酸性α-醋酸萘酯酶染色法在鳜细胞免疫水平检测中的应用研究

研究了酸性α-醋酸萘酯酶染色法在鳜细胞免疫水平检测中应用的可行性。用不同比重的淋巴细胞分离液对鳜外周血中的淋巴细胞进行分离,结果表明比重为1.080的分离液可最大程度地将鳜外周血中的淋巴细胞分离出来。用酸性α-醋酸萘酯酶染色法对分离出的淋巴细胞进行染色,结果显示最佳的染色条件为在pH6.0~6.5的孵育液中37℃孵育90 m in,然后2%甲基绿37℃复染10 m in,酸性α-醋酸萘酯酶阳性细胞胞核被染成绿色而胞浆被染成红色,阴性细胞胞核和胞浆都被绿染。对正常未免疫鳜与嗜水气单胞菌脂多糖和鳜病毒主要衣壳蛋白免疫一周后的鳜外周血淋巴细胞染色计数,结果酸性α-醋酸萘酯酶阳性细胞所占的比例分别为15%~18%、33%~40%和26%~29%,方差分析表明免疫组与对照组阳性率差异极显著,说明α-醋酸萘酯酶染色法可用于鳜细胞免疫水平的检测。     

响应面分析法优化α-环糊精的酶转化工艺

为获得较高的α-环糊精转化产率,采用单因素实验和响应面实验方法,筛选底物种类、底物浓度、加酶量、酶作用时间、作用温度和pH等多个单因素,对海洋芽孢杆菌Y112产的α-环糊精葡萄糖基转移酶产α-环糊精的条件进行了优化。然后利用Plackett-Burman实验筛选得到影响α-环糊精转化率的3个主要因素:底物浓度、温度和pH值。最终采用响应面分析法得到的最佳转化条件为马铃薯淀粉浓度为5%,加酶量200 U/g(淀粉),pH值为8.4,温度30℃,200 r/min反应6 h,α-环糊精转化率均值为28.67%,比优化前的产率提高了2.48倍。     

鲈α-珠蛋白基因的克隆和序列分析

从鲈头肾cDNA文库中随机挑取噬菌斑,作为模板,以λZAPExpress载体两端含有的T3和T7启动子序列设计引物,用PCR方法扩增插入片断,从中克隆到血红蛋白α亚基的cDNA (Genebank登录号为EU588586).该cDNA包含435 bp的开放阅读框,编码144个氨基酸.计算其可能的分子量为15864.51,PI为8.83.序列比较分析结果表明,在近端与血红素结合的组氨酸高度保守,与大菱鲆α类珠蛋白同源性最高,达83.3%,与金鲈和大西洋鳕的同源性分别为72.7%和67.8%,与非洲爪蟾α-珠蛋白同源性最低,为2339.4%.通过构建系统进化树,对鲈α-珠蛋白的系统演化进行了分析,并对其二级和三维结构进行了预测.     

17α-羟基-20β-双羟孕酮诱导泥鳅排卵的效应

有关17α-羟基-20β双羟孕酮[17α-Hydroxy-20β-dihydroprogesterone(4 Pregnen-17α-20B diol-3one)](以下简称17α-20βP)对鱼类排卵效应及其生殖机理作用的研究,自七十年代以来,国外已开展了这方面的工作。Schuetz, A.(1974),Jalabert, B.(1978)和Jalabert, B.et al.(1978)曾论述过,用脑垂体促性腺激素(GTH)诱导鱼类卵细胞的成熟是通过中介物质性类固醇激素在起作用的。Jababert,B.(1976)叙述了用类固醇激素(17α-20βP)能诱发虹鳟鱼的卵细胞达到最终成熟。Montalembert.     

