肠出血性大肠杆菌O157∶H7toxB基因的分片段克隆和表达

根据Gen Bank已有tox B基因全长序列,分别设计6对引物扩增tox B基因,克隆到质粒p GEX-4T-1,构建重组菌BL21(plys)(p GEX-4T-1-tox B),IPTG诱导表达重组蛋白质,用Western blot鉴定重组蛋白质免疫原性。tox B基因片段大小分别为1 531 bp、1 590 bp、1 609 bp、1 603 bp、1 525 bp和1 690 bp,重组蛋白质分子量分别为8.1×104、8.3×104、8.4×104、8.3×104、8.0×104和8.7×104。以兔源EHEC O157∶H7抗血清为一抗,Western blot分析结果显示6个重组蛋白质均具有良好的免疫原性。     

肠出血性大肠杆菌O157：H7检测方法研究进展

大肠杆菌O157:H7检测方法的研究是目前比较热门的话题,建立快速、准确的检测方法是临床快速诊断的重要内容.文章主要介绍了大肠杆菌O157:H7各种检测方法的特点及其研究进展.     

动物源性人兽共患细菌病防控生物新制剂的研究Ⅰ.分泌抗大肠杆菌O157∶H7单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

将E.coli O157:H7(EHEC-O157:H7)用甲醛灭活、超声破碎,免疫BALB/c小鼠,制备免疫脾细胞;与SP2/0骨髓瘤细胞融合后,获得7株分泌抗E.coli O157:H7单克隆抗体(mAbs)的杂交瘤细胞株,分别命名为F5、B8、E7、G9、G11、F1和C3,Ig亚类分别是IgG2aκ、IgG2aκ、IgG1κ、IgMκ、IgMλ、IgMκ和IgG2aκ.用间接ELISA检测,E7和F1细胞培养上清液的效价为1.6×103,腹水效价均为1×1011;C3、F5、B8、G9和G11细胞培养上清液的效价为1×10～2×102,腹水效价均为1×103.相加ELISA结果显示,F1、G9和G11 3株mAbs对应相同的抗原表位,而其它4株对应不同的抗原表位.用间接ELISA分析特异性,7株mAbs与某些其他血清型的大肠杆菌有交叉反应.Western blotting表明,C3、E7和F1 3株mAbs在蛋白分子量28×103处有特异性条带,而其它4株mAbs则未显示蛋白带.     

基于磁珠的细菌基因组DNA快速提取方法

[目的]为临床上大肠杆菌O157∶H7的快速检测提供参考。[方法]依据高盐离子浓度下多聚核苷酸与羧基修饰的磁珠表面可发生非特异性吸附,而蛋白、单糖、多糖和脂类等细胞成分不被吸附的原理,建立了一种以磁性微珠为载体的细菌基因组DNA纯化方法—磁性DNA纯化法。[结果]该方法可在7min内完成对大肠杆菌O157∶H7基因组DNA的高效富集与纯化;与德国进口同类试剂盒gene-MAG-DNA/Bacteria及AxyPrep细菌基因组DNA纯化试剂盒相比,该方法操作简单、耗时短、不需要使用离心机和有机试剂,且无需常规快速提取法的沸水浴等步骤,安全、快速、成本低,在临床、食品、环境病原体快速检测领域具有巨大的推广价值。[结论]该研究成功建立了一种细菌基因组DNA的快速提取方法。     

大肠杆菌O157:H7在部分市售鸡肉和鸡蛋中的污染状况调查

【目的】对广州市、江门市、东莞市、乌鲁木齐市、喀什市和博乐市的多家农贸市场采集的生鸡肉及鲜鸡蛋样本,了解部分市售的生鸡肉及鲜鸡蛋被大肠杆菌O157:H7污染的情况。【方法】样品经EC肉汤增菌、免疫磁珠富集后,用SMAC平板和MUG培养基进行初步筛选,再用rfb E和fli C基因对筛选后的可疑菌株做PCR检测,同时结合生化实验的方法进行符合性检验。【结果】所有的66份鸡肉和97枚鲜鸡蛋中均未检出大肠杆菌O157:H7。【结论】被检地市售的生鸡肉和鲜鸡蛋未被大肠杆菌O157:H7污染,食用时相对比较安全。     

肠出血性大肠杆菌O157∶H7 toxB基因缺失株的构建

为了明确肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli)O157∶H7大质粒pO157编码的蛋白质ToxB与O157∶H7在肠道黏附、定殖的关系,构建含有toxB基因同源臂的重组自杀性质粒pMEG375-BN-Kan-BC,转化SM10宿主菌获得重组SM10(pMEG375-BN-Kan-BC)。将SM10(pMEG375-BN-Kan-BC)与O157∶H7进行混合培养,通过同源重组,获得杂交toxB基因缺失株。用体外接种的HEp-2细胞和体内感染链霉素处理的小鼠,明确缺失株黏附定殖能力。经PCR和Western blot鉴定,toxB基因被卡那霉素(Kan+)选择标记基因表达盒所代替。O157∶H7(△toxB)生长特性与亲本株相比无明显差异。O157∶H7(△toxB)与亲本株相比,对HEp-2细胞的黏附能力降低了2倍。口服感染小鼠后,O157∶H7(△toxB)第3 d粪便排菌量仅为3.1×105 CFU,持续排菌11 d;而亲本株排菌量高达4.03×107 CFU,持续排菌时间超过14 d。     

