转Chi-Glu基因野罂粟植株卡那霉素筛选技术

为探索卡那霉素(Kan)抗性筛选在转基因野罂粟上的应用,以含有几丁质酶(Chi)和β-1,3-葡聚糖酶(Glu)的双价基因的T0代转基因野罂粟种子为试验材料,进行卡那霉素叶喷、叶片涂抹试验,筛选卡那霉素的最佳浓度;对T1代转基因植株进行卡那霉素筛选,并用PCR检验其阳性植株。结果表明:培养皿幼苗最佳叶喷浓度为50 mg/L;土培苗最佳叶喷和涂抹浓度为6.5g/L,连续叶喷或涂抹5d,每天1次。经卡那霉素筛选共获得12株转基因野罂粟植株,通过PCR检测,有4个株系已将Chi-Glu双价抗病基因整合进野罂粟的基因组中。     

利用卡那霉素筛选烟草转基因植株的技术研究

待供试材料转基因和非转基因云烟87烟株长至5~7片叶时,在第3片叶上连续5 d喷施400 mg/L的卡那霉素溶液,喷后2 d观察,结果非转基因云烟87烟株叶片全部产生黄色斑点,而带有卡那霉素抗性标记基因的转基因云烟87烟草叶片表现正常。利用此方法对转基因烟草T2代3个株系进行筛选,筛选出22株转基因烟草植株,并用PCR方法对此方法的准确性进行了验证,结果表明,此方法对转基因烟草是一种简单快速的筛选方法。     

3种筛选NPT-Ⅱ标记转基因油菜方法研究

为获得一种简便的筛选含有NPT-Ⅱ标记基因的转基因油菜种子的方法,对卡那霉素溶液叶片涂抹法、种子浸泡法以及卡那霉素MS培养基筛选3种方法进行研究.结果表明,3种筛选方法的最佳卡那霉素选择压为200 mg/L;涂抹叶片法4～5天可以明显识别植株对卡那霉素抗性与否,此法筛选到的4株植株PCR检测全部呈阳性,可靠性达100%;浸泡种子法2～3天可以明显识别植株对卡那霉素抗性与否,此法筛选到的5株植株PCR检测全部呈阳性,可靠性100%;MS培养基筛选法一般10天可以明显识别植株对卡那霉素抗性与否,此法筛选到20株植株,移栽后存活5株,PCR检测3株呈阳性,2株是假阳性植株,可靠性为60%.因此,可以认为卡那霉素涂抹叶片和浸泡种子两种方法是转基因油菜进行大规模、快速的筛选及后代的遗传分析的理想方法.     

普通白菜转基因选择剂的浓度筛选

用不同质量浓度的Basta和卡那霉素作为转基因选择剂,对普通白菜品种(品系)杭州油冬儿和75#幼苗进行处理,以确定筛选转基因植株的最佳浓度。结果表明,杭州油冬儿和75#对Basta敏感性几乎相同,喷施Basta溶液的最适质量浓度均为20 mg/L,且最佳喷施次数为7次;2个品种对卡那霉素略有差异,杭州油冬儿的最佳质量浓度为100 mg/L,75#则为75 mg/L。     

植物喷施灵对新疆杨生长效应的影响

[目的]为新疆杨幼苗培育提供理论依据。[方法]以清水对照,用3种浓度的植物喷施灵肥液(0.65、1.30、2.60 g/L)喷施一年生新疆杨扦插苗。测定处理前后植株的株高、地径。喷肥后3~5 d内,光合测定仪进行测定光合速率。[结果]经植物喷施灵处理后,新疆杨苗木的生长量都得到不同程度的提高。2.60 g/L植物喷施灵处理新疆杨株高净生长量最大为5.19 cm,地径的净生长量4.19 mm。植物喷施灵各处理均提高了新疆杨叶片的光合速率。2.60 g/L植物喷施灵处理明显缓和了新疆杨光合作用的"午休"现象。[结论]2.60g/L植物喷施灵处理促进新疆杨生长为最佳浓度。     

卡那霉素叶片涂抹法筛选转基因大豆植株的有效性

以吉林小粒1号大豆为材料进行卡那霉素梯度涂抹试验,确定卡那霉素筛选的最佳浓度和筛选临界观察时间,并在此基础上,对转基因大豆植株(含np tⅡ基因)分离后代进行卡那霉素涂抹检测和PCR检测,检验2种方法的符合度。结果表明,卡那霉素的最佳筛选浓度为500 m g/L,观察时间以3 d为宜;抗和高抗卡那霉素植株2种检测方法的符合度为90.8%,感和高感卡那霉素植株的符合度为87.1%。可见,卡那霉素叶片涂抹法完全可以用于大豆转基因植株的快速筛选。     