生产α-淀粉的成套设备及工艺设计

α-淀粉作为饲料中的粘合剂，特别是作为鳗用配合饲料中粘合剂应用非常广泛，在国内α-淀粉的来源是通过直接进口或者采用进口的设备来制取的。目前，国内各地为降低饲料成本，开发国内的淀粉资源，开始自己研制简易的α-淀粉生产设备。用膨化机生产α-淀粉就是一种比较简易的生产设备。     

17α-甲基睾酮对食蚊鱼形态雄性化及目标基因表达的影响

为研究17α-甲基睾酮(17 α-methyltestosteron,MT)对生长发育期间的雌性食蚊鱼形态雄性化及目标基因表达的影响,并探讨臀鳍雄激素受体基因(ARα) mRNA表达水平作为监测养殖水体雄激素类污染物的有效生物学标记的可行性,使用浸浴法以0.5、5、50和500 nmol/L 4个MT浓度为雌性食蚊鱼幼鱼染毒,设置对照组和平行组,暴露实验持续21 d,定量测定了幼鱼体长(BL)、体质量(BW)、身体健康指数(CF)以及臀鳍第3鳍条长度(FL)、分节数(FJ)和最宽处宽度(FW);ARα mRNA的表达水平.结果显示:与对照组相比,雌性幼鱼暴露21 d后BL、CF均没有显著变化,只有高浓度组(50和500 nmol/L)食蚊鱼的BW有显著下降(P＜0.05);雌性幼鱼臀鳍第3鳍条FJ显著增加,FL随之延长,并且FW也出现显著增宽(P＜0.05);雌性幼鱼暴露于MT21 d之后,ARα mRNA表达水平呈现与剂量相关的上升(P＜0.05).MT的雄激素效应明显,导致雌鱼在生长发育过程中出现形态雄性化;ARα基因mRNA表达水平可作为监测养殖水体雄激素类污染物有效的生物标记.     

维生素E对半滑舌鳎垂体α-生育酚转移蛋白基因表达的影响

生育酚转移蛋白(α-tocopherol transfer protein, α-TTP)是一种可以结合维生素E的蛋白,在协助机体转运和调控维生素E含量等方面起到重要作用。维生素E能够影响鱼类垂体中生长和繁殖相关激素的分泌,这是否与α-TTP有关,值得进一步探讨。本实验旨在探究维生素E对半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)垂体α-TTP基因表达的影响。在基础饲料中分别添加维生素E(DL-α-生育酚乙酸酯) 0、200、400、800和1 600 mg/kg,对半滑舌鳎成鱼(464.0±2.6) g进行持续60 d的养殖实验;另外,在L-15培养基中添加0、18和54μmol/L的维生素E,对半滑舌鳎垂体细胞进行为期3 d的体外原代培养实验。分别取垂体组织和垂体原代细胞,克隆α-TTP基因,并通过实时荧光定量PCR分析α-TTP基因相对表达量。结果显示,α-TTP基因全长3 964 bp,编码293个氨基酸;α-TTP基因在半滑舌鳎各组织均有表达,其中,在脾脏中表达最高,其次是肾脏,在胃中表达量最低;α-TTP基因表达量随着饲料中维生素E含量的增加而呈先升高后下降的变...     

草鱼α-淀粉酶基因组织表达特征和早期发育的表达谱

为获知α-淀粉酶(α-amylase,AMY)在鱼体内的组织分布以及在鱼类早期发育过程中的特征,从消化酶的角度阐明鱼类对糖的利用机理,实验在获得草鱼(Ctenopharyngodon idellus)α-淀粉酶基因编码区序列的基础上,应用实时定量PCR(real-time PCR)检测了草鱼α-淀粉酶基因在不同组织和早期发育不同时期的相对表达量。序列分析结果显示:草鱼的α-淀粉酶的ORF框长1 539 bp,编码512个氨基酸,氨基酸同源性比对发现草鱼α-淀粉酶与其它物种的同源性很高,且在关键活性位点处均保守,其中与斑马鱼(Danio rerio)α-淀粉酶氨基酸的同源性最高,为92%,与人的同源性最低,为72%。对血液、心脏、肝胰脏、肾、肌肉、脑、前肠、中肠、后肠9个组织定量分析结果显示:草鱼α-淀粉酶基因在肝胰脏中的表达量最高,在前肠、中肠和后肠能检测到明显的表达,在心脏和肾脏仅能检测到微弱的表达。早期发育定量分析结果显示:从未受精卵到神经胚都没有检测到α-淀粉酶基因的表达,从器官形成期开始检测到微弱的表达,一直到出膜后48 h表达都很微弱,出膜72 h之后表达量升高较明显。对组织分布和早期发育的定量研究结果分析表明:肝胰脏并不是草鱼生成α-淀粉酶的唯一场所,在肠道中也有α-淀粉酶的合成;从出膜72 h仔鱼开口摄食之后,α-淀粉酶基因表达量增加得较明显,推测摄食能够促进α-淀粉酶基因的表达。     

