗体。Western blot检测牛坏死杆菌43K OMP多克隆抗体与43K OMP重组蛋白具有很好的免疫原性。研究成功制备了牛坏死杆菌43K OMP多克隆抗体,为以43K OMP蛋白为基础的疫苗研究奠定基础。     

产色素温和气单胞茵的特性及其外膜蛋白型研究

[目的]研究产色素温和气单胞茵的致病机理.[方法]从不同来源的病鳖和病鳗体内分离到4株产生棕色色素温和气单胞茵,并采用平板法进行检测.[结果]对鲫鱼胸基部注射9x108cfu/ml菌悬液0.4ml后,BA10、BA15和BA16株对鲫鱼的致死率在33.3%以上,Ml株对鲫鱼无致死性.采用超声波破碎-Sl法提取外膜蛋白(OMPs),SDS-PAGE电泳结果显示,4株温和气单胞茵的外膜蛋白相对分子质量范围在20.1～66.2 kDa,其中1个鳗鱼分离株Ml株属OMPI型,由8条主要蛋白带组成;其余3个鳖源分离株BA10、BA15和BA16株属OMP2型,由9条主要蛋白带组成.[结论]产色素与致病性无相关;4株产色素温和气单胞菌之间存在共同抗原;产色素温和气单胞菌的OMP型可能与茵株来源有关.     

鸡胰多肽、猪胰多肽的提取、纯化和鉴定研究

本实验利用磷酸钙吸附法从猪胰脏、鸡胰脏中分别得到了鸡胰多肽(APP)、猪胰多肽(PPP)粗提液,用sphadex G-50柱层析脱盐后制备出了APP、PPP粗品;并用Folin-酚试剂法测得自制APP、PPP粗品的肽含量;用SDS-PAGE电泳法对自制APP、PPP粗品进行了鉴定。结果表明:用Folin-酚试剂法测得自制APP粗品的肽含量为:24.52 mg.g-1;PPP粗品的肽含量为:8.15 mg.g-1。从电泳图像可见,经Sephadex G-50层析后的APP、PPP纯度较高,APP和PPP的分子量在4.2KD范围内,与Kimmel等报道的结果以及市售APP纯品的分子量是一致的。     

竹束热处理对CS/APP自组装重组竹阻燃抑烟性能的影响

壳聚糖(CS)/聚磷酸铵(APP)层层自组装(LBL)是一种表面改性工艺,通过对竹束单元进行热处理,研究其对CS-TiO₂/APP自组装重组竹(BS)的阻燃抑烟性能的影响及协同关系。采用不同热处理温度(160、180℃)和处理时间(2、3、4 h)对竹束单元进行水蒸气保护的热处理,首先对不同的竹束特性进行研究,优选竹束热处理工艺条件,然后在竹束表面进行CS-TiO₂/APP自组装后制备重组竹,分析热处理对重组竹阻燃抑烟性能的影响及与LBL阻燃层的协同作用。结果表明,热处理后的竹束热稳定性提高,同时表面阻燃涂层增重率相比未热处理提高了27.0%,LBL后的极限氧指数较未热处理直接负载的提高了14.4%。综合不同热处理工艺下竹束的特性以及和负载LBL涂层的竹束阻燃效果,确定160℃下3 h为重组竹的热处理工艺条件。通过锥形量热测试,热处理后的BS(W-HT)重组竹较BS重组竹,燃烧热释放速率峰值pk-HRR降低了30.1%,产烟速率pk-SPR峰值降低了50.8%,热处理后的BS(W-HT)/CS-TiO₂/APP重组竹与B...     

猪胸膜肺炎放线杆菌16SrDNA基因的克隆及序列分析

为了阐明猪胸膜肺炎放线杆菌16S rDNA基因的遗传变异情况,选择猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)的16S rDNA基因设计引物,应用聚合酶链反应(PCR)扩增APP的16S rDNA基因的部分序列,将该产物克隆到pMDI8-T载体上,重组质粒通过菌落PCR鉴...     

聚磷酸铵对砖红壤和石灰性土壤上磷素吸附解吸行为的影响

以砖红壤和石灰性土壤为供试土壤,探索不同聚磷酸铵(APP)对土壤中磷吸附解吸的影响,为评价磷的有效性提供数据参考.在等磷等氮条件下,分别以APP1(以中聚为主)、APP2(以低聚为主)、APP3(聚合度分布均匀且高聚含量高)、MAP(磷酸一铵)、A-M(APP3和MAP以P2 O5质量比1:1的比例混合)、CK(空白对...     

APP-PER-MEL阻燃剂对竹粉/PP复合材料性能的影响

采用硅烷包覆型聚磷酸铵(APP)作为阻燃剂,对竹粉/聚丙烯（PP）复合材料进行阻燃改性,研究APP的用量对复合材料阻燃性能和力学性能的影响;基于APP的最佳用量,以APP、季戊四醇（PER）和三聚氰胺（MEL）作为膨胀型阻燃剂（IFR）,研究APP、PER和MEL的互配比例对复合材料阻燃和力学性能的影响。结果表明,随着APP用量的增加,复合材料的阻燃性能不断增强,但弯曲和拉伸强度下降。当APP用量为复合材料总质量的15%时,其综合性能较佳,与未阻燃复合材料相比,极限氧指数（LOI）由17.1%提高至21.5%,弯曲模量和缺口冲击强度（NIS）分别增强14.8%和32.2%,弯曲强度和拉伸强度分别降低9.3%和28.8%。当APP、PER和MEL的互配比例为3∶1∶1时,添加15% IFR的复合材料的力学性能总体增强,与未阻燃复合材料相比,弯曲强度、弯曲模量和NIS分别增强18.1%、20.0%和23.3%,仅拉伸强度降低10%。锥形量热仪和极限氧指数仪结果显示,IFR阻燃复合材料的热释放速率、热释放速率峰值和总热释放量分别降低56.7%、40.2%和30.5%;LOI提高至25.9%,复合材料的阻燃性能进一步改善,但是,总产烟量增大了16.7%,该IFR的添加对复合材料的持久抑烟效果不佳。     

