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为探究与我国优良地方猪种乌金猪特性相关的基因机制,拟构建其基因组文库。取乌金猪肝脏组织,提取大小50kb以上的基因组DNA,利用限制性内切酶Bcl I对基因组DNA进行随机酶切和低熔点琼脂糖电泳方法回收10~23kb的DNA片段。以EMBL3作为载体,经BamH I酶切和去磷酸化处理后,与上述纯化的目的DNA片段连接,在体外包装成重组噬菌体,重组噬菌体转染宿主菌KW251,构建成乌金猪基因组文库。文库的效价为24×109pfu/mL。乌金猪基因组文库的成功构建,为进行其相关功能基因和基因组区域的识别,基因组DNA和调控元件的克隆与功能分析等后续研究奠定了良好的基础。 相似文献
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利用大肠杆菌-链霉菌穿梭质粒pHZ1358作为载体,构建了小单孢菌噬菌体ΦHAU8的基因组文库,文库质粒酶切结果表明,噬菌体ΦHAU8基因文库中的质粒DNA是由载体pHZ1358和噬菌体基因组片段组成的. 相似文献
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为了克隆决定染色体形成的特异DNA片段YR-DNA,以λExCell为载体,克隆经限制性内切酶EcoRI消化后的水稻基因组DNA,λ噬菌体体外包装构建了滴度为1.2×106 pfu/ml,重组效率达86%的小型水稻基因组文库.随机选取了50个重组克隆,质粒释放后进行酶切鉴定,插入序列的大小为0.5~7 kb,平均为3 kb.以水稻基因组DNA为探针对基因组DNA文库进行筛选,从10 000个重组子中选出200个杂交信号较强的阳性克隆,质粒释放后点渍杂交进行第2轮筛选,从中选取40个杂交信号较强的重组子,再次进行斑点杂交,选取10个杂交信号最强的重组子.酶切并回收基因组插入片段,标记特异的重组片段,与不同酶切后的水稻基因组DNA进行Southern杂交,其中有两个探针杂交后基因组酶切带上杂交信号呈弥散状,表明重组片段为散在重复序列. 相似文献
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温尚昆 《山东农业大学学报(自然科学版)》2008,39(2):188-190
提取假单胞杆菌PsJN总DNA经酶切后,与载体质粒Puc18链接,并转化E. coli DH 5α,从而构成假单胞杆菌PsJN的基因文库.用PCR方法扩增基因文库,所得PCR产物点于芯片上,从而制备PsJN DNA芯片.分别提取不同C源培养的PsJN的总RNA,把不同C源培养的PsJN的总RNA反转录为DNA,用Cy3,CY5分别标记反转录的DNA.通过杂交检测芯片,并获得杂交图像. 相似文献
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温尚昆 《山东农业大学学报(自然科学版)》2005,36(4):521-523
提取金黄色葡萄球菌px—1总DNA经酶切后,与载体质粒Puc18链接,并转化E.coli DH5α,从而构成金黄色葡萄球菌px—1的基因文库。用PCR方法扩增基因文库,所得PER产物点于芯片上,从而制各px—1DNA芯片。分别提取不同盐浓度培养的px—1的总RNA,把不同盐浓度培养的px—1的总RNA反转录为DNA,用Cy3,CY5分别标记反转录的DNA。通过杂交检测芯片,并获得杂交图像。 相似文献
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8.
[目的]研究细菌过氧化酶基因的克隆方法。[方法]培养扩增E.coli W3110,提取其基因组DNA,采用限制性内切酶Sau3A I对其进行部分酶切,分离纯化1.5 kb以上的DNA片段。将经BamH I酶切的大肠杆菌质粒pUC18与经Sau3A I部分酶切的不同片段用T4连接酶进行连接,并转化大肠杆菌DH5α。通过BHI-单宁酸培养介质,筛选出含有活性过氧化氢酶基因的重组子。[结果]经酶切和PCR鉴定,证实所克隆的过氧化氢酶基因是正确的,与理论相符。[结论]该研究结果为快速简便地克隆筛选活性细菌过氧化氢酶基因奠定了基础。 相似文献
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《郑州牧业工程高等专科学校学报》2019,(4)
为获取与禽白血病病毒(Avian leukemia virus, ALV) p27抗原高亲和力结合的特异性多肽,原核表达并制备了高纯度的ALV p27蛋白,以纯化的ALV p27蛋白包被ELISA板,用M13噬菌体随机进行筛选。经过4轮淘选,ELISA鉴定噬菌体单克隆抗体与ALV p27蛋白的亲和力,筛选出4个与ALV p27蛋白具有高亲和力的噬菌体单克隆抗体进行DNA测序,并推导出多肽的氨基酸序列。 相似文献