凡纳滨对虾α-淀粉酶基因的SNPs检测

利用PCR产物直接测序法,对凡纳滨对虾SPR和SPF 2个品种共40个样本的α-淀粉酶基因(GenBank序列号:AJ133526)的单核苷酸多态性(SNP)进行了研究。找到9个SNPs,分别为:C127T、A138G、T951C、T1083C、C1457T、A2147C、A2226G、A2297G和T2306C。其中1个SNP是第4外显子中的错义突变,2个SNPs分别是第5和第7外显子中的同义突变,6个SNPs是内含子中的突变。这些结果可为凡纳滨对虾的研究提供遗传学依据。     

凡纳滨对虾α-粉酶基因的SNPs检测

利用PCR产物直接测序法,对凡纳滨对虾SPR和SPF2个品种共40个样本的仅一淀粉酶基因（GenBank序列号：AJ133526）的单核苷酸多态性（SNP）进行了研究。找到9个SNPs,分别为：C127T、A138G、1951C、T1083C、C1457T、A2147C、A2226G、A2297G和T2306C。其中1个SNP是第4外显子中的错义突变,2个SNPs分别是第5和第7外显子中的同义突变,6个SNPs是内含子中的突变。这些结果可为凡纳滨对虾的研究提供遗传学依据。     

牛、羊卵母细胞孤雌激活的研究

本实验主要比较了离子霉素、电脉冲2种方法激活牛、羊体外成熟卵母细胞的效率。2种激活方法中,牛胚胎卵裂率无显著差异(90.61%VS94.40%,P>0.05),而离子霉素激活胚胎的囊胚发育率极显著高于电激活方法(12.3%VS2.4%,P<0.01)。2种方法对羊的胚胎的研究中,羊胚胎卵裂率无显著差异(72.4%VS77.4%,P>0.05)。但是离子霉素激活胚胎的囊胚发育率显著高于电激活方法(3.67%VS10.4%,P<0.05)。本实验中还比较了用化学激活(离子霉素)激活牛体外成熟卵母细胞后,用SoFaa体系培养,换液与不换液对孤雌激活胚胎体外发育的影响。结果表明:在第四天不换液的胚胎卵裂率和囊胚率极显著高于换液的胚胎(11.64%VS3.49%,P<0.01)。     

鸡粪浆及5种微藻对轮虫脂肪酸组成的影响

采用投喂鸡粪浆的方法培养轮虫,并与5种微藻培养轮虫的脂肪酸组成进行了比较。结果表明:鸡粪轮虫具有较高的营养价值,HUFA含量达25.9%,仅次于小球藻轮虫和新月菱形藻轮虫,EPA和DHA的含量分别为11.2%和4.4%;在5种微藻培养的轮虫中,用小球藻、新月菱形藻和球等鞭金藻培养的轮虫营养价值较高,而用微绿球藻和衣藻培养的轮虫营养价值相对较低;轮虫的脂肪酸组成受饵料影响显著,但又不完全取决于饵料。     

虾夷扇贝胚胎及早期幼虫酯酶和过氧化物酶的组织化学研究

采用组织化学的方法对虾夷扇贝从卵细胞到D形面盘幼虫内的酯酶(NSE)和过氧化物酶(POD)进行定性定位研究。试验结果表明,NSE和POD均广泛存在于虾夷扇贝的胚胎和幼虫中,自卵细胞开始就已存在。从卵细胞到原肠胚均呈比较均一的NSE强阳性或POD阳性。在担轮幼虫期,中央的内脏团原基呈NSE极强阳性或POD强阳性,其余细胞则呈NSE强阳性或POD阳性。D形面盘幼虫期,外套膜和内脏团呈NSE极强阳性或POD强阳性,其余部位则呈NSE强阳性或POD弱阳性。     