肠出血性大肠杆菌O157:H7Intimin和Tir-Tccp蛋白质对小鼠的免疫保护性

为了研究不同浓度的肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7 Intimin和Tir-Tccp蛋白质对接受1010 CFUEHEC O157:H7小鼠的免疫保护作用,将Intimin和Tir-Tccp蛋白质和佐剂充分乳化后,通过皮下多点注射免疫小鼠,对照组注射等量的磷酸盐缓冲液.共免疫2次,间隔14d,末次免疫后14d...     

动物源性人兽共患细菌病防控生物新制剂的研究Ⅰ．分泌抗大肠杆菌O157：H7单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

将E．coli O157：H7（EHEC—O157：H7）用甲醛灭活、超声破碎,免疫BALB／c小鼠,制备免疫脾细胞;与SP2／0骨髓瘤细胞融合后,获得7株分泌抗E．coli O157：H7单克隆抗体（mAbs）的杂交瘤细胞株,分别命名为F5、B8、E7、G9、G11、F1和C3,Ig亚类分别是IgG2ak、IgG2aK、IgG1K、IgMK、IgMh、IgMK和IgG2aK。用间接ELISA检测,E7和F1细胞培养上清液的效价为1．6×10^3,腹水效价均为1×10^11;C3、F5、B8、G9和G11细胞培养上清液的效价为1×10～2×10^2,腹水效价均为1×10^3。相加ELISA结果显示,F1、G9和G113株mAbs对应相同的抗原表位,而其它4株对应不同的抗原表位。用间接ELISA分析特异性,7株mAbs与某些其他血清型的大肠杆菌有交叉反应。Westernblotting表明,c3、E7和F13株mAbs在蛋白分子量28×10^3处有特异性条带,而其它4株mAbs则未显示蛋白带。     

茯砖茶水提物对大肠杆菌感染小鼠的免疫调节作用

以肠出血性大肠杆菌O157∶H7感染的小鼠为模型,研究造模后按茯砖茶水提物剂量1、10、20 g/(kg·d)(分别记为低、中、高剂量茶汁组)连续灌胃10d后模型小鼠免疫功能的变化.结果表明,模型组和对照组的吞噬系数、血清溶血素水平和肠道黏膜上CD4+T、CD8+T淋巴细胞数均有显著性差异;中剂量茶汁组小鼠胸腺指数和高...     

猪尿液中盐酸克伦特罗(瘦肉精)检测方法比较试验

利用快速检测试纸条法、竞争酶标免疫法(ELISA)和气相色谱-质谱分析方法(GC-MS)分别对84份猪尿液样品进行盐酸克伦特罗检测。结果显示ELISA方法与气相色谱-质谱分析方法(GC-MS)符合率为100.0%,快速检测试纸条法与固相萃取-气相色谱-质谱分析方法(GC-MS)符合率为90.5%。     

猪尿液中盐酸克伦特罗(瘦肉精)残留量检测方法比较

利用快速检测试纸条法和竞争酶标免疫法(ELISA)分别对70份生猪尿样进行检测,再利用固相萃取-气相色谱-质谱分析方法(GC-MS)进行确证。结果表明:ELISA方法与固相萃取-气相色谱-质谱分析方法(GC-MS)符合率为100.0%,快速检测试纸条法与固相萃取-气相色谱-质谱分析方法(GC-MS)符合率为98.6%。     

泾县市场猪肉品质调查研究

[目的]了解泾县农贸市场猪肉品质状况。[方法]从安徽省泾县农贸市场共选取8头土种猪和杂交猪,分析其肉质性状。[结果]肌肉成熟后,杂交猪的肉色为2.9左右,低于土种猪。杂交猪和土种猪的pH值和滴水损失都在正常范围内。杂交猪的水分含量为71.62%,高于土种猪。杂交猪和土种猪的肌内kg脂肪含量均高于3.0%,达到理想值。肌内脂肪含量与大理石纹评分呈极显著正相关,相关系数为0.99。杂交猪的肌肉剪切力为3.80 kg,大于土种猪,说明我国地方猪肉嫩度小于外来猪,且含有我国地方猪基因频率越低的猪肉嫩度越大。[结论]滴水损失小、肌内脂肪适宜和水分含量低是地方猪种肉质的内在特性。     