2甲4氯对罂粟 SOD、POD 酶活性及膜脂过氧化作用的影响

【目的】探索一种高效、快速、安全的灭杀罂粟的化学防除方法,为利用除草剂快速灭杀罂粟提供理论基础和技术依据。【方法】在罂粟花蕾期用不同浓度的2甲4氯对植株进行喷施,喷后连续采样4 d测定叶片相对含水量（RWC）、丙二醛（MDA）含量、质膜相对透性（RC）、超氧化物岐化酶（SOD）及过氧化物酶（POD）活性,研究各生理指标与处理浓度及处理时间的关系。【结果】随着2甲4氯浓度的升高,罂粟叶片POD、SOD活性和相对含水量随着喷药时间的延长呈下降趋势,在喷药后第4 d,8 g/L 2甲4氯浓度处理的罂粟叶片POD、SOD活性和相对含水量最小,活性最低;MDA含量和细胞质膜相对透性随2甲4氯浓度增加呈先升高后降低的趋势。【结论】1、2、4、8 g/L 2甲4氯浓度处理在喷后4 d左右均可有效灭杀罂粟植株,且浓度越高灭杀时间越短。在实际应用时需根据环境条件和时间要求,选择相应的药剂浓度。     

2甲4氯对罂粟SOD、POD酶活性及膜脂过氧化作用的影响

【目的】探索一种高效、快速、安全的灭杀罂粟的化学防除方法,为利用除草剂快速灭杀罂粟提供理论基础和技术依据。【方法】在罂粟花蕾期用不同浓度的2甲4氯对植株进行喷施,喷后连续采样4d测定叶片相对含水量（RWC）、丙二醛（MDA）含量、质膜相对透性（RC）、超氧化物岐化酶（SOD）及过氧化物酶（POD）活性,研究各生理指标与处理浓度及处理时间的关系。【结果】随着2甲4氯浓度的升高,罂粟叶片POD、SOD活性和相对含水量随着喷药时间的延长呈下降趋势,在喷药后第4d,8g/L2甲4氯浓度处理的罂粟叶片POD、SOD活性和相对含水量最小,活性最低;MDA含量和细胞质膜相对透性随2甲4氯浓度增加呈先升高后降低的趋势。【结论】1、2、4、8g/L2甲4氯浓度处理在喷后4d左右均可有效灭杀罂粟植株,且浓度越高灭杀时间越短。在实际应用时需根据环境条件和时间要求,选择相应的药剂浓度。     

花粉管通道法转基因棉花后代筛选鉴定

通过对棕色棉BC05叶片进行Kan浓度梯度涂抹实验,确定了Kan涂抹筛选的最佳浓度为3.0 g/L,最佳观察时间为涂抹第5天。对Kan抗性植株进行PCR鉴定表明,Kan涂抹筛选可基本准确的鉴别出转基因材料与非转基因材料,但目标基因是否成功整合还必须进行PCR鉴定,田间卡那霉素筛选结合PCR分子鉴定是转基因棉花后代大规模群体筛选的有效方法。     

甘蓝型油菜花柄遗传转化体系的创建

为获得转基因油菜植株,以甘蓝型油菜品种特选4号花柄为外植体,确定了不定芽分化最佳培养基为MS+6-BA 3.0mg/L+NAA 0.1mg/L,并进行了花柄外植体的转化试验,得到了抗卡那霉素(Kan)植株,并对影响转化的一些因素进行了研究。结果表明:卡那霉素对芽再生均具有很强的抑制作用,最佳筛选浓度为15mg/L;花柄外植体在MS+3mg/L 6-BA+1.0mg/L 2,4-D培养基上预培养72h时,经农杆菌(OD600≈0.4)侵染3min后共培养2d,获得了抗卡那霉素并通过PCR鉴定和GUS报告基因检测的转基因植株15株,遗传转化效率为5.19%。     

利用卡那霉素间接鉴定转基因抗虫棉的研究

研究了利用卡那霉素间接鉴定转基因抗虫棉的方法。结果表明,在棉花苗期使用8000mg/kg卡那霉素溶液处理子叶,或者在蕾期使用6000mg/kg卡那霉素溶液处理棉株顶部第2片展开叶,7～9d后非转基因棉株的叶片点液处出现黄色斑块,而转基因抗虫棉的叶片仍为正常绿色,从而简便有效地鉴别出转基因抗虫棉。经网室接虫测试和室内饲养生物学测试方法验证,该方法结果准确。     