地塞米松对ND免疫鸡主要免疫器官及抗体滴度的影响

将75只1日龄非免疫健康罗曼蛋鸡随机均分为地塞米松高剂量组(12.5mg/mL)、低剂量组(6.25mg/mL)和阴性对照组,同时进行了鸡新城疫免疫接种;分别于免疫后7、14、21、28、35d随机取5只心脏采血后分离血清,检测鸡新城疫HI抗体效价,同时摘取脾脏、胸腺和法氏囊并称重,计算免疫器官指数。结果表明,试验组的ND抗体效价与免疫器官指数显著低于对照组(P<0.05),而且高剂量组低于低剂量组。     

脂肪酸营养对鱼类生长、脂代谢及免疫性能影响的研究进展

脂肪酸在鱼类营养中起着重要的作用,脂肪酸作为能源物质为鱼类的生长发育等各项活动提供能量,并协助脂溶性维生素的吸收和体内运输。不同鱼类因其生活环境不同,对必需脂肪酸的需求种类也不同。由于不同脂肪水平与不同脂肪酸来源的饲料因其脂肪酸含量或脂肪酸组成不同,不同鱼类或鱼类的不同生长阶段对脂肪源的利用也不同,那么饲料的脂肪水平或脂肪酸组成不同就对鱼类的生长、脂代谢及免疫性能产生一定的影响作用。必需脂肪酸作为鱼类重要的脂肪酸营养物质同样影响鱼类的生长、脂代谢及免疫性能。本文从脂肪酸营养对鱼类生长、脂代谢及免疫性能的影响等方面进行综述,并对今后的研究重点进行了展望。’     

灰关联分析法在大沽河青岛段水质评价中的应用

利用大沽河干流青岛段6个水质监测控制断面2003～2007年的年均水质监测数据,采用灰关联分析法,通过各断面水质的多个水质评价因子与水质标准的距离综合分析,依据关联度计算结果全面系统的评价了大沽河干流青岛段水质总体状况与变化趋势,并结合单因子法评价结果,对采用灰关联分析法与单因子评价法两种评价方法进行分析比较和探讨,为科学合理评价总体水质状况提供重要技术参考。     

花生四烯酸对雨生红球藻细胞生长和虾青素含量的影响

研究了不同质量浓度花生四烯酸对雨生红球藻细胞生长和虾青素含量的影响。结果表明,适宜质量浓度的花生四烯酸(62.5 mg/L)能促进雨生红球藻细胞的生长,而低质量浓度(0.1~12.5 mg/L)和高质量浓度(312.5~1562.5 mg/L)的花生四烯酸均能抑制雨生红球藻细胞的生长;花生四烯酸能促进雨生红球藻虾青素的积累,随着花生四烯酸质量浓度的增加,雨生红球藻虾青素含量也逐渐增加,当花生四烯酸质量浓度为312.5 mg/L时,虾青素的含量最高,达3.67 mg/L,比对照组提高48.8%。     

基于遗传算法湖泊水质富营养化的投影寻踪分析

根据湖泊富营养化特性,选择总磷(TP)、总氮(TN)、耗氧量(CODMn)、透明度(SD)、生物量共5个指标作为评价因子,建立湖泊富营养化评价的投影寻踪分析模型,采用遗传算法对评价模型进行优化,并将该模型应用于我国8个湖泊富营养化程度的评价。研究表明,投影寻踪回归分析法,避免了传统评价方法由于主观原因造成的误差,评价结果合理可信,评价方法简单易行,为湖泊水体营养化状态的评价提供了新途径。     

基于遗传算法湖泊水质富营养化的投影寻踪分析

根据湖泊富营养化特性,选择总磷(TP)、总氮(TN)、耗氧量(CODMn)、透明度(SD)、生物量共5 个指标作为评价因子,建立湖泊富营养化评价的投影寻踪分析模型,采用遗传算法对评价模型进行优化,并将该模型应用于我国8个湖泊富营养化程度的评价.研究表明,投影寻踪回归分析法,避免了传统评价方法由于主观原因造成的误差,评价结果合理可信,评价方法简单易行,为湖泊水体营养化状态的评价提供了新途径.