Nisin·NaL对冷却猪肉中菌落总数变化的交互效应

将Nisin、NaL单独及联合应用于真空包装冷却猪肉中,通过测定菌落总数的变化来分析Nisin、NaL在贮藏过程中的交互效应。结果表明,单独使用Nisin、NaL均可显著抑制菌落总数的产生,且浓度越高抑菌效果越好;贮藏前期Nisin抑菌效果较好,贮藏后期3%NaL抑菌效果最好;Nisin、NaL联合应用比单独使用抑菌效果要好,而且两者在整个贮藏期间均显示显著的交互效应。     

猪肉制品冷藏中感官特性和挥发性物质变化的回归分析

【目的】探讨猪肉制品冷藏中感官特性和挥发性物质的变化及两者的关系。【方法】以荣昌猪和PIC猪背最长肌为材料,经不同温度的热处理后,在4℃条件下避光透氧冷藏,在第0、3和6天分别测定各样品感官特性、TBARS值和挥发性成分的变化。【结果】冷藏中各样品肉香味明显减弱而异味显著增加,一些脂肪氧化产物的含量和TBARS值也显著增加;偏最小二乘回归分析（PLS）发现,肉香味（Meat-F）、热异味（WOF-F）和TBARS值分别与31、23和8种挥发性成分显著相关,可分别以这些成分为自变量建立回归模型,对各样品的Meat-F、WOF-F与TBARS值进行很好的预测。【结论】猪肉制品冷藏中感官特性的变化主要是由一些挥发性成分在产品中浓度的变化引起的。     

市售鲜猪肉细菌的分离鉴定及其耐药性分析

为了解市售鲜猪肉的细菌污染状况及主要病原菌的耐药性,以便从源头上控制市售鲜猪肉的安全,甚至为细菌引发的食源性疾病的治疗提供参考依据,从遵义和安顺地区农贸市场采集24份鲜猪肉样本进行细菌分离鉴定及药敏试验。结果表明:鲜猪肉表层与深部细菌含量分别在(1.87～7.13)×105cfu/g和(1.0～1.3)×104cfu/g,分离鉴定的细菌有葡萄球菌、大肠杆菌、链球菌、芽孢杆菌、塔特姆氏菌、耶尔森氏菌、沙雷氏菌、不动杆菌、莫拉氏菌和假单胞菌。大肠杆菌和葡萄球菌均存在广泛的耐药性,对麦迪霉素、淋必治、氯洁霉素、灭滴灵、阿奇霉素、吡哌酸、洁霉素、复方新诺明、罗红霉素和先锋霉素IV的耐药性达100%。     

陕西省部分市县鱼肉蛋奶中汞含量的检测分析

用冷原子吸收法测定了陕西省部分市县的１４０条鱼、１０７份猪肉、１８０枚鸡蛋、１００份牛奶样品的汞含量。结果表明，鱼肉中汞含量为０．２２３３±０．２４７５ｍｇｋｇ－１，其中２９．３％的鱼样中汞含量超出国家卫生标准中汞允许量；猪肉、鸡蛋、牛奶中汞含量分别为０．００７３±０．００５４ｍｇｋｇ－１，０．００３８±０．００１７ｍｇｋｇ－１和０．００２４±０．０００７ｍｇｋｇ－１，均在国家卫生标准中汞允许量以内。说明环境中汞污染对人体健康的威胁，主要来自汞污染水中的鱼体内蓄积的高含量汞。     

真空包装肘花胀袋微生物的鉴定及验证

以正常和腐败的产品为材料研究引起真空包装肘花胀袋的微生物,将传统培养与分子生物学方法(16S r DNA序列分析和PCR-DGGE技术)相结合对分离纯化的微生物进行鉴定,并将分离到的细菌进行回接验证试验。结果表明,比较从正常和胀袋产品中分离纯化到的14株和18株菌发现,胀袋组中含有对照组没有的细菌。16S r DNA的分析结果显示这些菌株主要是芽孢杆菌[枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)]以及寡养单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia和Stenotrophomonas pavanii);而PCR-DGGE分析结果表明这些菌株主要是包括产气荚膜梭茵(Clostridium perfringens)在内的梭状芽孢杆菌(Clostridium sp.)和假单胞菌(Pseudomonas sp.),将分离到的细菌回接到样品中,产品即发生胀袋,可见,引起肘花胀袋的微生物是芽孢杆菌和寡养单胞菌。     

人参软腐病参根内若干生物化学变化

对人参软腐病参根组织和健根组织进行了多种有机物成分分析,结果表明,在病根中人参总皂甙、粗淀粉、总含糖量都减少,但脂肪酸、木质素、还原糠和16种氨基酸的含量比健参根增加。     

基于RFID和二维码的猪肉制品质量安全追溯平台的构建

以生猪养殖、屠宰加工产业链为基础,记录生猪在养殖、屠宰、加工、包装、检验、运输、销售等各个环节的数据,运用RFID和二维码技术,搭建自下而上的猪肉制品生产活动数据库,以实现猪肉制品的全链条溯源。