猪囊虫病免疫诊断技术的研究进展

猪囊虫病是一种重要的人畜共患寄生虫病,尤其是对人的危害更大,该病呈世界性分布,以发展中国家为多,人主要是食入带有猪囊尾蚴的不熟的猪肉成为猪带绦虫患者,通过自身体内,自身体外或经口食入虫卵污染的食物和水三种感染方式成为猪囊虫病患者。而猪的感染则是食入患猪带绦虫病人粪便污染的饲料、牧草和饮水,在流行地区．该病在猪和人之间形成循环链。据不完全统计,在我国有15个省、市和自治区有囊虫病流行,成虫感染的患者中,平均14．9％（2．3～25％）有囊虫寄生,而且在某些地区感染较高,对人群构成严重的危害[1,3]。目前很多…     

猪囊虫抗原基因TS21的真核表达

构建了猪囊虫抗原基因TS21的VR1020真核表达载体，以菌落原位杂交法筛选获得正确插入的重组质粒，用RNA印迹（Northern blotting)和ELISA检测插入片段的转录及其翻译表达产物。结果，VTS21在真核细胞中能够转录TS21基因的mRNA；兔抗猪囊虫超免疫血清可识别其蛋白表达产物，表明VTS21能正确表达猪囊虫抗原蛋白。     

猪囊虫病免疫预防研究进展

猪囊虫病免疫预防研究进展翟春生（南京军区军事医学研究所，南京２１０００２）猪囊虫病的免疫预防研究是一个难度很大的课题。寄生虫的初次感染可使宿主获得对同种寄生虫再次感染的抵抗力。这种被称为“带虫免疫”的现象提示人们进行寄生虫病免疫预防的可能性。但是，仿...     

囊虫病免疫诊断技术和免疫预防研究进展

猪囊虫病是由猪带绦虫 (Ｔａｅｎｉａｓｏｌｉｕｍ)的幼虫寄生于人和猪体内引起的人兽共患寄生虫病 ,在我国广泛流行 ,本病的诊断与预防是国际上极为重视而未能解决的问题。为防制该病 ,国内外学者进行了许多研究 ,已有较多的研究报道 ,本文对近年来囊虫病的免疫诊断技术和免疫预防研究进展作一概要介绍。1　免疫诊断技术对囊虫病的诊断 ,从宿主体内检出抗原比血清中或脑脊液 (ＣＳＦ)中检测到抗体更有说服力 ,抗原在机体内出现早 ,容易早期诊断 ,早诊断早治疗对于提高治愈率非常重要。1 1　酶联免疫吸附试验 (ＥＬＩＳＡ)　ＥＬＩＳＡ是 2 …     

应用重组抗原预防猪囊虫病

应用２种重组抗原分别制成免疫刺激复合体疫苗各接种试验猪２次,间隔１４ｄ。第２次接种后７ｄ用有钩绦虫卵感染（２×１０４个／头）。感染后１１６ｄ,９头对照猪共发现１０６７个囊虫,平均１１８．６个／头;免疫Ａ组８头试验猪共发现囊虫５１０个,平均６３．８个／头,减虫率为４６．２％;免疫Ｂ组９头试验猪共发现囊虫８３个,平均９．２个／头,减虫率为９２．２％。在免疫Ｂ组猪体内发现的囊虫发育不全,虫体小,囊液少,囊膜较厚、不透明,呈乳白色,囊虫组织呈退行性病理变化,并伴有大量炎性细胞浸润。免疫动态监测发现,试验猪抗囊虫感染的免疫力主要取决于细胞免疫,而与体液免疫无关。试验猪血清循环抗原（ＣＡ）检测结果与剖检所见囊虫数量密切相关（Ｐ＜０．０１）。由此认为,ＣＡ检测是简便易行、效果可靠的现场实用技术。     

猪囊虫循环抗原的特异性

用兔抗囊虫粗抗原IgG,以ELISA双抗体夹心法检测病、健猪血清,阳性率分别为10.68％和5.30％,两者之间无显著差异;经免疫复合物解离处理后,病、健猪血清的阳性率分别为35.29％和2.3％,两者之间差异显著。琼脂凝胶双扩散试验查明,某些病、健猪血清中存在一种共同的抗原成分,导致交叉反应。这种成分不易被3.5％PEG沉淀。病猪血清中还存在一种特异抗原成分,其反应性强,主要以免疫复合物的形式存在。     

猪囊尾蚴循环抗原和排泄分泌抗原研究进展

猪囊尾蚴病是由带科(Taeniidae)带属(Taenia)的猪带绦虫(有钩绦虫)(Taenia solium)的幼虫-猪囊尾蚴(Cysticercus cellulosae)寄生于猪的肌肉和其他器官中而引起的一种人畜共患寄生虫病,俗称囊虫病。该病主     

囊虫猪治疗后循环抗原的动态观察

对21头囊虫病猪治疗前后血清中循环抗原(CA)的动态作了观察,发现治疗后10天内CA含量比治疗前增加,而后逐渐减少,15或30天后明显减少;未经治疗的及未治愈的病猪血清中CA含量无明显变化,此外,治疗后血清中CA含量见有明显减少的时间与治疗的血清的CA效价有关,原效价低者治疗后15天即见有明显减少,而原效价高者需30天后才见明显减少。     