2甲4氯对罂粟叶绿素含量及光合作用的影响

试验采用单因素随机区组设计,主要研究了除草剂2甲4氯56%可湿性粉剂对罂粟蕾期植株叶绿素含量(CCI)、光合速率(Pn)、气孔导度(Gs)和胞间CO2浓度(Ci)的影响,筛选出了2甲4氯灭杀罂粟的最适浓度。试验结果表明,不同浓度的2甲4氯均显著地影响了罂粟的叶绿素相对含量、光合作用,罂粟的光合速率、气孔导度和胞间CO2浓度均随施用浓度的增加而降低;2甲4氯对罂粟光合作用的影响速度较快,喷药后2 h即有显著变化,这一结果与这种除草剂的作用特点是一致的。8 g/L这一浓度可快速、高效地影响罂粟光合作用,并导致其形态畸变、代谢停滞而死亡。     

Influence of alginate oligosaccharides on growth, yield and alkaloid production of opium poppy (Papaver somniferum L.)

Opium poppy (Papaver somniferum L.), an important medicinal plant, produces several opiate alkaloids including morphine, thebaine, codeine, papaverine and noscapine. Polysaccharides, such as sodium alginate, have been used in depolymerized form as wonderful promoters of plant growth. The present study has revealed that application of alginate oligosaccharides (AO), obtained from sodium alginate irradiated by Co-60 gamma rays, significantly enhances certain physiological/biochemical parameters as well as the overall growth of opium poppy. The highest dose applied was the most effective in increasing the morphine and codeine contents as well as the overall yield of crude opium per plant.     

An effective biophysical indicator for opium yield estimation

Opium is a narcotic obtained from opium poppy and raw materials of heroin for illegal drug trade. Information on opium production is important for governments and international communities to understand the scale of illegal drug trade and to implement drug fighting policies. Opium production can be estimated from opium yield and poppy cultivation acreage. Poppy cultivation acreage in turn can be estimated using remote sensing technique. This study explores the feasibility of assessing opium yield using remote sensing technique. The objective of this study is to find an effective biophysical indicator that can be related to both opium yield estimation and remote sensing measurements. Data are obtained from three years ground experiments conducted in an official farm in North-Western China. Opium yield and main plant and environmental parameters of opium poppy are measured. A linear regression analysis measures the relationship between opium yield and main plant parameters. A strong correlation between opium yield and leaf area index (LAI) in flowering and harvesting periods of opium poppy is observed (R² = 0.826 and 0.862 respectively). LAI is a good indicator during flowering and harvesting periods and can be used to build a model for opium yield estimation. Furthermore, LAI can be retrieved using remote sensing at a region scale. The study shows that remote sensing could be used to estimate opium yield in opium poppy concentrated regions, and that a more comprehensive and precise opium production information could be obtained for further analysis of illegal drug circulating trend and policy.     

烟草转硝酸还原酶基因高效遗传转化研究

通过对农杆茵介导烟草遗传转化方法的优化,建立了快速高效烟草叶盘遗传转化体系.用0D600为0.5的农杆茵悬浮液浸染大小约1.0 cm×1.O cm烟草叶盘5～10 min,再置于MS附加2.25 mg/L 6-BA和0.10 mg/LNAA的分化培养基上,在100 mg/L卡那霉素选择压下,21～28 d可获得抗性不定...     

抗生素对青香蕉苹果叶片再生的影响

以青香蕉苹果组培苗幼叶为试材,研究了卡那霉素、头孢霉素和羧苄青霉素对青香蕉苹果叶片不定芽再生的影响。用继代10天左右的新梢顶部新展开叶片作为外植体,分别接种在MS＋2．0mg／LBA＋0．3mg／LTDZ＋0．8mg／L IAA＋30．0g／L蔗糖＋6．0g／L琼脂的再生培养基上,添加不同浓度的抗生素。结果表明：5mg／L卡那霉素极显著地抑制青香蕉苹果叶片不定芽再生,600mg／L头孢霉素和400mg／L羧苄青霉素均能完全抑制叶片不定芽再生。     

化学防除罂粟的可能性分析

简述了罂粟生物学特征和罂粟毒品原植物危害,介绍了杀灭罂粟毒品原植物的方法,指出了利用除草剂灭杀罂粟的可能性.