二温式PCR检测猪传染性胸膜肺炎放线杆菌方法的建立与应用

为了探索简便、快速确诊猪传染性胸膜肺炎的方法,根据猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)apx IV基因序列,设计合成1对特异性引物,建立聚合酶链反应(PCR)检测APP的方法。采用该方法对APP和其他6种猪病病原核酸进行检测,结果只对APP扩增出与预期大小相符的422bp DNA片段,而对其他6种猪病病原核酸的扩增结果为阴性。该PCR最低可检出10pg的APP DNA。对送检的46份可疑病猪组织进行检测,结果有19份样品为阳性,27份为其他病原感染。     

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清5a型ApxⅣA全基因的序列测序及其分子特征

根据GenBank上公布的猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)血清型1型和血清型3型ApxⅣA基因全序列,设计了7对引物,对APP血清5a型毒株263株ApxⅣA基因全序列进行了分段PCR扩增和克隆。序列测定结果表明:该基因核酸序列全长5856 bp,比GenBank上公布的血清1型和3型的相应基因核酸序列分别长438 bp和1287 bp,与其核酸和氨基酸序列同源率均分别为95.5%和87.6%;与GenBank刚公布的血清5b型毒株L20株的核酸和氨基酸序列的同源性均为98.2%。生物信息学分析表明,该基因编码的蛋白具有较强的亲水性,共有66个抗原决定簇,存在较多的可能性功能位点。     

不同NAD含量条件下培养的猪胸膜肺炎放线杆菌对小白鼠致病性和免疫保护性的影响

将在含体积分数为0.050%、0.001%的尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)的LB培养基中培养的血清5型猪胸膜肺炎放线杆菌(APP),分别以3×109CFU.只-1的菌量对30日龄小白鼠进行接种,观察不同NAD含量条件下培养的APP对小白鼠致病性的影响.结果表明:用0.001%NAD培养的血清5型APP对小白鼠的致病性较强,小白鼠接种APP后,多数表现肺脏严重出血;而用0.050%NAD培养的血清5型APP接种小白鼠后,只有少数小白鼠肺脏出血严重,多数表现为轻度出血.将上述条件培养的APP按常规方法制备油乳剂灭活疫苗,分别在第3周龄和第6周龄对小白鼠进行免疫接种,在2免后3周对免疫的小白鼠进行同源攻击,并对免疫前后小白鼠的抗体效价进行检测.结果表明:分别用0.050%、0.001%NAD培养的血清5型APP制备的灭活疫苗,对小白鼠的保护率差异不显著;用0.001%NAD培养的血清5型APP制备的灭活疫苗免疫小白鼠,用血清5型APP同源攻击后,发病的小白鼠肺脏出血较轻,而用0.050%NAD培养的疫苗免疫小白鼠攻毒后,发病的小白鼠肺脏出血严重.可见在不同NAD含量条件下培养的APP对小白鼠的致病性和免疫保护力不同.     

鲁西地区猪胸膜肺炎放线杆菌流行病学调查

[目的]为调查鲁西地区猪传染性胸膜肺炎病的流行状况,建立了检测胸膜肺炎线杆菌（Aetinobacillus pleuropnemunoniae,APP）的PCR方法。[方法]利用PCR方法对186头病死猪的病变组织及545头无临床症状健康猪群进行了APP的流行病学研究。[结果]186份病料中APP阳性率占43．0％（80／186）,545份猪血清APP阳性占7．9％（43／545）。[结论]该PCR方法可作为APP临床诊断的重要手段之一。     

纳米SiO2 -APP 对木塑复合材料界面特性及力学性能的影响

用聚磷酸铵(APP)与阻燃协效剂纳米二氧化硅(SiO2 )制备了阻燃型木塑复合材料,并利用FTIR、SEM 和力学 性能测试仪,探讨纳米SiO2 的添加量(2%、4%、6%)和APP 的添加量(8%、10%、12%)对木塑复合材料的界面性 能和力学性能的影响。结果表明:1)当纳米SiO2 添加量为2% ~6%、APP 添加量为8% ~10%时,两者可以均匀地 分布在木塑复合材料的孔隙中,并且纳米SiO2 可以与木质纤维形成Si—O—C 结合,改善复合材料的界面性能;但 是,APP 添加量增加至12%时,纳米SiO2 和APP 之间会发生团聚,降低了复合材料的性能。2)当纳米SiO2 添加量 为2% ~6%、APP 添加量为8% ~10%时,木塑复合材料的拉伸强度和弯曲强度均比未添加纳米SiO2 、APP 的有所 增加,拉伸断裂伸长率基本保持不变,冲击强度降低。通过双因素方差分析可知,纳米SiO2 、APP 的添加量以及两 者之间的交互作用对拉伸性能、弯曲性能无显著影响,但APP 的添加量以及两者之间的交互作用对冲击强度有显 著影响。