猪囊尾蚴T24基因的克隆与表达

采用RT—PCR方法扩增猪囊尾蚴T24免疫原基因，将扩增产物与pGEM—Teasy载体连接，重组质粒经PCR、酶切鉴定后进行测序；构建T24基因的pGEX-4T-1原核表达载体，经IPTG诱导表达后，进行SDS-PAGE、Western—blotting；用所表达的蛋白免疫小鼠，经ELISA检测血清抗体，验证其免疫原性。结果显示，所克隆的T24基因片段长716bp，含有1个678bp的开放阅读框，其编码226个氨基酸，与已报道的猪囊虫T24基因核苷酸序列同源性为100％；表达的融合蛋白大小为40ku，并能被猪囊虫阳性血清识别；免疫小鼠在免疫1周后即可检测到血清抗体，第30d达到较高水平，表明该融合蛋白具有较好的免疫原性。     

猪囊尾蚴抗原基因Ag1V1的克隆及其序列分析

根据NCBI上已知序列设计引物,利用RT-PCR技术从猪囊尾蚴中成功克隆了低分子量抗原基因Ag1V1,同源性和种系发育分析结果显示,河南分离株Ag1V1基因的核苷酸序列和预测氨基酸序列与日本分离株同源性为100％和98.9％,说明Ag1V1蛋白基因具有一定的保守性;通过生物信息学软件对其蛋白二级结构、疏水性及抗原表位等方面的预测,认为其有望成为诊断或免疫用抗原.     

猪囊尾蚴排泄分泌抗原Ts8B2基因的克隆、表达及纯化

利用RT-PCR技术克隆了猪囊尾蚴排泄分泌抗原Ts882蛋白基因,测序结果表明：序列长度为270bp,包含258bp的编码区,编码85个氨基酸,与GenBank中西班牙分离株的核苷酸和氨基酸序列的同源性均为99％;将该基因成熟肽部分亚克隆至原核表达载体pGEX-6p-1,转化大肠杆菌BL21（DE3）,IPTG诱导后,进行SDS-PAGE初步分析,在34ku位置有1条蛋白条带,与预期结果一致。通过GST亲和纯化获得了较高纯度的重组融合蛋白,Westernblot结果表明,纯化后的重组融合蛋白可与兔抗全囊囊尾蚴血清发生特异性反应。排泄分泌抗原Ts882的成功表达、纯化为进一步研究该蛋白在抗体检测中的应用奠定了基础。     

囊虫病猪循环抗原的研究(初报)

用琼脂凝胶双扩散试验发现了囊虫病猪的循环抗原,并用反向间接血凝技术作了检测。103份囊虫病猪血清琼扩试验对循环抗原的检出率为22.33％(23/103);反向间接血凝试验检出率为32.03％(33/103),其余70份呈阴性反应的血清经免疫复合物解离后,又有25份呈阳性反应,总检出率为56.31％(58/103)。     

猪囊尾蚴dUTPase的同源建模及分析

通过SWISS-MODEL服务器对猪囊尾蚴dUTPase（Cysticercus cellulosae dUTPase，CYdUT-Pase）进行同源建模，用SPDBV和DSViewer对模型进行修饰，模型经WHATIF服务器进行质量评估。对已知dUTPase的晶体结构分析后，推测CYdUTPase属于同源三聚体，通过SymmDock服务器进行CYdUTPase三聚物的分子对接，并与人dUTPase3D结构叠合。结果表明，建立的CYdUTPase3D模型是成功的，具有良好的真实性，CYdUTPase三级结构的预测为此酶的结构功能研究和新型抗囊虫药物的开发奠定了基础。     

猪囊尾蚴基质金属蛋白酶-9在猪肌肉和脑组织的表达分布

应用免疫组化分析猪囊尾蚴基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达.用猪带绦虫卵1 mL(8万个/mL)灌胃20 d龄健康乳猪6头,于感染后40、80、120 d分别宰杀2头猪并取含囊尾蚴的肌肉及脑组织制作4μm厚石蜡切片,采用Envision二步法,观察不同时期寄生在肌肉及脑组织的猪囊尾蚴基质金属蛋白酶-9的表达.结果显...     

快速活检囊虫病猪

囊虫病猪肉是我国目前肉品检验的重点病种之一。在常规检验中,囊虫猪肉的检出主要靠宰后检验。如果猪龄较短,虫体的寄生密度小,则囊虫病猪的活体检查即宰前检验的检出率不高。但如果猪的饲养期较长,散养机会多,又在疫区饲养（人的有钩绦虫患病地区）,则感染囊虫的机...     

Effect of Cysticercus cellulosae on neutrophil function and death

Neutrophils, eosinophils and macrophages interact with invading parasites and naive hosts. The initial reaction of leukocytes is the generation of reactive oxygen species (ROS). The cytotoxic effects of extracts derived from intact Cysticercus cellulosae and from the scolex or membrane fractions on neutrophils were examined. DNA fragmentation of neutrophils was observed when cells were incubated with an extract from the intact metacestode; however, the addition of antioxidant enzymes to the incubation medium had a protective effect. The scolex and membrane extracts did not affect DNA fragmentation of neutrophils. Hydrogen peroxide production of neutrophils incubated with metacestode fractions from C. cellulosae increased by 190% (total extract), 120% (scolex) or 44% (membrane). An increase in antioxidant catalase activity (28%) concomitant with the increased production of ROS was observed in neutrophils incubated with metacestode fractions, which could be an attempt at self-protection. ROS production by neutrophils in the presence of the intact cysticerci extract did not alter phagocytosis. In contrast, the scolex and membrane fractions increased the phagocytic capacity of neutrophils by 44 and 28%, respectively. The results showed that the extract from intact C. cellulosae was toxic for neutrophils via ROS production, leading to DNA fragmentation and inhibition of phagocytic capacity, but neutrophils are able to protect themselves against oxidative stress by via catalase activity.